炭疽芽胞杆菌Bacillusanthracis课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,,,,,,,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,,*,1,,第一节 炭疽芽胞杆菌（,Bacillus anthracis,，,B.anthraci,),一、临床意义,炭疽是人畜共患的急性传染病,主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染,皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，,并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,1 第一节 炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthra,2,致病物质,荚膜：,抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散,炭疽毒素：,保护性抗原、致死因子、水肿因子,2致病物质荚膜：,3,所致疾病,,炭疽病,：,传染源：患病食草动物及其制品或被污染物,传播途径：接触,——,皮肤炭疽,食用,——,肠炭疽,吸入,——,肺炭疽,可并发败血症，,死亡率极高,3所致疾病 炭疽病：,4,乙类传染病,发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,4乙类传染病病后可获得持久免疫力,5,形态染色,:,致病菌中最大的,G,+,杆菌，,两端平切、竹节状,有毒株可有明显荚膜,二、 微生物特性,,炭疽芽胞杆菌,亚甲基蓝染色,×1000,,革兰染色,×1000,5形态染色:二、 微生物特性 炭疽芽胞杆菌,6,芽胞,——,椭圆形，小于菌体，位于菌体中央,多在有氧条件下形成，,25,～,30℃,，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞,在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，,尸,体严禁解剖,,6芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央,7,培养特性：,需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温,度,30,～,35℃,普通培养基,—,扁平、粗糙、不透明、灰白色、,无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边,缘呈卷发状,7培养特性：,8,BAP,：,12,～,15h,不溶血，,18,～,24h,轻微溶血,其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,8BAP：12～15h不溶血，18～24h轻微溶血炭疽杆菌在,9,肉汤,—,絮状沉淀生长,明胶,—,37℃18,～,24h,表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。

NaHCO,3,BAP,：,,--,有毒株,—,5%CO,2,、,37℃24,～,48h,、产生荚膜,呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状,(,鉴别要点,),--,无毒株,—,粗糙型菌落,,,9肉汤—絮状沉淀生长,10,生化反应：,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，,有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气,水解淀粉、还原硝酸盐,不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不,分解尿素,在牛乳中生长,2,～,4,天牛乳凝固→缓慢胨化,触酶（,+,）、卵磷脂酶弱（,+,）,10生化反应：分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，,11,,抗原构造：,菌体多糖抗原：,,--,与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（,Ascoli,热沉淀反应）特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、,14,型肺炎链球菌、人,A,血型抗原发生交叉反应11 