蒽酮比色法测总糖.docx

优选文档,.[1]姚立虎,徐茜.蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J].食品工业992,03:40-42.1.2试剂0.1mg/mL,1葡萄糖标准溶液:正确称取10mg葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL.蒽酮硫酸溶液:正确称取蕙酮50mg于100mL二烧杯中，加入蒸馏水25mL,，缓慢加入98%质量分数)浓硫酸75mL,，边加边搅(于冰水浴中完成)，直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用(临用新配)浓盐酸、浓硫酸、NaOH，以上试剂均为解析纯，实验用水为蒸馏水1.3方法1.3.1显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择向试管中加入0.1mg/mL葡萄糖标液0.1mL,，并加入蒸馏水至1mL,，分别加入不同样量的显色剂显色测定，以0.1mL,蒸馏水为空白比较1.3.2显色时间选择向10mL二试管中加入0.1mg/mL葡萄糖标液0.1mL二并加入蒸馏水至1mL,，在冰水浴中缓慢加入9mL显色剂摇匀，改变开水浴时问，冷却至室温后测系统吸光度1.3.3葡萄搪标准曲线的绘制改变0.1mgmL葡萄糖标准液和蒸馏水的用量，再分别加入9mL显色剂，进行显色测定1.3.4正交试验确定提取条件。

采用正交试验，观察4个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取16时间、水解时问)对实验的影响，因素水平见表1.,.1.3.5水溶性总搪的提取在开水浴中加热60mLn,取0.5g滤出提取液棉花纤维于20mL于150mL圆底烧瓶中，加入50mL烧瓶中，加5mol/L30mL,盐酸蒸馏水，5mL继续在开水浴中加热30mLn，冷却后，滴加一滴酚酞，用5mol/L,1的氧氧化钠中和至中性1.3.6水溶性总搪的测定取提取液1mL于10mL试管中，在冰水浴中缓慢加入9mL,蕙酮硫酸溶液摇匀，在开水浴中加热9mLn，冷却后放置30min测定吸光度从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量结果与解析2.1吸取曲线用紫外刊一见分光光度计在500~700nm波长范围内进行光谱扫描，结果发现在625nm处有最大吸取，故本实验采用625nm为测定波长2.2显色剂用量l 由图1可以看出，当显色剂用量为9ml二时吸光度最大，故实验采用显色剂用量为9m2.3显色时问由图2可知，开水浴时问在9min内，随着时问的延长吸光度值明显增大，9min后吸光度值减小，12min后吸光度值基本不变，因此最正确显色时间为9min。

2.4标准曲线实验获得吸光度(A)与葡萄糖浓度(C)的回归方程为11=0.0401C+0.0036,r=0.9994，在0~10mg/mL浓度范围内线性关系优异(图3)2.5提取条件的确定正确称取棉花纤维，按表1的提取条件提取棉花纤维中的水溶性总糖，采用1.3.6方法测定总糖含量，结果见表2由表2可见，影响总糖含量的提取条件主次关系为提取时间>盐酸浓度>料液比>水解时问，其中提取时间对提取收效影响最明显，盐酸浓度和料液比其次，实验最正确提取条件为料液比1：30，盐酸浓度5mol/L,水解时问30min，提取时问60min2.6提取液显色牢固性按2.5项最正确条件提取棉花纤维中的总糖，取提取液后，按1.3.6方法操作，分别在显色后10min，20min，30min，60min，90min，120min内测定吸光度，结果见图4由图4可知，吸光度在30~60min内最大且牢固，今后随着时问推移下降因此，要在提取液显色后30~60min内测定吸光度，以减少误差7方法的精美度从表3可以看出，同一平均样品5份，测得棉花中的水溶性总糖平均含量为7.861mg/g，变异系数为1.8%，说明该方法拥有较好的精美度。

2.8回收率实验精美吸取己知浓度棉花总糖提取液5份，分别加入1mg/ml葡萄糖标液0.3mL,制备供试溶液，按1.3.6方法操作，测定吸光度，求回收率结果见表4[1]姚立虎,徐茜.蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J].食品工业,1992,03:40-42.,.2.试验方法2.1样品办理及标准溶液配制2.1.1标液制备:将葡萄糖分别配成50~140ug/mL标液吸取标液1mL加入装有8mL葱酮试剂的试管或量瓶，水浴加热后用lcm比色皿在620nm波长下比色，获得一系列E值3结果解析与谈论3.1糖溶度与其消光值3.1.1.对应关系:E间的关系,.将配制的不同样浓度的标液与蒽酮试剂作用，再置于620nm处比色，则得相应E值重复试验，将测定结果列于表1，并绘制成如图1的标准曲线从表1中看出，各组试验间的结果十分凑近，绘制成标准曲线，则重复间的三条线是弥合重迭的(如图1)抵消光值与糖浓度间相关关系数进行计算，三组试验的相关系数均大于0.99，为极明显正相关由此可以证明，糖含量与其消光值之间的关系在特定波长下是恒定的，互相对应找出这种关系，即可在实测中省去制标准曲线的工作，从而简化蕙酮比色法测糖含量的测定工作。

