穿心莲内酯的提取.pdf

穿心莲内酯的提取、分离、鉴定及亚硫酸氢钠加成物的制备穿心莲内酯的提取、分离、鉴定及亚硫酸氢钠加成物的制备穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andjrographis panicalata (Burmf)Ness)的全草或叶具清热解毒，凉血消肿作用，用于治疗急性菌痢、胃肠炎、咽喉炎、尿路感染等穿心莲中含有多种苦味素，属二萜类化合物，主要为穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯、高穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲烷、穿心莲酮等其中穿心莲内酯、新穿心莲内酯是穿心莲抗菌消炎的主要有效成分 鉴于穿心莲内酯在水中的难溶性，将穿心莲内酯进行磺化、亚硫酸氢钠加成和琥珀酸酐酯化等水溶性衍生物合成研究，克服了穿心莲内酯不溶于水的特性穿心莲中主要成分的结构及其性质 1．穿心莲内酯(andrographolide)：C20H30O6，又称穿心莲乙素，为无色方型或长方型结晶，mp 230~232℃，[]D-126 味极苦，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿、乙醚，难溶于水及石油醚 2．脱氧穿心莲内酯(14-deoxy-andrographolide)：C20H30O4，又称穿心莲甲素，为无色片状或长方型结晶， mp l75~176.5℃，[苯、微溶水。

3．新穿心莲内酯（neo-andrographolide)：C26H40O8，又称穿心莲丙素、穿心莲新苷，为无色柱状结晶，mp l67~168℃无苦味，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿和水，不溶于石油醚OHOOOO20]D-36(1％，氯仿)味稍苦，可溶于甲醇、乙醇，丙酮、吡啶、氯仿、乙醚、OOHOCH2OHHOCH2OHCH2O-Glu穿心莲内酯脱氧穿心莲内酯新穿心莲内酯OHOONaHSO3OOSO3NaHOCH2OHHOCH2OH一、实验目的一、实验目的1. 掌握穿心莲内酯类二萜化合物的理化性质和提取分离方法2. 学习氧化铝柱色谱的原理和操作方法3. 通过穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成，掌握使脂溶性产物转化为水溶性产物的一种方法二、实验原理（综合性实验）二、实验原理（综合性实验）穿心莲中的内酯类化合物易溶于甲醇、乙醇．丙酮等溶剂，故利用此性质选用乙醇提取之，穿心莲中含有大量叶绿素，可用活性炭脱色法除去叶绿素类杂质；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯在氯仿中溶解度不同，初步将二者分离；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯结构上的差异，用氧化铝柱分离二者，将穿心莲内酯制成亚硫酸氢钠加成物以增加其在水中的溶解性。

三、实验内容三、实验内容1．仪器和试剂玻璃色谱柱（2×30cm）及配套分液漏斗，滤纸，50ml 三角瓶数个， 恒温水浴锅，蒸发皿，玻璃板（5×20cm） ，色谱缸，玻璃漏斗，铁架台，500ml 园底烧瓶，抽滤瓶，布氏漏斗，冷凝器，旋转蒸发仪，硅胶薄层板，显色试剂喷瓶，电吹风，锥形瓶(50m1)等穿心莲粗粉，95％乙醇，活性炭，丙酮，氯仿，甲醇，正丁醇，亚硫酸氢钠，无水乙醇，％亚硝酰铁氰化钠，10％的正丁醇氢氧化钠溶液，3，5-二硝基苯甲酸碱性溶液，50％氢氧化钾甲醇试液2. 实验方法 (一)内酯类成分的提取1）提取：称取穿心莲粗粉100g，置圆底烧瓶中，加95％乙醇以浸过药粉 2cm 为度，回流 1 小时，过滤，药渣再加适量乙醇回流2 次，每次1 小时，过滤，合并三次滤液，回收乙醇至总体积的1/5 量，放冷，即为内酯类成分总提取物2）脱色：将上述内酯类成分总提取物加入原料量的15~30％活性炭，加热回流 30 分钟，脱色后的溶液再浓缩至15~2ml 左右，放置析晶 (二)分离、精制 1）穿心莲内酯的分离 结晶法，将活性炭脱色后的浓缩液放置析晶，滤取结晶，并用少量水洗涤即得穿心莲内酯粗品(含少量脱氧穿心莲内酯)。

