基因检测在肿瘤个性化诊疗中的应用PPT演示课件.ppt

基因检测在肿瘤个性化诊疗中的应用,1,分子靶向治疗与基因检测,液相活检技术及其临床应用,2,非小细胞肺癌的靶向治疗,1.,酪氨酸激酶抑制剂（,EGFR-TKIs,）,吉非替尼（易瑞沙）,厄洛替尼（特罗凯）,乳腺癌、胃癌的靶向治疗,HER-2,抑制剂,曲妥珠单抗（赫赛汀）,结、直肠癌的靶向治疗,EGFR,单克隆抗体,西妥昔单抗（爱必妥）,2.ALK/ROS1,抑制剂,克唑替尼（赛可瑞）,色瑞替尼（,Zykadia,）,3,非小细胞肺癌的靶向治疗,1.,酪氨酸激酶抑制剂（,EGFR-TKIs,）,吉非替尼（易瑞沙）,厄洛替尼（特罗凯）,埃克替尼（凯美纳）,2.ALK/ROS1,抑制剂,克唑替尼（赛可瑞）,色瑞替尼（,Zykadia,）,4,肺腺癌和鳞癌的驱动基因,5,检测时间段：,2014,年,标本来源：手术组织、穿刺标本、胸腹水制备的蜡块,标本量：共送检,2322,例，退单,112,例，实际检测,2210,例,阴性结果：,1260,例,阳性结果：9,50,例,（,19del 432,例，,L858R 452,例，,T790M 8,例，其他,58,例）,金域检验结果,阳性率：,43%,6,IPASS,IPASS,TKI,药物是把双刃剑！,2024/10/7,7,NSCLC,患者,EML4-ALK,基因重排,EML4,EML4ALK,变异体,1,HELP,1,496,981,WD,Basic,1,496,1059,1,1058,1620,TM,激酶,ALK,间变性淋巴瘤激酶,(ALK),基因的异常激活，可促进肿瘤的生长,2011,年,FDA,批准克唑替尼用于治疗局部晚期或转移的,ALK,阳性,NSCLC,患者,2013,年,CFDA,批准克唑替尼用于治疗局部晚期或转移性,ALK,阳性的,NSCLC,患者,2014,年,FDA,批准色瑞替尼用于治疗局部晚期或转移性,ALK,阳性的,NSCLC,患者,（包括既往接受克唑替尼治疗失败的患者）,8,ALK,基因与,EGFR,基因并列非小细胞肺癌靶向治疗首选推荐检测基因！,克唑替尼,治疗,ALK,阳性患者,9,中国,ALK,阳性,NSCLC,诊断专家共识（,2013,）,10,ALK,基因重排（,FISH),方法：荧光原位杂交,试剂盒：,ABBOTT ALK,重排检测试剂盒,优点：通过,cFDA,认证,目前检测,ALK,基因重排的金标准,缺点：费用高昂，大部分患者很难承受,11,ALK,基因重排（全自动免疫组化）,方法：全自动免疫组化,试剂盒：,Roche VENTANA,抗,ALK,单抗,优点：通过,cFDA,认证,与,FISH,方法的一致性为,99.23%,优点二：费用远低,FISH,方法，时间快,12,Ventana ALK,的,cFDA,注册临床实验,三家医院（,上海肿瘤医院，中国科学院肿瘤医院，北京大学人民医院,）超过,1100,例,NSCLC,样本进行,VENTANA ALK(D5F3),与,FISH ALK,结果的对比验证实验,结果表明,VENTANA ALK(D5F3),与,FISH ALK,的一致性为,99.23%,阳性率：,12.7%,13,31,岁，男性，非吸烟,EGFR,无突变、,ALK,无重排,一线吉非替尼治疗无效,口服克唑替尼,8,周后高度部分缓解,ROS fusion:FISH,ROS fusion:IHC,克唑替尼治疗,ROS1,基因阳性患者,14,乳腺癌、胃癌的靶向治疗,HER-2,抑制剂,曲妥珠单抗（赫赛汀）,2024/10/7,15,HER-2扩增检测的应用,辅助诊断,FISH技术检测HER-2状态结果客观准确，为检测HER-2基因的金标准。

