溶血性试验课件.ppt

思考与思考与讨论？？. 实验现象象实验器材器材实验原理原理实验结果果试验方法方法实验目的目的溶血性试验 原理：溶血性试验是观察受试物是原理：溶血性试验是观察受试物是否引起溶血和红细胞凝聚等反应否引起溶血和红细胞凝聚等反应 目的：某些中药注射剂，由于含目的：某些中药注射剂，由于含有溶血成分或物理、化学及生物等方有溶血成分或物理、化学及生物等方面的原因，在直接注入血管后可产生面的原因，在直接注入血管后可产生溶血作用；也有些注射剂中因含有杂溶血作用；也有些注射剂中因含有杂质等成分，注入血管后可产生血细胞质等成分，注入血管后可产生血细胞凝聚，引起血液循环功能障碍等不良凝聚，引起血液循环功能障碍等不良反应；另外，因中药制剂的成分复杂，反应；另外，因中药制剂的成分复杂，也存在因免疫反应引起的免疫性溶血也存在因免疫反应引起的免疫性溶血因此，凡是注射剂和可能引起免疫性因此，凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的其他药物溶血或非免疫性溶血反应的其他药物制剂均应进行溶血性试验制剂均应进行溶血性试验 探究：因造成溶血反应的机制复杂，目前尚无全面的临探究：因造成溶血反应的机制复杂，目前尚无全面的临床前溶血试验方法。

中药注射剂溶血性的测定床前溶血试验方法中药注射剂溶血性的测定,许多年来一直许多年来一直采用常规的体外溶血试验，即试管观察法（见附录）它是采用常规的体外溶血试验，即试管观察法（见附录）它是通过肉眼来观察溶血情况，而有色泽中药注射剂对结果判断通过肉眼来观察溶血情况，而有色泽中药注射剂对结果判断的影响较大，难以评价溶血程度的影响较大，难以评价溶血程度为了精确检查中药注射剂的溶血性，建议在常规方法的基础为了精确检查中药注射剂的溶血性，建议在常规方法的基础上，结合以下或其他方法进行试验，如分光光度法、体外红上，结合以下或其他方法进行试验，如分光光度法、体外红细胞计数法、体内红细胞计数及分析法这些方法与常规法细胞计数法、体内红细胞计数及分析法这些方法与常规法比较，尽管前两者的操作相对复杂比较，尽管前两者的操作相对复杂,影响因素较多，但当采用影响因素较多，但当采用常规法测定的结果有疑问或必要时，采用计数法和分光光度常规法测定的结果有疑问或必要时，采用计数法和分光光度法作为一种辅助方法法作为一种辅助方法,可帮助更精确的判断注射剂的溶血性可帮助更精确的判断注射剂的溶血性在进行长期毒性试验中，应注意溶血性指标的观察（如红细在进行长期毒性试验中，应注意溶血性指标的观察（如红细胞数量及网织红细胞数的变化、胆红素、尿蛋白、肾炎、脾胞数量及网织红细胞数的变化、胆红素、尿蛋白、肾炎、脾脏淤血及骨髓象等）。

脏淤血及骨髓象等）当受试物出现体外溶血阳性结果时，应进行体内溶血性试验，当受试物出现体外溶血阳性结果时，应进行体内溶血性试验，不但可以判断是否存在药物诱发溶血性的可能，而且可以通不但可以判断是否存在药物诱发溶血性的可能，而且可以通过对其他指标的测定提供更多的信息，如网织红细胞是否增过对其他指标的测定提供更多的信息，如网织红细胞是否增高、是否有血红蛋白尿、球形红细胞是否增多，以及骨髓检高、是否有血红蛋白尿、球形红细胞是否增多，以及骨髓检查是否有溶血性贫血现象等查是否有溶血性贫血现象等实验器材动物仪器试剂家兔家兔1只只（供采血用）（供采血用） 小烧杯小烧杯 竹签（去纤竹签（去纤维蛋白用）维蛋白用）,试管，试试管，试管架，吸管，恒温管架，吸管，恒温 水水浴锅，离心机浴锅，离心机 试剂4%的桔梗煎液、生的桔梗煎液、生理理盐水、蒸水、蒸馏水水 试验方法试验方法 步步骤一；一；取兔血5-10ml加入洁净干燥的小烧杯中，用竹签或玻璃棒搅拌除去纤维蛋白元血球悬浮液的配置 步步骤二；二；加生理盐水5-10ml，摇匀，离心，倾去上清液，如此反复复几次，直至清液不出现血色为止 步步骤三；量取血球，加生理盐水稀释至2%的混悬液，供实验用。