抗原构造：,12,荚膜多肽抗原：,,--,与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细,菌生长和扩散,,--,荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义,芽胞抗原：,有免疫原性和血清学诊断价值,12荚膜多肽抗原：,13,炭疽毒素：,--,保护性抗原（,PA),、致死因子（,LF,）、水肿,因子（,EF,）三个组分,--,单独皆无致病性，与,PA,结合才显示出致病性,--,具有抗吞噬和免疫原性,,13炭疽毒素：,14,抵抗力：,--,芽胞抵抗力很强，煮沸,10min,或干热,140℃,3h,才能杀灭,--,在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致,病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数,十年,--,生物武器,14抵抗力：--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃,15,--,芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化,剂较敏感，常用以下方法杀菌：,,1,：,2500,碘,10min,、,,3%H,2,O,2,1h,、,,4%,高锰酸钾,15min,、,,0.5%,过氧乙酸,10min,--,对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、,氯酶素均敏感,15--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化,16,要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,,三、微生物学检验,16要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及,17,标本的采集与处理,皮肤炭疽：病灶深部标本,肺炭疽：痰和血液,肠炭疽：粪、呕吐物,脑膜炭疽：,CSF,、血液,死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消,毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局,限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。

17标本的采集与处理皮肤炭疽：病灶深部标本,18,无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基,污染杂菌固体标本：加,10,倍量生理盐水充分浸泡，振,荡,10,～,15min,、静置,10min,，取悬液,65℃,水浴,30min,或,,85℃5min,杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养,污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加,0.5%,洗涤,剂振荡,10,～,15min,，离心取沉淀物增菌和分离培养,18无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基,19,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,检验程序,皮毛、腐败脏器等,血液,Ascoli,试验,以,NG,制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP,或戊烷脒平板,2%,兔血清肉汤,4-8h,G,染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,19生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏,20,痰、呕吐物、,CSF,及炎症分泌物,2%,兔血清肉汤快速增菌,37℃4h,荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色,G,染色,初步报告,0.2ml,注射小白鼠腹腔，,8h,后解剖,涂片,G,染色、荚膜染色,初步报告,20痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌37,21,涂片染色：,--G,染色、荚膜染色、芽胞染色,—,初步报告,--,荚膜荧光抗体染色,核酸检测：,核酸杂交,分离培养：,--BAP,、戊烷脒多粘菌素,B,平板,--2%,兔血清肉汤增菌→分离培养,21涂片染色：,22,鉴定试验,：,形态和菌落特征,生化试验,:,表,11-1,串珠试验,:,--,接种于含青霉素,(0.05,～,0.5U/ml),的肉汤,中，,37℃ 6h,，大而均匀成串的圆球状菌体,--,与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关,--,类炭疽无此现象,22鉴定试验：,23,青霉素抑制试验：,接种于含青霉素,5,、,10,、,100U/ml,琼脂平板，,37℃24h,,生长 