
放线菌和霉菌的形态观察.docx
5页姓名:张金中学号:16110701056班级:生工 1602组别11指导教师 报告成绩同组成员姓名:刘松良、张岩高秀珍试验 4 放线菌和霉菌的形态观看试验时间:20 18 年 4 月 18 日 星期 三 第 789 节 试验地点:13- 1331. 试验目的学习并把握观看放线菌形态的根本方法,并观看放线菌的形态特征学习并把握观看四类常见霉菌形态的根本方法,并观看其形态特征2. 试验原理放线菌原理放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞的菌丝体菌丝体分为两局部,即 潜入培育基中的养分菌丝(或称基内菌丝,简称基丝)和生长在培育基以上的气生菌丝有些 气生菌丝分化成孢子丝,呈螺旋形、波浪形或分枝状等,孢子常呈圆形、椭圆形或杆状能否产生气生菌丝及孢子的外形和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据放线菌的菌落形态特征为: 形成枯燥、不透亮、外表呈致密丝绒状,上有一层彩色“干粉”的菌落菌落与培育基连接严密,难以挑取,菌落正反面颜色不全都,在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象,有泥腥味霉菌原理霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称霉菌的菌落形态较大,质地疏松,外观 枯燥,不透亮,菌落与培育基间连接严密,不易挑取,菌落正反面,边缘与中心的颜色、构造通常不全都,有霉味。
霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到肯定阶段分 化产生生殖菌丝,由生殖菌丝产生孢子霉菌菌丝体(尤其是生殖菌丝)及孢子的形态特征是 识别不同种类霉菌的重要依据菌丝的孢子较大,在低倍镜下即可清楚观看到有隔或无隔菌 丝和孢子及巨大的孢子囊霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多,常是细菌菌体宽度 的几倍至几十倍霉菌菌丝较粗大,细胞简洁收缩变形,而且孢子很简洁飞散、所以制标本 时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液此染色液制成的霉菌标本片特点是: (a) 细胞不变形: (b)具有杀菌防腐作用,且不易枯燥,能保持较长时间; (c) 溶液本身呈蓝色,有肯定染色效果霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据3. 材料仪器1、菌种: 放线菌划线平板 28C,3-5 天后培育物;产黄青霉,黑曲霉,黑根霉,等斜面或平板划线菌种 28C 培育 2~3 天2、染料和试剂: 0.1%乳酸石炭酸棉蓝染色液,石炭酸复红染色液,吕氏碱性美蓝染液,无菌水等3、器材: 显微镜,载玻片,镊子,接种环,玻璃刮,玻璃纸,细口滴管,剪刀,培育皿, 圆形滤纸片等4. 方法步骤(一) 放线菌形态观看1、水封片观看(1) 取一套高氏 1 号平板,将菌种划线方法接种,把灭菌过的盖玻片斜插在培育基中,一半露出,在 28“C 下培育 5~7d 备用。
2) 取一滴棉蓝染色液置于载玻片中心,将上述长有菌丝的盖玻片取出,把一面的培育基擦净然后把长菌丝一面朝下,盖住染色液,制成水封片,用高倍镜观看其气生丝、孢子丝和孢子2、玻璃纸法观看(1) 取一套高氏 1 号平板,将一张适中的玻璃纸平铺在平板上,用无菌玻璃刮展平,然后用接种环取一环斜面种在玻璃纸上划线接种,或用玻璃刮涂布接种,倒置放入 28C 下培育5~7d,此时可见到玻璃纸外表长出菌丝和孢子的颜色便可取材观看2) 取一块干净的载玻片,滴加一滴水,用剪刀从长菌的玻璃纸边缘处剪下一小块,上下 方向不变,移至载玻片的水滴上以其底部接触水面使其展平,不要有气泡,不要加盖玻片便可直接在显微镜下观看先用低倍镜观看菌丝的立体生长状况,再用高倍镜认真观看留意区分放线菌的基内菌丝、气生菌丝和弯曲状或螺旋状的孢子丝3、影印法观看用涂布法或划线法培育出单个菌落,然后用小刀留神地刮一个菌落,翻过压印在载玻片中心,留神地移开菌落,载玻片中心就留下菌落印痕在火焰下固定,滴一滴石炭酸复红染色, 水洗后晾干,在高倍镜或油镜下观看二) 霉菌形态观看霉菌的载玻片湿室培育(1) 湿室用具预备 在培育皿底铺一张圆形滤纸片,载玻片和盖玻片和玻棒,外用纸包扎, 经 121C 湿热灭菌 30min 后,置 60C 烘箱烘干,备用。
