绞股蓝提取物中的总黄酮的含量分析.docx

    绞股蓝提取物中的总黄酮的含量分析    【摘要】目的建立绞股蓝提取物中槲皮素，山奈素，异鼠李素的高效液相色谱测定方法方法采用ODS柱，流动相为：A液:B液＝75:25(A液为甲醇:水=50:50(以磷酸调节pH＝2.5)，B液为甲醇)，检测波长360nm结果槲皮素在0.13～2.6μg范围内线性关系良好，山奈素在0.10～2.1μg范围内线性关系良好，异鼠李素在0.12～2.4μg范围内线性关系良好；该法回收率结果槲皮素回收率为97.98％山奈素回收率为97.98％异鼠李素回收率为95.14％为绞股蓝提取物的应用提供了理论依据和质量控制标准关键词】绞股蓝槲皮素山奈素异鼠李素高效液相色谱法绞股蓝又名七叶胆,为葫芦科多年生草质藤本植物,广泛分布于长江流域以南及陕西南部广大地区,资源丰富且易栽培繁殖，有“南方人参”之称其中，绞股蓝含有大量黄酮类和皂苷类化合物，研究发现，绞股蓝具有诸多神奇的保健功效[1-3]，如调节人体生理机能、增强免疫力、清除激素类药物副作用、降血压、降血脂、预防癌症、减缓衰老、利胃健脾、减肥等由于绞股蓝的提取纯化工艺对其提取物的成分影响较大，所以有必要对绞股蓝提取物的质量进行控制。

本文选取了市场上的某一绞股蓝提取物，并采用高效液相色谱法对其中总黄酮中的组分进行定性和定量分析，为该提取物的应用提供了理论依据和质量控制标准1仪器与试剂岛津LC-20AT高效液相色谱仪带紫外检测器，标准品槲皮素，山奈素，异鼠李素为中国药品生物制品检定所提供，磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯绞股蓝提取物由广东一方制药有限公司提供2方法和结果2.1色谱条件采用Agilent-RP色谱柱(5μm，4.6mm×150mm)，流动相为：A液:B液＝75:25，A液：甲醇:水=50:50(以磷酸调节pH＝2.5)，B液：甲醇，流速:1.0mL/min，波长:360nm，柱温:25℃进样量:20μL在选定条件下,槲皮素、山奈素和异鼠李素的色谱峰附近不存在干扰物质,和其它成分分离效果良好样品与标准峰形及出峰时间相吻合(见图1)2.2标准曲线制备精密称取干燥至恒重的槲皮素、山奈素和异鼠李素的对照品各适量,加入无水甲醇溶液,配制成浓度分别为130μg/mL，105μg/mL，120μg/mL的混合对照品溶液精密吸取该混合对照品溶液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0mL分别置10mL量瓶中，加入无水甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得标准系列。

分别含有槲皮素6.50、13.0、32.5、65.0、97.5、130μg/mL，山奈素5.25、10.5、26.2、52.5、78.6、105μg/mL，异鼠李素6.00、12.0、30.0、60.0、90.0、120μg/mL分别进样20μL测定峰面积，以浓度C为纵坐标和峰面积响应值A为横坐标，得槲皮素回归方程C=0.019+6.365*10-6×A,r=0.9999，线性范围0.13～2.6μg；山奈素回归方程C=-0.044+6.141*10-6×A,r=0.9999，线性范围0.10～2.1μg；异鼠李素回归方程C=-0.415+1.827*10-6×A,r=0.9999，线性范围0.12～2.4μg2.3供试品溶液的制备取样品约0.2g，精密称定，置100mL带塞的锥形瓶中，加甲醇20mL，密塞，超声处理（100W、40KHz）约30分钟，滤过，滤渣用5mL甲醇洗涤,洗液与滤液合并，置150mL带塞的锥形瓶中，加15mL,1.5mol/L的盐酸溶液，于水浴上回流2小时，冷却，移至50mL容量瓶中，用甲醇洗涤容器，合并至同一量瓶，并加甲醇稀释至刻度，用0.45um滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4精密度实验在上述色谱条件下,取槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量分别为65.0、52.5和60.0μg/mL的混合标准溶液，重复进样6次,测定峰面积结果槲皮素峰面积RSD为1.81%；山奈素峰面积RSD为2.01%；异鼠李素峰面积RSD为3.18%2.5重现性实验分别取同一批样品6份,按供试品溶液制备方法，分别测定槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量结果槲皮素含量为2.02mg/g,RSD为5.36％，山奈素含量为5.21mg/g,RSD为3.12％，异鼠李素含量为0.505mg/g,RSD为6.10％2.6检出限和定量限在上述色谱条件下取一个含取槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量分别为6.5、5.25和6.00μg/mL的混合标准溶液,测得槲皮素、山奈素和异鼠李素的信噪比S/N分别为1703、1074、376由此推算出本测试方法的检出限（S:N=3）和定量限（S:N=10）：槲皮素的检出限为0.23μg，定量限为0.76μg；山奈素的检出限为0.30μg，定量限为1.0μg；槲皮素的检出限为0.96μg，定量限为3.2μg2.7加标回收率实验加样回收实验精密称取已知含量的样品约0.2g，分别精密加入一定量的槲皮素及异鼠李素对照品，按“供试品溶液制备”方法进行测定并计算回收率，结果槲皮素平均回收率为97.98％，RSD为4.19％(n=6)，山奈素平均回收率为97．98％，RSD为3.51％(n=6)，异鼠李素平均回收率为95.14％，RSD为4.67％(n=6)。

图1左图为标准溶液的色谱图，右图为样品溶液的色谱图3讨论3.1提取总黄酮时，以甲醇为提取溶媒，分别尝试超声提取120min，回流提取120min，从色谱图来看，两种提取方法测定所得供试液的色谱峰基本一致，同时还考察了超声提取时间，加酸水解时间，结果以30min提取，120min水解为最佳提取条件3.2在上述波长条件下，当流动相B的比例从25%变为30％时，保留时间将提前，能缩短分析时间，但会使山奈素与异鼠李素的分离效果变差当流动相B的比例从25%变为10％时，保留时间会滞后，山奈素与异鼠李素的分离效果良好，但分析时间拖得更长3.3从实验结果看，本绞股蓝提取物中含有较多的总黄酮为槲皮素和山奈素其中槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用而山奈素还具有诱变剂活性，抗氧化等功效所以该提取物可用于开发具降血压，降血脂以及抗氧化的保健产品参考文献[1]张育松.绞股蓝开发与应用[M].福州:海风出版社,2007.[2]刘敏华.绞股蓝[M].北京:中国医药出版社,2001.[3]史先振,周建俭.绞股蓝的研究进展[J].食品研究与开发,2003,24(5):38-39.  -全文完-。