受抑制不生长,串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,,,,23青霉素抑制试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片,24,,噬菌体裂解试验：,AP631,炭疽噬菌体,,NaHCO,3,毒力试验：,接种于含,0.5%NaHCO,3,和,10%,马血清的平板，,,10%CO,2,、,37℃,、,24,～,48h,,有毒株形成荚膜,—,黏液型菌落,无毒株不形成荚膜,—,粗糙型菌落,动物试验：,小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,24 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体,25,植物凝集素试验：,Ascoli,热沉淀试验：,可作追溯性诊断,,25植物凝集素试验：,26,第二节 蜡样芽胞杆菌,(Bacillus cereus,,,B. cereus,,),26第二节 蜡样芽胞杆菌(Bacillus cere,27,一,、临床意义,食物中毒,含菌量达,10,5,/g,以上,呕吐型,——,耐热肠毒素,腹泻型,——,不耐热肠毒素,全眼球炎（外伤后）,心内膜炎、败血症和脑膜炎,27一、临床意义食物中毒,28,夏、秋季多见,食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食,在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见,中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,28夏、秋季多见,29,形态与染色：,- G,+,大杆菌,-,生长,6h,后即形成圆形芽胞、位于,菌体中心或次末端、不突出菌体,-,菌体两端平截，多数呈链状排列,-,引起食物中毒的菌株多有周鞭,毛、无荚膜,二、微生物特性,29形态与染色：二、微生物特性,30,培养特性：,需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适温度,30~35℃,普通琼脂平板：菌落较大，,灰白色，表面粗糙似,毛玻璃状,或,融蜡状,，有,蜡样光泽,,30培养特性：,31,BAP,—,有,β,溶血,卵黄平板,—,生长迅速，培养,3h,后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称,乳光反应,或,卵黄反应,31BAP —有β溶血,32,生化反应：,能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊,精，产酸不产气,能胨化牛乳，液化明胶，,VP,（,+,）、卵磷脂,酶（,+,）,多次传代后生化特性常可改变,32生化反应：,33,抵抗力：,耐热，肉汤中细菌需,100℃20min,才能杀死，,食物中毒菌株的游离芽胞耐受,100℃30min,、,干热,120℃60min,才能杀死,对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉,素、磺胺、呋喃类耐药,33抵抗力：,34,三、微生物学检验,标本采集：,可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。

34三、微生物学检验标本采集：,35,确诊由该菌引起的食物中毒必须,：,从食物中分离出菌数≥,10,5,CFU/g,，提示本菌活跃生长，构成潜在危险,从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和,(,或,),呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,35确诊由该菌引起的食物中毒必须：从食物中分离出菌数≥105,36,检验程序,呕吐物、残留食物等,活菌计数,,接种 普通琼脂平板、,BAP,、卵黄平板,37℃18-24h,纯培养,动物试验（肠毒素测定）,生化反应,血清凝集（分型）,报告结果,直接涂片染色镜检,36检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数 接种,37,检验方法：,直接镜检,分离培养与活菌计数,普通琼脂平板、,BAP,、卵黄平板,鉴定与分型：,根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定,生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测,,37检验方法：,38,,第三节产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌,38 第三节产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌,39,一、产单核细胞李斯特菌,（,Listeria monocytogenes,,),,隶属于李斯特菌属,,39一、产单核细胞李斯特菌（Listeria monoc,40,（,一,）,临床意义,,李斯特菌属有,7,个种，只有该菌对人和动物致病,分布广泛，土壤、水、植物、人和动物粪便中均存,在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出,能引起多种野生动物和家畜感染（羊、马、狗、猫、,鸟、鱼等）,正常人粪便带菌率达,10%,左右，,70%,的人可短期带,菌。