2) 接种 在超净工作台内,将两条玻棒放入平皿内适当位置,放上载玻片,然后用接种环挑取少量待观看的霉菌孢子至湿室内的载玻片上,每张载玻片可接同一菌种的孢子两处接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可(务必记住接种的位置)3) 加培育基 用无菌细口滴管吸取少量溶化约50 度的培育基,滴加到载玻片的接种处, 培育基应滴得圆而薄,其直径约为 0.5cm (滴加量一般以 1/2 小滴为宜)4) 加盖玻片 在培育基未彻底凝固前,用无菌镊子将无菌盖玻片盖在琼脂块薄层上,用镊子轻压,使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近,但不能压扁,否则不透气,(5) 加保湿剂 每皿参加大约 3mL.20%的无菌甘油,使皿内的滤纸完全润湿,以保持皿内湿度,皿盖上注明菌名、组别和接种日期将制成的载政片漫室置28 度恒温箱培育 3~5d. 2、黑根霉假根的培育将溶化的 PDA 培育基,倒入无菌平皿,其量约为平皿高度的1/2冷凝后,用按神环沾取根霉孢子,在平板外表划线接种然后将平皿倒置,在皿盖内放一无菌载玻片, 于 28 度培育 2~3d 后,可见根霉的气生菌丝倒挂成胡须状,有很多菌丝与载玻片接触, 并在载玻片上分化出假根和匍匐菌丝等构造。
3、镜检观看湿室培育霉菌镜检玻片从培育 16-20h 开头,通过连续观看,可了解抱子的萌发、菌丝体的生长分化和子实体的形成过程将湿室内的载玻片取出,直接置于低倍镜和高倍镜下观 察曲霉、青霉、毛霉、根霉等等霉菌的形态,重点观看菌丝是否有分隔,曲霉和青霉的分生孢子形成特点,曲霉的足细胞,根霉和毛霉的孢子囊和孢子囊孢子2) 粘片观看取一滴棉蓝染色液置于载玻片中心,翻开霉菌平板培育物,取一段透亮胶带粘取菌体,粘面朝下,放在染液上,镜检3) 假根观看将培育根霉假根的平皿翻开,取出皿盖上的载玻片标本在附着菌丝体的一 面盖上盖玻片,置显微镜下观看只要用低倍镜就能观看到假根及从根节上分化出的孢子囊 梗、孢子囊、孢子囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝,观看时留意调整焦距以看清各种构造5. 试验结果放线菌显微观看图曲霉分生孢子头显微观看图根霉显微观看图青霉的分生孢子头显微观看图6. 结论显微镜观看下放线菌形态较小难以区分各构造;可以清楚观看到根霉的假根、匍匐菌丝、孢子囊、孢子梗;曲霉分生孢子头的顶囊清楚可见,分生孢子可见,一轮小梗与二轮小梗较难区分;青霉分生孢子头形如扫帚状,可观看到分生孢子、带状分枝小梗和分生孢子梗。
7. 试验总结〔含试验体会、关键步骤、留意事项等〕1. 粘片观看霉菌形态时要留意不能有气泡,否则影响观看2. 影印法观看放线菌形态时,要留神移动菌落,否则会破坏放线菌构造3. 显微镜观看时,应先使用低倍镜,必要时再使用高倍镜8. 思考题(1) 在显微镜下,如何区分养分菌丝和气生菌丝?气生菌丝直生或分枝丝状,较基内菌丝粗,是指从基质伸向空气中的菌丝体菌类的菌丝体 多是匍匐在基质上,或是贯穿基质而伸长的,为了孢子的形成而生长气生菌丝在肯定条件 下,水生菌类也可以生长气生菌丝真菌和放线菌的养分菌丝发育到肯定时期,长出培育基 外并伸向空间的菌丝称为气生菌丝它叠生于养分菌丝上,以致可以掩盖整个菌落外表在 光学显微镜下,颜色较深,直径比养分菌丝粗,直形或弯曲,有的产生色素在固体培育基上霉菌的菌丝分化为养分菌丝和气生菌丝养分菌丝深入到培育基内吸取养料;气生菌丝向 空中生长,有些气生菌丝发育到肯定阶段分化成生殖菌丝,产生孢子2) 在自然界和实际应用中放线菌有什么作用?霉菌对人类生活和生产能产生哪些乐观作用和消极作用?在自然界和实际应用中放线菌的作用有:①放线菌是大多数抗生素的产生菌,还是很多酶、维生素等的产生菌。
②近年来筛选出的很多的生化药物多数是放线菌的次生代谢产物,包括抗癌剂、酶抑制剂、抗寄生虫剂、免疫抑制剂和农用杀虫〔杀菌〕剂等③放线菌对非豆科植物的共生固氮具有重大作用④放线菌在石油脱蜡和污水处理中也有重要应用由于放线菌有极强的分解纤维素、石蜡、角蛋白、琼脂和橡胶等力量,故它们在环境保护、提高土壤肥沃力和自然界物质循环中起着 重大作用霉菌对人类生活和生产中产生的乐观作用为:①工业上的有机酸、酶制剂、抗生素、维生素、生物碱等的发酵生产②进展生物防治,污水处理和生物测定③食品制造方面,如酱油的酿造和干酪的制造④在根底理论争辩方面,霉菌是良好的试验材料消极作用有:①可引起工农业产品的霉变,如食品、纺织品、皮革、木材、纸张、光学仪器、电工器材和照相材料等②是植物最主要的病原菌,引起各种植物的传染性病害,如马铃薯晚疫病、稻瘟病和小麦锈病等③引起动物和人体传染病,如皮肤癣症等;另有少局部霉菌可产生毒性很强的真菌毒素,如黄曲霉毒素等。












