制备合格的微生物培养基不可忽略的注意事项.docx

Word文档制备合格的微生物培养基，不可忽略的注意事项1、培育基配方选择 同一种培育基的配方在不同著作中常会有某些差别因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源 2、培育基制备记录 每次制备培育基均应有记录，包括培育基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培育基一同存放、以防发生混乱 3、培育基成份称量 培育基的各种成分必需精确称取并要留意防止错乱，最好一次完成，不要中断可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧完全称取完毕后，还应进行一次检查 4、培育基成份的混合与溶化 培育基所用化学药品均应是化学纯的使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培育基中，使细菌不易生长最好使用不锈钢加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置于高压蒸汽灭菌器或流淌蒸汽消毒器中蒸煮溶化 5、培育基pH值的调正 pH因培育基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培育基各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正。

例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有显著的上升因此，对这个步骤，操应随时留意探究阅历、以期能把握培育基的最终pH，保证培育基的质量pH调整后，还应将培育基煮沸数分钟，以利培育基沉淀物的析出 6、培育基过滤澄清 液体培育基必需肯定澄清，琼脂培育基也应透亮无显著沉淀，因此，必要采纳过滤或其它澄清方法以达到此项要求一般液体培育基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避开因液压不匀称而引起滤纸裂开 7、培育基分装 培育基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内分装量不得超过容器装盛量的2/3容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器分装琼脂斜面培育基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当 8、培育基灭菌 一般培育基可采纳121℃高压蒸汽灭菌15分钟的方法在各种培育基制备方法中，如无特别规定，即可用此法灭菌 9、培育基质量测试 每批培育基制备好以后，应认真检查一遍，如发觉裂开、水分浸入、色泽特别、棉塞被培育基沾染等、均应挑出弃去并测定其最终pH将全部培育基放入361℃恒温箱培育过夜，如发觉有菌生长，即弃去。

用有关的标准菌株接种1～2管或瓶培育基，培育24～48小时，如无菌生长或生长不好应追查缘由并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培育基即应弃去，不能使用 （1）澄清度 水是细胞培育基的溶剂细胞培育基中的养分成分只有完全溶解于水才能被细胞汲取摄取，细胞才能生长增殖，因此细胞培育基是否溶解以及培育液是否透亮澄清直接影响培育基使用该项目是通过对水溶解后的细胞培育基的澄清度检查，推断细胞培育基的澄清度按中华人民共和国药典2021年版二部附录ⅨB进行 （2）pH值 哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，pH过高或者过低都会导致细胞死亡pH值的测定也可以检查细胞培育基的批间差清大天一标准规定取规定量供试品，用注射用水（水温20℃-30℃）溶解至1L，加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中，用与细胞培育基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定按中华人民共和国药典2021年版二部附录ⅥH进行；加入规定量的碳酸氢钠到上述溶液中，按中华人民共和国药典2021年版二部附录ⅥH进行 （3）干燥减量的质量分数 细胞培育基具有吸湿性，在空气中放置水分会很快上升，干燥减量的质量分数表示产品中含湿量细胞培育基是有菌制剂，其丰富的养分成分有利于微生物生长，掌握细胞培育基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持细胞培育基的养分。

按中华人民共和国药典2021年版二部附录ⅧL干燥失重测定法进行 （4）渗透压 溶剂通过半透膜由低浓度向高浓度溶液集中的现象称为渗透，阻挡渗透所需施加的压力，称为渗透压细胞必需生活在等渗环境中，动物细胞借助K＋、Na＋维持渗透平衡大多数细胞对渗透压有肯定的耐受性但是培育液渗透压过高简单使细胞脱水萎缩，培育液渗透压过低简单使细胞膨胀裂开，因此要掌握培育基的渗透压范围按中华人民共和国药典2021年版二部附录ⅨG渗透压摩尔浓度测定法进行 （5）细菌内毒素 细菌内毒素是很多病原性细菌所产生的毒素它的特别性在于不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有生物活性的物质培育基细菌内毒素过高，对生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程药品等注射用的药品都需要检查细菌内毒素因此本项目的检验符合生物制品质量掌握要求 （6）微生物限度 细胞培育基不是无菌产品，其中的微生物在肯定条件下会汲取细胞培育基中的养分物质滋生繁殖，导致细胞培育基变质失效掌握细胞培育基中细菌和霉菌，是延长细胞培育基有效期的方法之一 （7）细胞生长试验 这是一共性能特性表述的要求细胞培育基的功能就是培育哺乳类动物细胞，因此经过细胞培育效果的检验是产品质量优劣的直观表述，这也是许多生物制药用户要求的一项指标。

10、培育基保存培育基应存放于冷暗处，最好能放于一般冰箱内放置时间不宜超过一周，倾注的平板培育基不宜超过3天每批培育基均必需附有该批培育基制备记录副页或明显标签 5。