临八 --- 高校 ---五、脂类细胞化学——苏丹ⅲ染色法.doc

SDU 2012 级临八 高校 201217232023 2013.10.21- 1 -五、脂类细胞化学五、脂类细胞化学————苏丹苏丹ⅢⅢ染色法染色法【实验目的】 了解脂肪染色的原理、操作步骤及脂类标本制片原理 【实验原理】 脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡 切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液其染色方法有脂溶 性染料显示法、化学显示法和特异染色法等 脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹 III、苏丹 IV 或者苏丹黑等溶于脂类，而使 脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉 脂肪苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化苏丹染料是一种脂 溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹 染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色 脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样 可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶 解丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。

用这 些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累常 用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀 用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂 肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、铺片法 【实验材料】 1. 试剂：苏丹Ⅲ染液 、70%乙醇溶液、甲醛钙 2. 器具：显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，镊子，剪刀 3. 材料：小鼠 【实验步骤】 1. 断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜， 用剪连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定 20 分 钟 2. 吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液 3. 用 70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤 2 的操作，再进行一次冲洗 4. 用苏丹Ⅲ染色 30 分钟 5. 吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，用显微镜观察 【实验结果实验结果】 镜检照片：【实验结果分析与注意事项实验结果分析与注意事项】 1.制片过于小心，未对肠系膜适度抻拉，导致细胞堆叠，观察效果不好。