山鸡椒根挥发油GC-MS特征成分及指纹图谱研究.docx

    山鸡椒根挥发油GCMS特征成分及指纹图谱研究    赵欧　刘真美　班大明摘要：利用气相色谱建立山鸡椒（Litsea cubeba）根部挥发油的指纹图谱，用水蒸气蒸馏法提取10批黔产山鸡椒根部挥发油，采用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）检测，以β-柠檬醛为对照，使用浙江大学中药指纹图谱相似度计算软件计算有关参数结果标定了7个共有峰，这7种成分的相对含量共约占挥发油总成分的86.8%～92.3%，其保留时间和峰面积形成了特征-性指纹图谱结果表明，指纹图谱和定性分析相结合可作为山鸡椒根部的鉴定和内在质量评价依据关键词：山鸡椒（Litsea cubeba）根；挥发油；气相色谱-质谱联用仪；指纹图谱：R931.71；0657.7；Q586 ：A ：0439-8114（2016）09-2356-03山鸡椒（Litsea cubeba）为樟科木姜子属落叶灌木，俗称山苍子、木姜子，分布于湖北、湖南、四川、广西、贵州、云南、甘肃、河南、陕西等地资源丰富山鸡椒挥发油广泛存在于叶、花、果实、树皮和根中山鸡椒挥发油是由近30种化学物组成的，已确定化学结构的化学成分有近20个，主要为柠檬醛含量一般在60%以上，其次是柠檬烯、甲基庚烯酮、丁香酚、蒎烯、茨烯、芳樟醇、香叶醇、月桂烯等。

对山鸡椒果实挥发油的研究比较多，但对于其根部挥发油的研究较少山鸡椒根也可以入药，在山鸡椒的综合利用方面进行了多领域的研究探索，但尚未形成从品种、栽培到科学提取分离、副产品加工利用的科学合理的开发体系利用气相色谱的高效分离能力与质谱的高鉴别能力，对贵州山鸡椒的根部成分进行检测与鉴定，通过对贵州各地区山鸡椒根部油含量和有效成分的分析评价并建立其指纹图谱，对山鸡椒在创制成药新品种、天然香料及综合利用等方面提供科学依据1 材料与方法1.1 仪器与试剂GC-MS联用仪、挥发油提取器、浙大指纹图谱研究软件等；10批山鸡椒根（具体见表1）；正己烷等化学试剂1.2 分析条件岛津GC/MS-QP2010联用仪，载气He，石英毛细管柱SE-54MS，30m×0.25mm×0.25μm，升温程序60℃保持4min，以5℃/min升至185℃保持1min以6℃/min升至190℃，保持1min柱前压80kPa柱流量1mL/min，进样量0.6μL进样口温度270℃分流比10：1离子源为EI，电离能70eV，离子源温度270℃，质量范围m/z30-400：扫描周期1s1.3 山苍子根部挥发油的提取分别取100克山苍子根部粗粉，加200mL水用挥发油提取器提取5h，至近干时，收集挥发油并称重，获得具有特殊香味的黄色液体。

用于气相色谱一质谱分析1.4 试验方法测定方法：精密吸取供试品溶液0.6μL，注入气相色谱一质谱联用仪进行分析测定，以基线分离度良好的12号峰（β-柠檬醛）为自身内标，指定各样品中β-柠檬醛参照峰（S）的相对保留时间和峰面积值为1，计算10批样品中特征性成分相对保留时间（RTR）和相对标准偏差分析时间考察：吸取4号供试品溶液0.6μL，注入气质联用仪运行40min，记录色谱图，发现33min以后已无明显色谱峰，因此分析时间定为40min精密度测定：精密吸取同一样品（4号）供试液各0.6μL，分别连续进样5次结果26个峰面积较大的共有峰相对保留时间RSD为0.00%-0.06%，相对峰面积的RSD为0.99%-2.03%，表明方法的精密度良好稳定性试验：精密吸取同一样品（4号）供试液各0.6μL，分别于0、2、4、8、24h进样结果11个峰面积较大的共有峰相对保留时间RSD为0.01%～0.35%，相对峰面积的RSD为0.15%-3.02%，表明供试品溶液在24h内测定指纹图谱是稳定的重复性试验：分别取同一样品（4号）按“1.3”平行制备5份平行供试液进样测定11个共有峰相对保留时间的RSD为0.01%-1.18%，面积百分比基本一致，RSD小于1%，表明方法重复性良好。

2 结果与分析2.1 GC-MS定性定量分析取山苍子根部挥发油0.6μL（正己烷溶液），按“1.3”方法制备10批样品的供试，按“1.2”条件取供试液0.6μL进样测定，得总离子流色谱（图1），用气相色谱一质谱联用仪分析检测，通过岛津GC-MS-QP2010化学工作站检索标准质谱图库，并结合有关文献解析，确认各地区山鸡椒挥发油的化学成分峰面积相对百分含量分析通过岛津GC-MS-QP2010化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行计算，求得各化学成分在挥发油中的相对百分含量2.2 共有特征性成分指纹峰的确定比较各样品的GC-MS分析结果，发现10批样品中存在11个共有化学成分，其中有7种特征成分的峰面积较大，相对含量共占挥发油总成分的86.8%-92.3%，且与计算机标准质谱库中化合物的匹配度均大于等于90%：而其他成分的峰面积较小，相对含量为7.7%-13.2%，且部分化合物匹配度小于80%或难以准确鉴定故确定上述7种共有成分的色谱峰作为黔山鸡椒挥发油特征性成分指纹峰结果见表2、表3采用浙大指纹图谱处理软件，将工作站数据按软件要求转换为规定数据格式Excel文件，采用夹角余弦算法计算7个特征成分的RTR、相对峰面积与指纹图谱共有模式的相似度。

10批样品的相对峰面积和之均值除样品7号为0.57（最小），样品1号为2.722（最大），其他8个样品均在0.572-2.700之间3 小结与讨论1）采用程序升温使10批山苍子根部挥发油的22个色谱峰均在40min内分离完全，在该条件下所获得的TIC图中大部分化学成分色谱峰的分离度均良好它们的保留时间和峰丰度极具规律性，形成了山苍子根部挥发油独特的GC-MS指纹图谱使用GC-MS重点分析出最能代表山苍子根部挥发油特征的7种化学成分为α-蒎烯、β-水芹烯、D-柠檬烯、桉油精、香茅醛、柠檬醛、（E）-柠檬醛，作为山苍子根部挥发油的特征成分2）采用浙大指纹图谱处理软件，将工作站数据按软件要求转换为规定数据格式Excel文件，采用夹角余弦算法计算7个特征成分的RTR、相对峰面积与指纹图谱共有模式的相似度10批样品的相对峰面积和之均值除样品7号为0.57（最小），样品1号为2.722（最大）其他8个样品均在0.5722.700之间3）特征性成分指纹图谱可以标识中药的化学特征，最大限度展示中药的整体内在品质为了对贵州产山鸡椒资源建立客观、整体和多指标的综合评价体系，本试验以其所含挥发性成分为控制指标对贵州产地的10批山苍子样品进行了测定，以β-柠檬醛为参照峰，得到稳定的共有指纹峰，建立了山鸡椒根部挥发油的标准指纹图谱，可作为山鸡椒根部的鉴定和内在质量评价依据。