制定治疗方案,HER-2基因扩增患者：应用他莫昔芬治疗后的死亡风险明显增高，提示患者可能不适合他莫昔芬作为内分泌治疗的选择；,HER-2基因扩增患者：对CMF化疗方案的反应性降低,宜采用高剂量强度的蒽环类药物方案16,指导靶向用药,赫赛汀只有针对,HER-2,基因扩增和蛋白过度表达的病人才有效预后判断,预后判断,研究显示，HER-2基因扩增患者生存期较短，肿瘤负荷更大，淋巴结转移几率更高，激素受体阴性比例更高，复发风险更高,乳腺癌,：,HER2,扩增阳性率,25%,左右（荧光原位杂交技术）,2024/10/7,17,胃癌,：,HER2,扩增阳性率约,1,5,%27%,（荧光原位杂交技术）；,各类型胃肿瘤,HER2,阳性率：,食管胃结合部腺癌（,33%,）、胃腺癌（,21%,）、,肠道及弥漫型肿瘤（,32%,）、混合型肿瘤（,6%,）,乳腺癌,：,HER2,扩增阳性率约,20%25%,（荧光原位杂交技术）,18,标本来源：组织标本（以乳腺癌为主）,方法学：,FISH,方法,标本量：检测,2560,例，阳性结果：1,050,例,金域检验结果,阳性率：,41.02%,19,结直肠癌驱动基因分布,爱必妥和维克替比仅适用于,KRAS,基因野生型的转移性结直肠癌患者,KRAS,突变是早期,NSCLC,患者无法从辅助化疗中获益的预测因子,20,标本来源：组织标本（以结直肠癌为主）,方法学：,ARMS-PCR,、,Sanger,测序,标本量：检测1,618,例,阳性结果：6,14,例,金域检验结果荟萃,阳性率：3,8%,21,部分晚期患者无手术机会,无足够的组织标本进行基因分型,重复活检患者依从性差,作为金标本的组织靶基因检测也存在局限性一、取材困难,22,二、肿瘤异质性,同一肿瘤组织有异质性,不同部位肿瘤的异质性,23,三、无法对疗效进行监测,组织标本无法用于动态检测,24,Liquid Biopsies（液相活检）,Blood&other bodily fluids,Cell-free DNA,（血浆游离,DNA,）,Circulating tumor DNA,（循环肿瘤,DNA,）,有限的样本数量,有限的取样频率,取样时需要专业医生和专业机构,有创伤地取样,检测速度慢,目前实体肿瘤个体化治疗面临的困境,25,ctDNA的生物学属性,来源,26,总游离,DNA,上皮组织,5-10%,肿瘤,0.01-10%,胃肠道,5-10%,血细胞,80-90%,largely 1.0%,ctDNA的生物学属性,含量,27,血浆,水 91%,蛋白,7%,代谢物,(,微量,),Cell-free DNA(,微量,),细胞层,白细胞,2-3%,血小板块,2-3%,红细胞,90%,CTC(,微量,),ctDNA的生物学属性,存在部位,28,特殊保存方式,抑制核酸酶介导的c,tDNA,降解,防腐剂稳定有核血细胞,ctDNA分子标记物存在周期短，能实时反应患者的基本情况,ctDNA的生物学属性,半衰期短,2024/10/7,29,ctDNA的生物学属性,高特异性,“相对”准确反应肿瘤组织不同克隆的基因特征,Leary et al Science Translational Medicine,Nov 2012.,【ctDNA,】,所有肿瘤克隆的混合体(能反应肿瘤所有克隆的整体特征)。

