HIV实验室检测.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2017/4/28 Friday,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2017/4/28 Friday,#,HIV,实验室检测,实习生：叶贝,2017/4/28,HIV,病原学及流行病学特点,HIV,实验室检测方法,罗氏第四代,HIV,检测试剂特点,目录,HIV,病原学,HIV,人类免疫缺陷病毒，由包膜及核心组成，为,RNA,病毒,HIV,核心部分包括两条单股,RNA,链，核心结构蛋白及复制所需酶类（蛋白酶、逆转录酶、整合酶）,HIV,病毒逆转录酶无校对功能，故病毒变异性强，导致检测结果假阴性,HIV,病原学,病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆转录酶,作用,下由,RNA,逆转录为,DNA,经,DNA,转录及翻译后形成蛋白外壳，将病毒,RNA,包裹其中，生成新的,HIV,主要侵入,T,淋巴细胞及神经细胞，导致细胞免疫功能缺陷，增加机会性感染,HIV,流行病学,全国呈低流行态势，部分地区疫情严重,HIV,主要分为两种,HIV-1,和,HIV-2,两型；,HIV-1,类为全球主要流行类型，分为,M,、,O,、,N,三个亚,型组,HIV,传播途径,1,、传染源：病人及无症状携带者,血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播,2,、传播途径,性,传播：同行、异性、双性性接触,母,婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播,血液制品传播,：共用针具静脉注射毒品，介入性医疗操作，纹身，耳洞等,HIV,感染自然史,急性期,艾滋病期,无症状期,初次感染,HIV 2-4,周，传染性最强,主要以发热、关节痛、淋巴结肿大为特征,可,检出,HIV,及,p24,抗原，,CD4,+,/CD8,+,倒置,可持续,6-8,年，,HIV,在感染者体内不断复制，具有传染性,可检测,HIV,及抗体，,CD4,+,T,淋巴续保逐渐下降,HIV,感染最终阶段，,HIV,血浆病毒载量明显升高，,CD4,+,T,淋巴细胞,200,个,/ul,主要表现为各种机会性感染及肿瘤,血清学检测,备注,HIV,抗体,筛查试验：,ELISA,CIA,ECLIA,确证试验：,WB,RIBA,仅测抗体,HIV p24,抗原,早期灵敏度更高,HIV,抗原,+,抗体,HIV Ag/Ab,combi PT:ELISA,ECLIA,CIA,核酸检测,备注,HIV RNA,定性,辅助确证试验,Taqman,荧光实时,PCR,试剂,HIV RNA,定量,辅助确证试验，监测治疗效果与疾病进展,靶核酸扩增试剂,淋巴细胞检测,备注,CD4,+,和CD,8,+,HIV,感染分期，抗病毒治疗指针,CD4,+,/,CD,8,+,比值下降,HIV,实验室指标,初筛试验,+,确证试验,HIV,检测流程,全国艾滋病检测技术规范,-2015,年修订版检测,流程,初筛试验,筛查,复检,HIV,检测流程,全国艾滋病检测技术规范,-2015,年修订版检测,流程,确证试验,确证,仅能检测,HIV-1,，不能检测,HIV-2,和,HIV Ag,，,灵敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本,试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观,HIV,检测流程,初始反应必须使用抗原和抗体联合检测的第四代免疫学方法，这类方法可以同时检测,HIV-1,抗体、,HIV-2,抗体和,HIV p24,抗原，检测出,HIV-1,、,HIV-2,感染和急性,HIV-1,感染，初始检测无反应性则无需进行进一步检测,初始反应阳性标本需经过,FDA,批准的抗体鉴别试剂进行,HIV-1,和,HIV-2,抗体鉴别试验，结果以,HIV-1,抗体阳性、,HIV-2,抗体阳性、,HIV,抗体阳性或无法鉴别来解释,初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应性或不明确标本须经,HIV-1,核酸检测，,HIV-1 NAT,有反应性而抗体鉴别无反应性为急性,HIV-1,感染；,HIV-1 NAT,有反应性而抗体鉴别试验不明确为,HIV-1,感染；,HIV-1 NAT,无反应性而抗体鉴别不明确为假阳性结果,联合试验,鉴别试验,核酸试验,美国,CDC,推荐,HIV,检测流程,2014,修订版,HIV,检测,HIV,感染后首先检测到,HIV RNA,第四,代,HIV,检测试剂检测到,HIV p24,抗原，为抗原抗体联合检测,第三代及其以前的试剂均为只检测,HIV,抗体,HIV-1/2/O,抗体,HIV-1/2/O,抗体,+HIV,p24,抗原,3,rd,代抗体检测,核酸检测方法,4,th,代抗原抗体检测,周,年,2,4,3,5,6,7,8,9,10,1,2,4,3,5,6,0,1,7,8,9,p24,抗原检测,p24,抗原检测,从初始感染后的时间,无症状期,急性期,第一个血清转换窗口期,核酸检测方法,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,罗氏,HIV,试剂,艾滋病期,缩短检测窗口期，早期诊断,2,nd,代抗体检测,Seroconversion,panel,Elecsys HIV,combi PT,Elecsys HIV,combi,ADVIA Centaur HIV,Ag/Ab combo,ARCHITECT HIV,Ag/Ab combo,VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O,Zhuhai Livzon anti-HIV,Serodia,HIV1/2,PRB 930,0,4,4,0,8,8,8,PRB 958,8,NA,NA,8,NA,NA,NA,Nabi 0759,0,0,0,0,NA,4,8,Nabi 1436,0,0,NA,0,9,9,9,Nabi 4009,0,NA,0,0,3,NA,NA,Nabi 9003,6,6,NA,6,10,6,10,Nabi 