药物分析 第六章 芳酸及其酯类.ppt

中国药科大学药物分析教研室 第六章 芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物的分析v Chemical structure & feature v Identification v Detection of specific impurities in Analysis of Aromatic carboxylic acids & estersvAssay Aspirin,Sodium aminosalicylate & Clofibrate中国药科大学药物分析教研室 ⊙Aromatic carboxylic acids 水杨酸类水杨酸 SA salicylic acid 阿司匹林aspirin对氨基水杨酸钠PAS-Na贝诺酯benorilate 双水杨酯salsalate中国药科大学药物分析教研室 ⊙苯甲酸类羟苯乙酯 ethylparoben丙磺舒 probenecid苯甲酸benzoic acid甲芬那酸 mefenamic acidsodium benzoate中国药科大学药物分析教研室 ⊙其他芳酸类氯贝丁酯clofibrate布洛芬ibuprofen中国药科大学药物分析教研室 ⊙特点n均有苯环、羧酸或其酯n水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连n除了酸性基团外，各自具有本身的官能团分子中苯环、羧酸和取代基的相互 影响，使芳酸的酸性强度各有不同中国药科大学药物分析教研室紫堇色赭色↓米黄色↓pH5.0~6.0T.S.FeCl3pH4~6中性溶液鉴别§三氯化铁反应中国药科大学药物分析教研室碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游离白色中国药科大学药物分析教研室布洛芬中国药科大学药物分析教研室 ⊙重氮化偶合反应具体方法见芳香胺类药物的鉴别⊙氧化反应⊙异羟肟酸铁反应甲芬那酸＋H2SO4 深蓝色△黄色黄色并产生绿色荧光随即变为棕绿色中国药科大学药物分析教研室Fe/3紫色中国药科大学药物分析教研室 ⊙水解产物的反应⊙分解产物的反应⊙UV特征吸收 ⊙IR吸收光谱中国药科大学药物分析教研室v特殊杂质的由来与方法检查Acetyl Salicylic Acid副产物SAASA⊙Aspirin生产工艺生产工艺中国药科大学药物分析教研室 Ø SAØ 溶液的澄清度 酚类和酯类其他副反应产生酯类中国药科大学药物分析教研室 Ø 易碳化物Ø 炽灼残渣 Ø 重金属中国药科大学药物分析教研室 ⊙PAS-NaØØ 间氨基酚间氨基酚 Ch.PCh.P 样品样品3.03.0g g用用乙醚提取乙醚提取，加入，加入H H2 2O O，， 用用HClHCl滴定液（滴定液（0.020.02mol/L)mol/L)滴定，生成滴定，生成 杂质杂质· ·HClHCl（（转溶入转溶入H H2 2O O相，甲基橙指示剂相，甲基橙指示剂 ）。

滴定液不得过滴定液不得过0.300.30mlml USP HPLCUSP HPLC法法 C C18 18 NaHNaH2 2POPO4 4(0.05mol/L)-Na(0.05mol/L)-Na2 2HPOHPO4 4(0.05mol/L)(0.05mol/L) -CH-CH3 3OH(OH(含氢氧化四丁基铵含氢氧化四丁基铵1.91.9g)g) (425(425：：425425：：150)150) 254nm254nm检测 内标：磺胺检测 内标：磺胺中国药科大学药物分析教研室⊙羟苯乙酯供试品自身对照法BP（1998 ）反相TLC 高低浓度对比法取羟苯乙酯丙酮液1.0%和 0.01%，2ul，254nm查荧光，前一 个任何第二个斑点的大小和强度 不应超过后一个中国药科大学药物分析教研室a. 杂质对照品法 方法：供试品→供试品溶液杂质对照品→对照品溶液中国药科大学药物分析教研室供 试 品对 照 品中国药科大学药物分析教研室判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点 优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。

缺点：需要杂质对照品中国药科大学药物分析教研室b.高低浓度对比法 方法： 中国药科大学药物分析教研室供 试 品对 照 品中国药科大学药物分析教研室判断：②供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）① 控制杂质斑点个数，控制杂质种类中国药科大学药物分析教研室 ⊙氯贝丁酯Ø 对氯酚（0.0025%） Ø 挥发性杂质（0.5%） GC法 5%SE-30 2m 160℃，N2 FID杂质以归一化法求得中国药科大学药物分析教研室 v含量测定⊙酸酸碱碱滴定法滴定法Acid-base titration method以ASA及其制剂为例 苯甲酸 pKa 4.20水杨酸 pKa 2.98 酸性较强羧酸邻位羧酸邻位- -OHOH，，吸电子基团，使吸电子基团，使 酸性增加；并有氢键，更增加了酸性增加；并有氢键，更增加了 其极性其极性 因此，可采取直接滴定法中国药科大学药物分析教研室 ØØ 直接滴定法直接滴定法pKa 3~6 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH 滴定 pKa 6~9 的药物要用非水溶液滴定法中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性， 可消除滴定误差乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶 液中滴定过程易水解本法特点：简单 注意点：若注意点：若SASA不合格，不宜采用本法不合格，不宜采用本法Aspirin 丙磺舒(Ch.P. BP. JP等) 苯甲酸 (Ch.P等)均采用本法中国药科大学药物分析教研室 ØØ 水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法 Residual titration after hydrolysisUSP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。