母液待分离脱氧穿心莲内酯 2）穿心莲内酯的精制 将粗品穿心莲内酯结晶加 40 倍量丙酮，加热回流 l0 分钟，过滤不溶物再加20 倍量丙酮，加热回流 l0 分钟，过滤，合并二次丙酮液，回收丙酮至三分之一量，放置析晶，滤取白色颗粒状结晶，即为穿心莲内酯精品做薄层鉴定 3）脱氧穿心莲内酯分离将结晶法析出的穿心莲内酯母液水浴蒸发至稠膏状，再加氯仿70ml，尽力搅拌后滤出氯仿层， 残渣再加氯仿 10ml 同法处理合并二次滤液，水浴回收至 5ml，将此浓缩液上氧化铝柱(2×30cm)用中性氧化铝约 30~35g，氯仿湿法装柱，用氯仿洗脱，控制流速为2~3ml/分，每份 10ml，约收 12~15 份各流份浓缩后簿层鉴定，合并相同流份，蒸干氯仿，用丙酮结晶二次，得白色结晶即为脱氧穿心莲内酯，做薄层鉴定三)穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的制备取穿心莲内酯精制品0.5g 置 50ml 圆底烧瓶中， 加 95％乙醇 5ml 及计算量的 4％的亚硫酸氢钠水溶液，加热回流 30 分钟，反应液蒸出乙醇，再加 5mJ 水溶解，冷却后过滤，滤液用少量氯仿洗涤三次，水液浓缩至干残留物加乙醇l0~20ml 溶解，滤除不溶物，乙醇溶液浓缩放置或抽松，得白色粉末。

粗品用乙醇-氯仿重结晶得到穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成产物 (四)鉴定 1）穿心莲内酯的鉴定：(1) 物理常数：mp 230~232℃2) 薄层色谱： 吸附剂：硅胶 G-CMC展开剂：氯仿-无水乙醇(20:1)显色剂：碘蒸气结果：穿心莲内酯在常量下为一个斑点3) 显色反应：①亚硝酰铁氰化钠碱液反应(Legal 反应)： 取穿心莲内酯结晶少许放在比色板上， 加乙醇溶解， 加％亚硝酰铁氰化钠溶液 2 滴 10％的氢氧化钠溶液 2 滴②3，5-二硝基苯甲酸碱液反应(Kedde 反应)： 取穿心莲内酯结晶少许， 于比色板上，加乙醇溶解，加 3，5-二硝基苯甲酸碱性溶液2 滴，呈紫色③50％氢氧化钾甲醇试液反应：穿心莲内酯遇氢氧化钾甲醇溶液呈紫色2）脱氧穿心莲内酯的鉴定： (1) 测熔点：mp l75~ 176.5 ℃ (2) 薄层鉴定：条件同穿心莲内酯3）穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的鉴定： (1) 测熔点：mp 226~227℃ (2) 薄层鉴定：吸附剂，硅胶G-CMC 板展开刑：A.氯仿-甲醇(9:1)，B.氯仿-正丁醇-甲醇(2:1:2)，C.氯仿-丙酮-乙醇-水(5:5:5:1)。

显色剂：3、5-二硝基苯甲酸碱性溶液 样品：①穿心莲内酯乙醇液②穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物结果：用展开剂 A，样品②留在原点、用展开剂B、C，样品①移至前沿，样品②Rf值在左右四、复习题四、复习题 1. 根据穿心莲内酯类成分的不同结构，判断各自的极性大小，分析出各成分在薄层板上的Rf值 2．试说明穿心莲内酯显色反应的机理。