3.1.2利用回归解析建立表达式将表1中糖浓度与其E值进行回归解析，获得如表2的表达式表2中，Y=179.5X-2.74即总的回归表达式，它是三个重复的平均回归，而非回归之简单平均此式即是用来代替标准曲线运用于实测的关系式从三个重复的关系式可看出互相间存在必然的失散，但很渺小将其作图可看出，它们基本弥合在总式上，即呈重迭状态如图2这更进一步表示所求总式的代表性强，精度高3.2实测结果选择几种具代表性的样品进行测定结果比较，茶叶可作为干样典型，菠萝等则可作为湿样代表将样品按标准操作规程测出与其糖浓度对应的消光值，尔后按老例方法查标准曲线计算出所获得的值;同时利用换算式直接计算出糖含量将测定结果进行比较，便知其正确程度与合用性在表3中E值为多组测定值的平均，而老例法总糖的计算则按公式,.计算式中c试液量，此为为标准曲线上查得的糖量值1mL;10^6为ug变换成ug/mL;L为供试液总量，此为gM为样品重500mL;L'为取用简化法中，C变成Y值，即前述Y=C=179.5x-2.74，余同总糖计算式由表3可看出，老例法与简化法解析的值相差极微，将两种方法进行统计比较其结果如表4从表4可知，两种方法计算所获得结果相差极微，表示简化法完好吻合实测要求。

对表4再求两值间的平一均相对相差则得-0.07%，对几组试验值求出的平均误差D=0.0115;标准误差S=0.0181因此利用多项统计测试均显示出简化法与老例法所获结果趋于高度一致，证明葱酮比色法测总糖简化后十分精确，从而为省去标准曲线制作步骤供应了充分实验依照3.3简化法计算公式及其意义:由于简化法与老例法均是利用葱酮比色法测总糖含量的同样操作方法与步骤，只是简化法以关系式代替了老例法的标准曲线，故总糖计算式简化为式中：:X即E，为实测的消化值[1]杨建荣,李玉胜,殷军港.蒽酮比色法迅速测定复合硅铝酸盐霉菌吸附剂中酵母多糖含量[J].粮食与饲料工业,2014,12:57-59.资料与力一法1仪器和试剂1.1.1资料复合硅铝酸盐霉菌吸附剂(主要成分:水合硅铝酸盐约85%,酵母细胞壁约5%~10%1.1.2仪器,.T6新悦可见分光光度计，涡漩混杂器，解析天平(精确度0.0001g),MI6微波消解仪1.1.3试剂甘露糖标准品(纯度>98%,Sigma公司);浓盐酸(质量分数37%~38%)、浓硫酸(质量分数98%)和蕙酮皆为解析纯;实验室用水为蒸馏水50g/I,Na( )H溶液:5g解析纯氧氧化钠溶于100ml蒸馏水中;质量分数15%三氯乙酸溶液:15g解析纯三氯乙酸溶于85g蒸馏水中;6mol/I二盐酸溶液:25ml浓盐酸和25ml蒸馏水混匀。

1.2方法1.2.1样品预办理正确称取约0.5g复合硅铝酸盐霉菌吸附剂于微波消解罐中，加入50g/I,Na( )H溶液10ml,涡旋振荡2min,混匀在温度60℃条件下微波消解20min，冷却后用6mol/I二盐酸溶液调至中性，再加入浓盐酸使其最后浓度为6mol/I,微波消解采用程序升温，条件为:微波功率为4%W,温度800C时问5min,温度1%0C、时问5min和温度12%C时问90min冷却后转移至1%ml容量瓶中稀释定容，过滤后滤液备用1.2.2溶液配制1.2.2.1甘露糖标准贮备液的配制正确称取约0.29甘露糖于小烧杯中，，用蒸馏水溶解后转移至100ml容量瓶中并定容至100m11.2.2.2甘露糖标准使用液的配制分别正确移取甘露糖标准贮备液1.00,2.00,3.00,4.00,5.00和6.00ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释定容至50ml1.2.2.3显色剂蕙酮习壳酸溶液的配制,.用量筒量取75ml浓硫酸(质量分数98%)慢慢倒入装有25ml蒸馏水的小烧杯中，并不断搅拌冷却至室温;尔后加入0.05g蕙酮，搅拌使其溶解，避光保存，现用现配1.2.3蕙酮比色法条件的确定经过紫外分光光度计扫描显色后的溶液，确定最大吸取波长。

在甘露糖标准溶液中加入不同样体积的蒽酮试剂(分别为3,5,7,9,11和13ml),开水浴时问10min，显色测定吸光度后确定蒽酮试剂的最正确体。