2023年E花环实验报告.doc

E花环实验一.实验原理 人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可以与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)已证实E 受体是人类T 细胞所特有的表面标志当T 细胞与SRBC 混合后，SRBC 便粘附于T 细胞表面，呈现花环状通过花环形成检查T 细胞的方法，称为 E 花环形成实验根据 花环形成的多少，可测知 T 细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等由于T细胞的异质性，其对SRBC的亲和力亦不同，因而T细胞可形成不同类型的E花环，其中在4℃放置1 h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反映形成的花环称为活性花环(Ea花环)二.实验结果（用图示法表达）三.讨论 ①.有的细胞能形成玫瑰花环的因素：人T细胞膜上具有CD2分子，可以与SRBC上的LFA-3结合，从而形成以人T细胞为中心，SRBC围绕四周，形状如玫瑰花环的细胞集团，即E玫瑰花环此外，NK细胞膜上也有CD2分子，也能形成玫瑰花环，但是NK细胞的量非常少，形成玫瑰花环的数量也少 ②. 有的细胞不能形成玫瑰花环的因素：a.人血液中具有单核巨噬细胞，其表面没有CD2分子，不能与SRBC表面的LFA-3结合，因此不能形成玫瑰花环。

b.实验中所用血液不够新鲜，也也许导致不可以形成玫瑰花环c. 时间不够长，导致T细胞表面的CD2分子不可以与SRBC上的LFA-3充足结合，因此只有一部分SRBC与人T细胞结合，其余SRBC没可以与人T细胞结合形成玫瑰花环2.SRBC与淋巴细胞混合后离心速度不能过高，在Et花环实验中，置4℃应至少1h以上或过夜3.绵羊红细胞以保存1周内最佳，超过2周则与淋巴细胞结合力下降，超过5～6周则不能再用实验室的绵羊红细胞保存的时间太长，导致其与淋巴细胞的结合能力下降，所以有的细胞可以形成E花环，而有的细胞不可以形成E花环4.Et花环实验SRBC与淋巴细胞混合比例以100∶1～200∶1为宜，Ea花环实验中以10∶1～20∶1为宜；淋巴细胞离体后不能超过6h，否则会影响花环形成率5.温度对实验结果影响较大，故实验温度条件应保持一致，从4℃取出后应立即计数6.计数前将沉淀细胞重悬时，使细胞团块松散均匀即可，不可强力吹打，以免SRBC从淋巴细胞上脱落。