新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染,40（一） 临床意义 李斯特菌属有7个种，只有该菌对人和动,41,致病物质：,李斯特菌溶血素,O(LLO),——,主要毒力因子,内在素,——,表面蛋白（侵袭性蛋白）,磷脂酶,C,41致病物质：,42,所致疾病,:,健康带菌者是主要的传染源,污染食物，粪,-,口途径传播，通过肠道扩散全身,胎盘和产道,——,感染新生儿,接触病畜及产品,——,眼和皮肤的局部感染,42所致疾病:健康带菌者是主要的传染源,43,孕妇李斯特菌病,新生儿李斯特菌病,成人李斯特菌病,局部感染,43孕妇李斯特菌病,44,（二） 微生物特性,形态与染色：,,G,+,短小杆菌，形态与培养时间有关,-37℃,3,～,6h,，菌体主要呈杆状，随后以球杆状为,主，,3,～,5,天常形成长丝状,无芽胞，一般不形成荚膜，在含血清的葡萄,糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜,44（二） 微生物特性形态与染色：,45,,20,～,25℃,形成周鞭毛，有动力；,37℃,时鞭毛,很少或无,细菌接种半固体培养基，置室温，由于动力,强，细菌自穿刺线向四周弥漫生长，在离琼,脂表面数毫米处出现一个,倒伞形,的生长，是,本菌特征之一,45 20～25℃形成周鞭毛，有动力；37℃时鞭毛,46,培养特性：,兼性厌氧菌、生长温度范围广,0.5,～,45℃,均生长,（,4℃,冷增菌），最适,30,～,37℃,营养要求不高，在含血液、血清、腹水的培养基生,长更好,BAP,—,极小的露滴状、侧光微显蓝绿色→灰白色,菌落。

狭窄的,β,溶血环,萘啶酸选择性平板,—,细密湿润、边缘整齐的兰色圆,形小菌落,肉汤,——,均匀混浊，表面有菌膜,46培养特性：兼性厌氧菌、生长温度范围广0.5～45℃均生长,47,生化反应：,37℃24h,，发酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和水杨素产酸不产气,触酶（,+,）甲基红（,+,）,VP,（,+,）,水解七叶苷、水解精氨酸产氨,CAMP,（,+,）,47生化反应：37℃24h，发酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和,48,分型：,根据,O,抗原和,H,抗原，分,4,个血清型，,,1,、,3,、,4,型可分若干亚型,抗原结构与毒力无关，与地理分布有联系,与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠,杆菌等有共同抗原,48分型：根据O抗原和H抗原，分4个血清型，,49,抵抗力：,耐盐、耐碱、不耐酸,对热、常用消毒剂敏感,多种抗生素敏感，首选氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素等也敏感,对杆菌肽、多粘菌素耐药,49抵抗力：耐盐、耐碱、不耐酸,50,（三）,微生物学检验,标本采集：,血液、,CSF,、宫颈、阴道、鼻烟分泌物等,直接涂片：,,--,在,CSF,标本中成对排列，形如球菌，易误认为肺,炎链球菌,,--,G,染色过度脱色形似流感杆菌,,--,有时与类白喉杆菌也极易混淆,可用该菌,1,型和,4,型及多价荧光抗体染色，同,时作动力检查,50（三） 微生物学检验标本采集：,51,分离培养：,BAP,、巧克力平板,杂菌污染标本可用,20%NaCl,心脑浸液肉汤,2,支,,1,支,—,10%CO,2,，,37℃24,～,48h→,分离培养（,BAP,、萘啶酸选择性平板）,,1,支,—,4℃,“,冷增菌,”,→分离培养（每,24h,一,次，共,4,次，以后每周一次，至少,4,周）,51分离培养：,52,鉴定：,形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出,鉴定,可疑菌落用已知李斯特菌,1,型、,4,型或多价抗,血清做玻片凝集试验进行鉴定,与其他,G,+,菌鉴别,52鉴定：,53,,触酶 动力 马尿酸盐水解,产单核李斯,+ + -,B,群链球菌,- - +,本菌有耐碱耐盐的特点，可用触酶试验与,肠球菌鉴别,53 触酶,54,二、 红斑丹毒丝菌,（,Erysipelothrix rhusiopathiae,，,,E. rhusiopathiae,）,,本菌隶属于丹毒丝菌属,54二、 红斑丹毒丝菌（Erysipelothrix rh,55,（一） 临床意义,,广泛分布于自然界，是许多脊髓动物和无脊,髓动物的共生菌或致病菌,易感动物有小鼠、猪、鱼、火鸡等,主要储存宿主是猪,人类可因接触病畜或其产品而感染,,55（一） 临床意义 广泛分布于自然界，是许多脊髓动物和无,56,毒力与其产生的神经氨酸酶有关，能使 细菌粘附至靶细胞,从事屠宰、经营鱼类和皮革行业的人员及兽医等感染机会较多,通过破损皮肤侵入，引起局限性皮肤病灶，通常称,“,鱼毒,”,或,“,类丹毒,”,56毒力与其产生的神经氨酸酶有关，能使 细菌粘附至靶细胞,57,（二）微生物特性,形态与染色：,,G,+,杆菌，菌体细长、直或稍弯，单个或短链状，慢性期分离的菌落为粗糙型，常呈长丝状，而且有分支及断裂，与放线菌近似,.,无荚膜、无芽胞、无鞭毛,,红斑丹毒丝菌 革兰染色,1000×,57（二）微生物特性形态与染色：红斑丹毒丝菌 革兰染色 10,58,培养特性,:,厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境，传代后有氧环境也能生长，最适温度,30-35℃,。