每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4中国药科大学药物分析教研室剩余滴定时消耗酸量 V V(ml)同时做空白试验，消耗酸量 V V0 0(ml)Ch.P 00羟苯乙酯的Assay亦采用bBaA中国药科大学药物分析教研室 反应物质之间的化学计量关系 aA+bBcC+dD被测物滴定液毫摩尔数中国药科大学药物分析教研室滴定度计算0.5规定的硫酸浓度为0.25mol/LT毫摩尔质量中国药科大学药物分析教研室 ØØ 两步两步滴定法滴定法 Two-step titration用于Aspirin片测 定 片剂中有稳定剂水解产物 水杨酸SA HAc 枸橼酸 Citric acid酒石酸 Trataric acid为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴 定法中国药科大学药物分析教研室 Ch.P. 阿司匹林片取本品10片，精密称定，研细，精密 称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形 瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性 )20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴 ，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精 密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加 热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温， 用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结 果用空白试验校正 每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于 18.02mg的C9H8O4中国药科大学药物分析教研室 第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA， CA，TA，SA，HAc 第二步放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOH V ； 空白滴定消耗H2SO4 V0 ；(V0-V) H2SO4则为用于中和水解ASA所需的 NaOH中国药科大学药物分析教研室 计算：称取10片重 1.8240gCNaOH 0.1032mol/L片粉重 0.5312gC 0.05120mol/L 标示量 0.1g V 3.02mlV0 20.18ml中国药科大学药物分析教研室直接 水解后 两步 滴定法 剩余滴定法 滴定法 优点 操作简便 水杨酸干扰少 结果准 确， 避免了 游离 SA以及 片剂中稳定剂 的干扰缺点 游离水杨酸 不能完全不合格时结 排除干扰果偏高 Ch.P 氯贝丁酯的Assay采用两步滴定法中国药科大学药物分析教研室 ⊙双相双相滴定法滴定法 Titrimetry in two phasesCh.P 2005用于苯甲酸钠的测定苯甲酸钠苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于易溶于水水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法中国药科大学药物分析教研室HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸钠)0.5mol/L25ml1.5g50ml2d甲基橙 橙红色分出H2O层，置具塞 锥形瓶， 乙醚层用H2O 5ml洗 涤，洗液并入锥形 瓶， 加乙醚20ml，继续 用HCl滴定，至水层 显持续的橙红色中国药科大学药物分析教研室 ⊙ ⊙柱分配色谱柱分配色谱- -紫外分光光度法紫外分光光度法Column Partition Chromatogr.ASA capsule 等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性分离酸性杂质杂质和辅料辅料以及稳定剂稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA如USP用柱分配色谱-UV测定ASA Capsule中国药科大学药物分析教研室Column Partition Chromatography, CPC 担 体：硅藻土(Celite 545) 固定相：一定pH的缓冲水溶液 流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和)200~300mm60mm4mm22mm层 析 柱玻 棉压 榨 棒350mm21mm中国药科大学药物分析教研室 CPC-UV法测定ASA Capsule SA测定 供试液制备 §用CHCl3 50ml洗涤，弃去(洗去ASA) §10ml冰HAc-水饱和乙醚液(1→10)(使紫 色配位化合物被分解，SA析出) §洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl 的50ml量瓶中，继用30mlCHCl3洗，并稀释 至刻度 SA对照品溶液： 75µg/ml，取10ml50ml量瓶中盛有：10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水饱 和乙醚液(1→10)，CHCl3至刻度中国药科大学药物分析教研室 测定：306nm测定供试液和SA对照品液﹡ ﹡SA与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱上移动慢，带窄，色泽较深﹡﹡ ﹡﹡若有Fe3+洗下，黄色影响测定结果消除干扰方法：迂底部拌有磷酸的硅 藻土，生成不溶解的FePO4↓A供试液 ＜ A对照品液L=75(µg/ml)×10m100mg×1000×100%＝0.75%中国药科大学药物分析教研室ASA+SA测定供试液制备 §洗脱 5,25mlCHCl3 ，弃去CHCl3 §洗脱 10ml冰HAc-CHCl3(1→10)** ；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀释 至100ml对照品溶液 50µg/ml冰HAc-CHCl3(1→100)CPC-UV法测定ASA Capsule 中国药科大学药物分析教研室测定：280nm 空白：CHCl3﹡ ﹡NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质﹡﹡ ﹡﹡冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被 CHCl3洗脱中国药科大学药物分析教研室 含量测定计算公式所取胶囊细粉中ASA(mg) 供试品溶液吸收度对照品溶液吸收度中国药科大学药物分析教研室CPCCPC技术的类型技术的类型§利用固定相酸碱性的不同进行分离§利用药物和固定相起化学反应而进行分离§利用生成离子对进行层析分。