磁珠法石蜡包埋组织基因组DNA 提取详细步骤.docx

磁珠法石蜡包埋组织基因组DNA提取详细步骤注意事项需要自备材料：二甲苯、无水乙醇、异丙醇、磁铁或磁架、1.5mL离心管（最 好低吸附的离心管）；需要去除RNA自备RNase A（ 100mg/ml）,在蛋白酶K消 化这一步加入4卩1 RNase A ； ♦整个过程请勿离心，以免磁珠不可逆聚集而影 响提取效果磁珠用前一定要充分混匀；♦ 56口和80口加热源；♦使用前需在BufferFTGWI中加入相应体积的无水乙醇，使乙醇比例占80%操作步骤1•脱蜡：①切下5片厚度约为10yM （重约10mg ）的组织块，尽量切去 石蜡部分，置于1.5ml的离心管中加入1ml二甲苯，并振荡30s，然后室温 放置5分钟20口 ,14000 x g离心3 min，用移液器移尽上清②加入1ml 100% 乙醇振荡离心管20s，然后20口，14000 x g离心3 min，用移液器移去上清，室 温干燥组织沉淀15min注意：任何残留的乙醇可能会影响蛋白酶K的消化以 及减少核酸的得率2. 消化：加300吐Buffer FTGL，振荡至彻底悬浮，用匀浆机进行匀浆破碎 （使其彻底无大块组织残留），再加入20吐蛋白酶K（PK），于56□温浴15min （期间不时混匀），然后置于80 口 15min ；注意：①组织大于50mg时需要增加 蛋白酶K （PK）的用量。

3. 裂解结合：将离心管从80口加热器上离开，冷却至室温，在上清液中加入600卩1 Buffer FTGB和600uL异丙 醇，最后加入磁珠悬浮液（MB） 30吐（使用 前充分重悬），颠倒混匀 5 分钟；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完 全吸附后 吸弃液体4. 漂洗:（1）将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500卩1 Buffer FTGWO，轻微 涡旋振荡5S，使磁珠重悬，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃 液体，重复该步骤一次2）将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 m Buffer FTGW I轻微 涡旋振荡5S，使磁珠重悬，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液 体重复该步骤一次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃 尽，不然残 留会影响下游实验），晾干 2min5.洗脱：将离心管从磁力架上取下加入50-200卩1 Buffer EB，剧烈涡旋振 荡，重悬磁珠（一定要完全重悬磁珠，若未充分重悬会影响DNA得率），56口 放置5min （每隔2min振荡混匀重悬磁珠），置于磁力架上，将上清DNA转移 至一新的离心管中，放入-20 □保存备用，保质期为2年。