在含葡萄糖或血清培养基生长旺盛,,58培养特性:,59,BAP,：,35℃24h,可形成两种菌落,光滑型：菌落细小、透明突起、发亮、边缘整,齐、质软易于悬于液体中，毒力较强,粗糙型：菌落较大，颗粒状、扁平、边缘不齐,可呈卷发状，无毒力,BAP,上新分离的菌株有,轻微的,α,溶血，培养时,间延长溶血现象明显，,传代后溶血特性常消失,59BAP：35℃24h可形成两种菌落,60,,在半固体表层下数,mm,处发育最好，常呈带状,含碲盐的培养基,——,黑色菌落,,60 在半固体表层下数mm处发育最好，常呈带状,61,,葡萄糖肉汤：培养,24h,后，呈轻微混 浊，不,形成菌膜，室温静置,2~3,天后，管底有少量,灰色沉淀；粗糙型沉淀较多S-R,变异同时毒力、抗原性也发生变异，但,遗传学上不稳定，常出现互变61 葡萄糖肉汤：培养24h后，呈轻微混 浊，不,62,（三）微生物学检验,标本：病灶边缘组织碎片或皮肤病变抽出液,直接涂片,G,染色镜检：,G,+,细长杆菌，有时长丝形，单独或呈短链状分离培养：,1%,葡萄糖肉汤，,35℃5%CO2,环境增菌，每日移种,BAP,，可出现二种菌落（,S,型和,R,型）,62（三）微生物学检验标本：病灶边缘组织碎片或皮肤病变抽出液,63,鉴定依据：,,G,+,、,H,2,S +,、无动力、触酶,-,、吲哚,-,、,VP -,与产单核细胞李斯特菌鉴别（表,11-2,）,新霉素敏感试验：红斑丹毒丝菌,—R,,产单核李斯特菌,—S,动物毒力试验：对小鼠、大鼠、兔、鸽均有致,病性，,0.2ml,的,2~4,天培养物注入小鼠腹腔，,4-5,天后，败血症而死，心血培养（,+,）,63鉴定依据：,64,第四节,,阴道加特纳菌,,（,Gardnerella vaginalis,,，,GV,）,,属于加特纳菌属,此菌属只有本菌一个种,,64第四节 阴道加特纳菌 （Gardnere,65,一、 临床意义,与非特异性阴道炎（细菌性阴道病）有关,65一、 临床意义与非特异性阴道炎（细菌性阴道病）有关,66,二、 微生物特性,形态与染色：,,--G,染色视菌株和菌龄不同而异，实验室保存,菌株趋向,G,-,，新鲜临床标本中分离的菌株,趋向,G,+,，生长在高浓度的血清中呈,G,+,,--,具有多形性，两端钝圆，无芽胞、无荚,膜、无鞭毛,66二、 微生物特性形态与染色：,67,培养特性,：,,兼性厌氧，营养要求较高，在含,5%,人血琼脂,平板上,3%,～,5%CO,2,、,35,～,37℃,环境中培养,48h,后，可形成,0.3,～,0.5mm,大小、圆形、光滑不,透明的菌落，在兔血平板上可出现,β,溶血，,在羊血平板上不溶血。

67培养特性： 兼性厌氧，营养要求较高，在含5%人血琼脂,68,生化反应：,氧化酶,-,、触酶,-,、尿素酶,-,发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等产酸不产气,水解马尿酸钠和淀粉，吲哚,-,、明胶液化,-,、,甘露醇分解,-,抵抗力：,对氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素、甲硝哒唑敏感，对萘啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶耐药68生化反应：,69,三、微生物学检验,标本采集：,阴道和宫颈分泌物等,直接湿片镜检：,大量阴道上皮细胞，少量脓细胞及无数成簇的细小杆菌群集并吸附于上皮细胞表面，使细胞特别是边缘不清，呈锯齿形，即为线索细胞,69三、微生物学检验标本采集：,70,涂片染色镜检：,观察线索细胞，了解阴道菌群状况，常见大量,小的,G,-,和染色不定的杆菌和球杆菌，而无大的,G,+,杆菌（乳酸杆菌）,pH,测定：,pH,＞,4.5,，提示细菌性阴道病,胺试验：滴加,10%KOH,即发出鱼腥嗅为“,+”,70涂片染色镜检：,71,,分离培养：,,5%,人血琼脂平板、,35℃,、,5%CO,2,环境,48h,鉴定：,菌落、涂片染色、氧化酶,-,、触酶,-,、,糖发酵及其他生化反应,71分离培养：,72,分泌物（阴道、宫颈）,新鲜湿片（找线索细胞）,涂片染色镜检,分离培养（,5%,人血平板）,β,溶血菌落,纯培养（,5%,人血平板）,触酶（,-,）氧化酶（,-,）,GV,的主要鉴定试验,初步报告,最后报告,,72分泌物（阴道、宫颈）新鲜湿片（找线索细胞）分离培养（5%,。