EB的染色原理及其相关讨论#.docx

基因分子生物学实验一一EB的染色原理溴化乙锭(EtBr, EB)为芳香族荧光化合物，是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，用 于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸是一种核酸染料，常在琼脂糖凝胶电泳中用于核 酸染色；是一种强的诱变剂，可能也是一种致癌物或致畸剂EB与核酸的作用原理：这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间，在紫外线激发下，未与核酸结合的 溴化乙锭可被激发出橙红色萤光在与DNA或双股RNA结合时，萤光强度会增强20倍，使 得核酸电泳后的胶片可以辨识核酸的相对位置在核酸分子中，EB分子插入到两层碱基对 之间，发出红色荧光在凝胶中加入终浓度为0.5ug/m l的EB,可以在电泳过程中随时观 察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测问题讨论1、 溴化乙锭EB在琼脂糖凝胶电泳中先加与后加的区别？先加EB,染色与电泳同时进行：a. 加在胶里总体积小，所以比较方便节省；b. 会导致胶的整体背景稍微高些，比较暗；c. 长时间、长距离的电泳先加EB的话，信号强度会相应下降；d. 不宜用于核酸分子大小的确定和定量原因分析：EB带正电荷，中和核酸分子的负电荷，同时由于的他的嵌入增加了核酸分子的刚性， 使迁移速率减慢，故不宜用于凝胶电泳测定核酸分子的大小。

另外，由于在凝胶中，游离的 EB分子向负极泳动，会使样品中前后各带染色不均匀，影响定量后加EB，染色在电泳完成后：a. 可以减少污染，无背景色，图较漂亮；b. 相对浪费时间2、 EB废物的如何处理？EB废物的处理如下：(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理：a. 将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml；b. 加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4,混匀，再加入等量的25mol/L HCl,混匀，置室温数小时;c. 加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理：a. 按lmg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时；b. 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃如果你只是手接触了用EB污染的东西，用肥皂水洗一下就没事了一定要带手套操作有EB 污染的实验EB有很强的诱变剂，操作时一定要慎重最新文件 仅供参考 已改成 word 文本 方便更改。