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兔VX2肾癌模型的建立及其影像学表现【摘要】 目的：建立兔VX2肾癌模型，观察模型动物在螺旋CT，MRI及肾动脉造影的影像学表现. 方法：新西兰大白兔20只，采取VX2瘤块种植法成瘤，分别在不同时段行螺旋CT，MRI及肾动脉造影检查. 结果：实验组成瘤率100%. 肿瘤在螺旋CT平扫时呈等密度或低密度灶，增强后呈低密度结节，边缘环形强化. MRI平扫时，肿瘤在T1 WI和T2 WI上分别为较均匀低信号和稍高信号灶，3 wk后肿瘤因坏死、液化而表现为高低密度混合型结节. 肾动脉插管造影，VX2肾癌呈丰富血供表现. 结论：兔VX2肾癌模型的最佳干预期是植瘤后2～3 wk，螺旋CT筛检精确可靠，可作动态观测.　　【关键词】 VX2肾癌；螺旋CT；磁共振成像；肾动脉造影；兔　　0引言　　裸鼠移植瘤常被用于肾癌的实验研究，但因动物体型小，抗干预能力差，不适宜进行肿瘤介入研究. 我们建立兔VX2肾癌模型，利用螺旋CT，MRI及肾动脉造影动态监测瘤灶变化，总结不同时段移植瘤的生长特征，为制定实验动物筛检标准和选择最佳实验干预期提供理论依据.　　1材料和方法　　材料新西兰大白兔20只，体质量～ kg，雌雄不限，由西安交通大学动物实验中心提供；VX2瘤株由第四军医大学提供；PQ6000超高档螺旋CT，Philips NT5型核磁共振，Philips Allura monoplane型数字减影仪；3FSP微导管.　　方法取冰冻VX2瘤细胞悬液，培养成1010/L,将2 mL注入兔双侧后腿皮下即成为荷瘤种兔. 2 wk后形成直径2 cm大小包块，完整切取肿瘤，去除包膜及坏死组织，剪取肿瘤边缘生长旺盛部分，在Hanks液中尽量剪碎成直径1 mm，制成瘤细胞悬液. 30 mg/kg戊巴比妥钠兔耳缘静脉麻醉，俯卧位固定，取右12肋缘下切口3～4 cm，暴露右肾下级后用眼科镊穿刺 cm隧洞，将前述剪碎后瘤组织植入其中，明胶海绵压迫止血后用生物蛋白胶填塞. 全部操作 h内完成，术后青霉素40万U/d,im,3 d. 造模后7,9,11,13,15,17,19,21,23,25及27 d各处死1只兔子. 取新鲜瘤组织标本，戊二醛固定，备透射电镜观察. 取原发瘤灶及淋巴结，肝脏、肺脏可疑转移灶，40 g/L多聚甲醛溶液固定48 h,石蜡包埋,连续5 μm切片,HE染色,光学显微镜观察.　　螺旋CT及MRI检测瘤细胞种植后7,9,11,13,15,17,19,21,23,25,27 d，实验动物在耳缘静脉麻醉后行螺旋CT及MRI平扫及增强扫描. 增强CT造影剂选用欧乃派克5 mL，经耳缘静脉以 mL/s速度［1］注射. 扫描条件：电压120 kV，电流200 mA，螺距，层距5 mm,层厚5 mm. MRI采用头线圈，常规定位后获取冠状位、轴位T1 WI和T2 WI的平扫图像.　　右肾动脉造影肿瘤最大直径增至约3 cm时，行DSA检查. 30 mg/kg戊巴比妥兔耳缘静脉麻醉，仰卧位固定，在右腹股沟区分离并固定股动脉，远端7号丝线提起后剪口植入3FSP微导管，间断注入300 g/L泛影葡胺，显示导管顶端，插至双侧肾动脉开口处，行右肾动脉DSA.　　A: 大体标本； B: 光镜下 ×40.　　图1兔VX2肾癌病理表现　　2结果　　实验动物观察期内无1例感染或死亡. 本组动物全部成瘤，病理分型为鳞癌. 植瘤后2～3 wk，肿瘤体积持续稳定增长，边缘完整、未超出肾脏轮廓，无液化、坏死，无远处转移，是施加实验干预措施的最佳时期. 3 wk后肿瘤体积迅速增大至20～25 cm3以上，中央坏死、液化，压迫周围组织并出现肝、肺、肾门淋巴结转移. 