30,基于血液的靶基因检测可惠及每一位患者,指导用药,匀质标本,实时监测,作为无法获取组织标本的补充，无创检测结果指导临床用药,循环而匀质的,ctDNA,标本，在一定程度克服了异质性,实现实时动态监测，提高全程管理水平,31,III,、,IV,期肺腺癌,易瑞沙,、特罗凯,、凯美纳,等,方法：,ARMS-PC,R,基于血液的肺癌,EGFR,突变检测,32,EGFR,基因突变位点,33,共入组,1060,位高加索人群非小细 胞肺癌患者，来自,5,个国家,652,例患者同时具有肿瘤组织和血液样本，采用,Qiagen,试剂盒进行检测,这两者,EGFR,突变状态吻合率为,94.3%,，特异性为,99.8%,2024/10/7,34,35,IRESSA,药品说明书更新,中国,Gefitinib,说明书更新（,2015,年,2,月,13,日,cFDA,批准更新,）,第,4,页,当考虑本品用于晚期或转移性,NSCLC,患者的一线治疗时，推荐对所有患者的肿瘤组,织进行,EGFR,突变检测，,如果肿瘤标本不可评估，则可使用血液（血浆）标本中获得的循环肿瘤,DNA(ctDNA),用于,EGFR,突变检测,只能使用经论证可用于测定肿瘤或,ctDNA,的,EGFR,突变的检测方法，检测方法须稳定、可靠并且灵敏，以避免出现假阴性或假阳性的测定结果,36,200,例标本对照，肿瘤组织对比外周血进行,EGFR,基因检测,2,00,例标本，共出现,11,例不相符标本（组织阳性而外周血检测阴性、组织阴性而外周血检测阳性）。

检测时机的选择,检测方法学的选定,金域实验室,&,ctDNA检测数据,37,38,统计,2015,年,1,月,1,日至,3,月,31,日数据：,检测目前已使用一代,TKI,治疗的非小细胞肺癌患者（,3,个月,-6,个月）,72,例，出现,T790M,突变阳性例数为,3,1,例,；,与新药临床试验部联合推动患者加入针对,“T790M”,位点的第三代,TKI,新药临床试验金域实验室,&,ctDNA检测数据,39,报告时间：,ASCO2014,背景：,服用,EGFR-TKI,药物的患者，一般在8,1,1月内出现耐药,耐药原因：,50%,的患者产生,T790M,突变,I,期临床报告：,入组,199,名患者（女性,62%,，中位年龄,60,岁，亚裔,65%,）,T790M,突变,：,132,位患者进行了检测，,89,例检出,T790M,疗效：,T790M(+)(c+uORR),为,64%,，,T790M(,）为,23%,60例确认缓解的患者中，97%（58/60）的患者在数据截止时疾病仍在持续缓解最长缓解时间超过8个月,AZD9291 I,期临床研究,40,外周血中,KRAS,基因突变检测,III,、,IV,期肺腺癌,III,、,IV,期结直肠癌,爱必妥,维克替比,等,方法：,ARMS-PCR,41,肺肠癌,22,基因突变热点检测,III,、,IV,期肺腺癌,III,、,IV,期结直肠癌,指导用药、预后评估,方法：二代测序,42,22,基因列表,优势：高通量，覆盖了大部分非小细胞肺癌和结直肠癌的驱动基因,43,ctDNA的临床应用,未来潜在临床用途,恶性肿瘤治疗反应监测；,恶性肿瘤的预后分层；,恶性肿瘤复发监测。

44,1、治,疗 反,应 检 测,Disease progression,Cell-free DNA was the only marker that predicted response,CELL-FREE DNA/PIK3CA,CA 15-3 ANTIGEN,CIRCULATING TUMOR CELLS,Patient responds,to therapy,No response to hormonal RX,High signal,consistent with metastatic patient,Patients responds to therapy switch,Hormonal,therapy,45,2、预 后 分 层,Bettegowda C et al.Detection of circulating tumor DNA(ctDNA)in early-and late-stage human malignancies.,Sci Transl Med.2014 Feb 19;6(224):224ra24.,恶性肿瘤预后分层：,随着每,5ml,血中肿瘤,DNA,片段含量的提升，所统计的,2,年预估生存率呈下滑趋势。

46,ctDNA,可以对手术切除后的患者进行微小残留的检测以评估复发的风险,APC,G4189T,作为突变参考指标,a,）手术前：突变,DNA,含量为,13.4%,b,）手术后（,3,天），突变,DNA,片段降至,0.015%,c,）手术后。