试验试验方法 方法方法方法方法 取取取取 7 7 支试管，编号，按下表加入各种溶液第支试管，编号，按下表加入各种溶液第支试管，编号，按下表加入各种溶液第支试管，编号，按下表加入各种溶液第 6 6 管不加入管不加入管不加入管不加入供试品，供试品，供试品，供试品， 方法方法方法方法 作为空白对照第作为空白对照第作为空白对照第作为空白对照第 7 7 管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，作为完全溶血对作为完全溶血对作为完全溶血对作为完全溶血对 照轻轻摇匀后置照轻轻摇匀后置照轻轻摇匀后置照轻轻摇匀后置 3737℃℃℃℃的水浴中保温，的水浴中保温，的水浴中保温，的水浴中保温，1h 1h 后观后观后观后观察结果，再离心察结果，再离心察结果，再离心察结果，再离心 5min 5min 后观察结后观察结后观察结后观察结 果试管编号试管编号1 12 23 34 45 56 6桔梗液桔梗液mlml0.10.10.20.20.30.30.40.40.50.50 0生理盐水生理盐水mlml2.42.42.32.32.22.22.12.12.02.02.52.52%x2%x血球血球混悬液混悬液2.52.52.52.52.52.52.52.52.52.52.52.5实验结果与统计 试管试管 2%兔血混悬液（兔血混悬液（ml）） 生理盐水（生理盐水（ml）） 4%桔梗煎液桔梗煎液(ml) 柴胡注射液（柴胡注射液（ml）） 37℃℃保温保温 1h 后的后的结果结果 、、2%兔血生理盐水混悬液的配制兔血生理盐水混悬液的配制 10-20ml。

用竹签搅拌以除去纤维蛋白用竹签搅拌以除去纤维蛋白 签搅拌以除去纤维蛋白签搅拌以除去纤维蛋白 注：注：1）） 2%兔血生理盐水混悬液的配制：取新鲜兔兔血生理盐水混悬液的配制：取新鲜兔10-20ml用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后吸用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后吸 、、2%兔血生理盐水混悬液的配兔血生理盐水混悬液的配 2ml，， 摇匀即得摇匀即得 取没有取没有发生凝血和溶血现象的全血发生凝血和溶血现象的全血 2ml，加生理盐水稀释至，加生理盐水稀释至 100ml 摇匀即得摇匀即得 、、4%的桔梗煎液：的桔梗煎液： 4%的溶液的溶液 的溶液 2）） 4%的桔梗煎液：取桔梗的桔梗煎液：取桔梗 4g ，按普通，按普通煎煮法制成煎煮法制成 4%的溶液 、、4%的桔梗煎液的桔梗煎液 结果判断依据：结果判断依据： 完全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留完全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留 部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底尚有少量红细部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底尚有少量红细胞残留 不不 溶溶 血：红细胞全部沉淀，上层液体物色澄明血：红细胞全部沉淀，上层液体物色澄明 凝凝 集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，经振瑶后不集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，经振瑶后不易分散或出现药物沉淀。

易分散或出现药物沉淀 溶血性结果的评价溶血性结果的评价n n3 3、溶血性结果的评价、溶血性结果的评价、溶血性结果的评价、溶血性结果的评价n n根据临床前和临床研究的结果，发现目前临床前根据临床前和临床研究的结果，发现目前临床前根据临床前和临床研究的结果，发现目前临床前根据临床前和临床研究的结果，发现目前临床前体外溶血试验绝大多数为阴性结果，但临床应用体外溶血试验绝大多数为阴性结果，但临床应用体外溶血试验绝大多数为阴性结果，但临床应用体外溶血试验绝大多数为阴性结果，但临床应用过程中却有许多阳性结果的相关报道，即存在临过程中却有许多阳性结果的相关报道，即存在临过程中却有许多阳性结果的相关报道，即存在临过程中却有许多阳性结果的相关报道，即存在临床前和临床应用结果不一致的问题因此，建议床前和临床应用结果不一致的问题因此，建议床前和临床应用结果不一致的问题因此，建议床前和临床应用结果不一致的问题因此，建议临床前研究中，在利用常规方法的同时，考虑结临床前研究中，在利用常规方法的同时，考虑结临床前研究中，在利用常规方法的同时，考虑结临床前研究中，在利用常规方法的同时，考虑结合其他的试验方法，特别是在长期毒性试验（静合其他的试验方法，特别是在长期毒性试验（静合其他的试验方法，特别是在长期毒性试验（静合其他的试验方法，特别是在长期毒性试验（静脉给药）中增加或关注相关指标的检查，以综合脉给药）中增加或关注相关指标的检查，以综合脉给药）中增加或关注相关指标的检查，以综合脉给药）中增加或关注相关指标的检查，以综合评价中药注射剂的溶血性，增加与临床人用结果评价中药注射剂的溶血性，增加与临床人用结果评价中药注射剂的溶血性，增加与临床人用结果评价中药注射剂的溶血性，增加与临床人用结果相关性的认识。

相关性的认识相关性的认识相关性的认识。