兔VX2肾癌大体标本为突出于肾脏表面的结节样包块，与周围分界清楚，有完整包膜形成，质地较硬，切面呈鱼肉样，晚期瘤体中央因缺血坏死而成豆渣样. 光镜下肾小球和肾小管结构清晰，肿瘤细胞呈弥漫性或片灶状分布，病理分型为鳞癌.　　螺旋CT及MRI表现移植瘤螺旋CT平扫呈低密度或等密度结节状病变，CT值40~50 Hu. 增强扫描呈低密度，边缘薄环状强化，强化环可表现为完整型(图2A)、线条样和结节样(图2B)，与周围正常肾脏组织分界清楚. 肿瘤液化、坏死区CT表现出明显低密度灶［２］. 2 wk时MRI平扫T1 WI和T2 WI像，肿瘤病灶分别为较均匀的低信号和稍高信号，3 wk后因坏死、液化，肿瘤T1 WI低信号灶内出现更低信号， 而T2 WI稍高信号灶内出现高、 低信号混杂结节.　　A, B: 螺旋CT; C: MRI.　　图2兔VX2肾癌的螺旋CT和MRI表现　　表现3FSP导管选择性右肾动脉造影，见肾脏轮廓完整，右肾动脉主干略增粗，下极分支粗细不均，肿瘤周围有增多、紊乱的血管网包绕呈抱球状，可见细小分支深入瘤体内. 正常肾组织浓染，肿瘤区染色剂浅淡.　　图3兔VX2肾癌的DSA表现　　3讨论　　兔VX2肾癌模型已成功建立，但在造模方式上仍有值得改进之处，有关兔VX2移植瘤的影像学及形态学资料有待进一步完善［３］. 本研究实验动物全部成瘤，首先与采用瘤组织块整体植入有关，它提高了单位面积的瘤细胞密度，增强了对机体免疫抵抗的屏障作用. 其次，瘤块修剪在冰块上进行，手术操作无菌、轻柔、熟练， h内完成；植入后明胶海绵压迫止血并用生物蛋白胶堵塞针道，防止瘤块逆出或术野种植；术后预防感染，也与提高动物成瘤率有关. VX2瘤株种植成活后依次经历肿瘤血管形成期、肿瘤血管稳定期和肿瘤血管退化期3个阶段［４］. 成瘤初期肿瘤均呈指数性生长，推测2～3 wk时进入稳定生长期，肿瘤体积增长稳定，无液化坏死和远处转移，是施加实验措施的最佳阶段. 3～4 wk时因瘤体积过大，中央血供不足易发生坏死、液化及远处肝、肺、肾门淋巴结转移等. 4～5 wk后因肿瘤血管退化，肿瘤大片坏死，体积过度倍增而形成广泛浸润、粘连，进而影响试验疗效的准确性. 螺旋CT对种植1 wk后的肿瘤检出率为70%，2 wk后检出率达100%，分析其中可能的影响因素有：①肿瘤直径小于扫描层距，造成遗漏； ②呼吸动度影响. 故动物早期未检出肿瘤，并不能定性为造模失败，如果联合MRI技术则可明显提高检出率. MRI图像清晰，可以发现早期微肿瘤. MRI图像分辨率与扫描时间成正比，但反复在麻醉状态下进行检查，降低荷瘤兔免疫力，并可能促使肿瘤侵袭. 我们认为，只要选定适宜的技术、条件和参数，植瘤后2 wk时，螺旋CT及MRI检查的影像密度或信号均匀，肿瘤检出率为最高. 肾动脉插管操作简便、微创，适宜各类介入研究，螺旋CT用于实验动物的影像学观察具有方便、准确、无创、可重复性强的优点，值得动物实验采用.　　【参考文献】　　［1］ 贾洪顺，全显跃，曾盛，等. 兔VX2肝癌CT及MRI动态评估［J］.第一军医大学学报，2002,2:41-144.　　［2］ 张琳，丁仕义，黄学全. 兔VX2肝移植癌模型传代的改进和螺旋CT评价［J］. 第三军医大学学报，2002,24:1125-1127.　　［3］ 吕发勤，段云友，王文，等. 二维超声技术检测VX2肿瘤所致兔上腔静脉阻塞［J］. 第四军医大学学报，2004,25(19):1732-1734.　　［4］ 王荞,王佚,王少春,等. 兔VX2肝癌模型的建立及超声影像监测的研究［J］. 重庆医科大学学报，2003,28(5):585-587.。