25165,0,0,0,0,NA,4,4,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,罗氏,HIV,试剂,缩短检测窗口期，早期诊断,Elecsys HIV Combi PT,阳转时间较,PCR,方法平均晚,2,天,，早于或等于其它,方法,与,三种第三代检测方法相比，,Elecsys Combi PT,是,1.2 days,，优于,Elecsys HIV combi,(2.0 days),Zhuhai Livzon,anti-HIV(6.2,days)and Serodia,HIV1/2,(7.8 days,).,与,ADVIA Centaur,相比,the Elecsys HIV combi PTs,的检出时间是,0 days,，,ADVIA Centarurs(1.0 days,).,与,VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O,相比，,Elecsys HIV combi PTs,是,1.5 days,，,VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II,plus Os(7.5 days).,罗氏,HIV,试剂,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,缩短检测窗口期，早期诊断,5.478 days(Roche,data on file),罗氏,HIV,试剂,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,=,诊断相关蛋白,p24,gp120,gp41/gp36,p17,（基质蛋白）,RT(,逆转录酶,),RNA,P24,抗原是,HIV,病毒的核心蛋白,HIV-Ag,的检测,HIV-Ab,的检测,膜蛋白,罗氏,HIV,试剂,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,包含,检测物,功能,抗原检测,p24 module 1,p24 Ag,早期检测,HIV,感染及终末期感染,p24 module 2,p24 Ag,检测,O,亚型以及,HIV-2,抗体检测,gp41 module 1,HIV-1 IgM and IgG,确保,HIV-1,的检测高灵敏,gp36 module 1,HIV-2 IgM and IgG,确保,HIV-2,的检测高灵敏,HIV-1 RT,HIV-1 IgG,确保检测所有,HIV,亚型的安全性,HIV-2 RT,HIV-2 IgG,检测所有,HIV,亚型的安全性,gp41 module 2,HIV-1 subtype O,确保检测,O,亚型的灵敏度,gp36 module 2,HIV-2 IgG,确保检测,HIV-2,的备份,缓冲液,添加抗干扰物质,避免干扰,可识别,所有亚型,罗氏,HIV,试剂,可识别,所有亚型,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,619,8,472,罗氏,HIV,试剂,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,9 min,9 min,9 min,预处理,裂解出,p24,抗原,Ag-Ab,复合物,磁珠,加入,共,27min,孵育,测量池检测,夹心法形成免疫复合物,罗氏,HIV,试剂,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,早期感染,血清转换期的检测,不同时期,HIV,感染病人的检测,高灵敏度,不同亚型的检测,Elecsys,HIV combi PT,ARCHITECT,HIV Ag/Ab combo,ADVIA Centaur,HIV Ag/Ab combo,Elecsys,HIV combi,Zhuhai Lizhu anti-HIV EIA,VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O,Total number,4,465,2,751,1,039,675,675,703,IR(1 s/co),51,50,5,1,0,2,Confirmed positive,45,44,0,0,0,2,Number of false positives*,6,6,5,1,0,0,Specificity(IR,1 s/co),99.86%,99.78%,99.52%,99.85%,100.00%,100.00%,95%confidence limit(IR,1 s/co),99.7199.95,99.5299.92,98.8899.84,99.18100.00,99.45100.00,99.48100.00,罗氏,HIV,试剂,第四代,HIV,抗原抗体联合检测法,Elecsys,HIV combi PT,高特异性,罗氏,HIV,试剂,排除类风湿因子、自身抗体、单克隆丙种球蛋白、,EB,病毒抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体、流感疫苗等非特异性干扰、抗干扰能力强,高特异性,Case,分享,REN XX,Men,29 Y,Days since first bleed,HIV Combi PT(COI),HIV Combi(COI),ELISA,(S/CO),HIV RNA,（高精分析）,WB,01,0,2011/08/01,/,4.41/4.05(POS),0.04(NEG),/,P24,(,不确定,),02,134,2011/12/12,/,4.49(POS),0.01(NEG),HIV RNA,(NEG),P24,(,不确定,),罗氏,HIV Combi,试剂,2,次均出现阳性结果，,P24,抗原也均出现条带，,但,HIV-RNA,分析,病毒为阴性，最终报告为阴性,，该患者实为,淋巴,瘤，分析时注意干扰因素,淋巴瘤,患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者,4,种病人都可能出现,HIV,初筛阳性，需特别对待,华西案例分析,CASE 1,Case,分享,华西案例分析,CASE,2,WUXX,Men,30 Y,Days since first bleed,HIV Combi PT(COI),HIV Combi(COI),ELISA,(S/CO),HIV RNA,（高精分析）,WB,01,0,2012/0。