细胞油红O染色的操作步骤.docx

细 胞 油 红 O 染 色 的 操 作 步 骤点击次数：348 发布时间：2011-4-11、10%中性甲醛的配制材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶称取lg中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密圭寸，在60度水浴中过夜才 能溶解配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存2、染色液的配制材料：油红染料 棕色可密圭瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至 100ml,棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4°C保存，为储存液，可长期保存用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完3、培养载体3毫升培养瓶如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核 的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑4、.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段5、注意事项：脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片各有操作差异以下是各论坛方法小结，不全1) .完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题2) .细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的操作务要轻柔不要把细胞 冲掉3) .如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。

6、染色步骤：（1） 先小心轻缓倒去培养夜2） 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）3） 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题固定液用95%酒 精也可）固定的是细胞膜4） 稀释油红储存液，油红：去离子水= 3:2,滤纸过滤，室温放置10min（除 去一些杂质，染色结果更清晰）5） 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml, 24孔加 0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）6） 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液 洗也没问题，背景并不会残留多少）7） 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要， 并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核，hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染 10 分钟即可把核染上)8) 甘油明胶封片(封片后可长期保存)9) 显微镜观察三、显示脂类的油红法：(1)操作步骤：• 1 、福尔马林固定后的恒冷箱切片附贴于载片上或游离切片，厚 5-10nm• 2 、 60% 异丙醇稍洗切片，• 3、油红 O 液染 5-15min ，• 4 、 60% 异丙醇洗去多余染液，• 5 、自来水洗，• 6、苏木素染细胞核 2min ，• 7 、自来水洗，如果需要可分化，• 8、水洗至细胞核蓝化 5-10min ，• 9 、擦去多余水分，甘油明胶封固。

结果：脂类物质显示红色，细胞核显示蓝色II)试剂的配制：油红 o( oil red o) 0.5g将异丙醇放入三角烧瓶，再加入油红O,于水浴中慢慢加热使之溶解，待至完全溶解后取出，冷却至室温后，过滤，装于棕色小磨沙口瓶保存，临用前取 6ml加蒸馏水4ml,混合后静置10min后过滤，染色时间5-15min。