24小时尿蛋白定量测定.docx

24小时尿蛋白定量测定1.原理：尿液中，加入蛋白沉淀剂三氯乙酸和丽春红一s染料后，离心沉淀,蛋白一染料结合物被沉淀出来,将沉淀物加碱液溶解后,进行比色测定,计算蛋白含量.2.标本采集:留取24小时尿液总量，即早上8点前排空尿液，8点到次日早8点之间全部尿液收集到一容器内，用量杯量取总量，记录24h尿量,全部混匀后取5ml于试管内备用，夏天7—8月份应使用防腐剂防腐•按照甲苯0.5ml/100ml尿液加入.3.存放:4. 收到标本后，应立即检验，如不能立即检验，应放置冰箱2—8°C（4—24h）运输：一般条件下运输.5. 标本拒收的标准：留取时间不准确，无尿总量，标本混入大便等.6. 实验材料：6.1玻璃试管，721分光光度计，离心机7. 6.2试剂：100g/L磺基水杨酸乙醇溶液（取水杨酸20g,加水至100ml,与等量95%乙醇混合）；三氯乙酸-丽春红S试剂（称取丽春红一S1.0g,溶在1000ml三氯乙酸中,取此液100ml加水稀释至1000ml,室温下稳定数月）；0.25mol/L氢氧化钠溶液（用4mol/lNA0H溶液稀释）•仪器设备：仪器名称：721分光光度计仪器厂家：上海第三分析仪厂.8. 仪器型号：LENGGUANG校准频率：更换试剂时或仪器维修等情况，必须重新制备标准曲线操作步骤：8.1蛋白标准液的配制:将10g/l的蛋白标准液用生理盐水稀释成1g/l待用.8．2标准曲线的制备：用生理盐水将蛋白标准液稀释成一系列浓度为200、400、600、800、1000、1200、1600mg/L的7个标准管，取试管7支，加个浓度标准液100ul,按标本测定操作步骤，求出相应吸光度，绘制成标准曲线。

附标准曲线表一张）8．3标本测定:8.3.1测定尿量：取24小时尿混匀记录总量取5ml备用8．3．2尿蛋白定性检查:用磺基水杨酸定性，如为阴性，无须定量如果尿蛋白定性为2+—4+，则把尿液稀释2—4倍，最后乘以稀释倍数8.3.3取待测尿液0.1ml于试管内，加三氯乙酸丽春红应用液0.5ml,混匀，置室温10min,离心3500rpm/min离心10分钟，弃去上清液，倒置于滤纸上数分钟，并用滤纸吸去附于管壁上多余的液体3.4加0.25mol/lN0H溶液3ml，混匀后，用560nm波长测定吸光度，查曲线得到蛋白a含量(0.25mol/lN0H调“0”3ml).然后乘以尿量(L)得到24小时尿蛋白含量.8. a检验结果的判断与分析：沉淀物(蛋白)溶解于碱性溶液中则显紫色，显色深浅与蛋白含量成正比9. 临床意义：10.1尿蛋白一过性增高，但小于0.5g/24h，常为功能性蛋白尿10.2尿蛋白持续大于0.15mg/24h，常为病理性，是肾脏疾病的可靠依据10.2.1尿蛋白小于3g/24h：见于急性或慢性肾小球肾炎、肾小球肾病、糖尿病肾小球硬化症、肾小管性蛋白尿(包括活动性肾盂肾炎、镉中毒、肾移植、Fancoli综合症等)。

10. 2.2尿蛋白大于3g/24h:见于肾病综合症11. 参考范围：12. 0—0.12g/24小时变异的潜在来源(注意事项)：12.1如果当尿中血红蛋白超出5mg/L时，特别是尿蛋白沉淀中夹有游离丽春红S和氨基糖甙类药物时，会影响测定结果12.2本法标本用量少操作简便，敏感性为20mg/L，白蛋白/球蛋白的比值对本法无明显影响，线性范围较宽(100—2000mg/L),显色稳定，但操作技术误差较大，所以必须严格按照上面操作规程进行操作，并把握好操作关键步骤参考文献：叶应妩.王毓三主编《全国临床检验操作规程》。