组培_各种材料组培方法及现象记录.docx

组织培养方法及现象记录 各类外植体灭菌一般方法： 茎段：枝条清洗，剪去或剥去叶片，露出腋芽或叶柄基部包被腋芽；以 75%酒精浸泡30秒， 以 0.1%升汞浸泡 5~10 分钟，无菌水冲洗 3~5 遍；切取茎段或腋芽接如培养基 叶片：清洗，酒精棉擦拭，以75%酒精浸泡 30秒，以 0.1%升汞浸泡5~10 分钟，无菌水冲 洗 3~5 遍；剪 0.5cm 见方或整片接入培养基丰花月季：茎段（带一节）接入月 2 （月 2： MS+NAA0.1+BA3+3%糖+0.7%琼脂）、B1 （ B1： MS+BA 5+NAA0.5+3%糖+0.7%琼脂），一周后萌动，一个也后芽高0.8cm左右有的茎段形成两芽 生长一段时间后基部及触及培养基的叶片愈伤组织化将愈伤组织转入 ab 后弱光培养一 周，愈伤组织增殖2倍，转入正常培养花瓣：ab（MS+2, 4D2+BA2+3%糖+0.7%琼脂）中4片全形成愈伤组织，约一周后萌动形 成较大灰白色愈伤组织；FH中20/23形成愈伤组织，一周后萌动，但愈伤组织生长缓慢且 有部分发黑；条纹3 （改良MS+BA1+KT1+NAA0.5+3%糖+0.7%琼脂）12/22愈伤组织，灰 白、淡黄绿，生长较慢；FL （MS+BA2+KT3+NAA0.1+3%糖+0.7%琼脂）10/27愈伤组织， 灰白至淡黄绿，生长慢月季：花瓣：ab（MS+2, 4D2+BA2+3%糖+0.7%琼脂）中13/16，愈伤组织生长较快，黄绿色；FH 中5/7,生长慢且后发黑；TL（MS+BA0.5+NAA0.1+3%糖+0.7%琼脂）中3/9,生长慢，后 部分发黑，少量黄白色花药（成熟？）： ab（MS+2，4D2+BA2+3%糖+0.7%琼脂）中20/48，约两周后萌动（从中 部开始，是否是伤口？），生长较慢，黄白至黄绿色愈伤组织；FL（MS+BA2+KT3+NAA0.1+3% 糖+0.7%琼脂：4/38，约4-5周后萌动，生长缓慢形成小块愈伤组织，黄绿色条纹十二卷：茎段切口易褐化。

茎段接入条纹0 （条纹0：改良MS+BA0.5+KT2+IBA1+3%糖+0.7%琼脂）约15天后，诱导 出板块状愈伤组织并有根毛状附属物，呈龙爪状，迅速生长呈重叠状， 3 个月褐化后转接到 同种培养基，继续褐化，死亡茎段接入条纹1 （条纹1：改良MS+BA0.5+KT2+NAA1+3%糖+0.7%琼脂）培养，约20天 后诱导出芽，一个月后生长至0.5cm高，三个月后转接继代增殖时切取叶片或茎段或纵切 茎段转接 10 天后茎段基部切口及茎纵切切口处出现愈伤组织茎段纵切后所带叶片膨大 并逐渐变为半透明状，并明显增大， 30天后水渍状，死亡 20~30天后原带芽茎段中，原芽 长至0.8cm左右高，芽上叶片膨大，基部生出一芽，茎基部有一团愈伤组织并于其下出现与 诱导培养一样的龙爪状愈伤组织并有根毛状附属物两个月后生成4芽，转接原不带芽茎 段转入条纹2 （条纹2：改良MS+BA2+KT2+NAA1+3%糖+0.7%琼脂）中，愈伤组织化，而 后褐化、水渍状、死亡原芽上剥取的叶片转入条纹2中，少数褐化死亡，多数先切口部分 褐化，整体膨大，而后水渍状、褐化、死亡原愈伤组织转如条纹1 改良、条纹2中均褐化， 未见生长，而后死亡。

以上现象基本可判断：切口面积过大对材料影响很大，增殖时应以完整的芽剥离母体进行增 殖；IBA可能促进根的生成材料易出现水渍化及褐化，是否在培养基中添加一些抗坏血酸或活性炭，并减少水分含量 增殖培养基的对照：将芽丛中的芽剥离， 进行增殖培养 分别接入条纹 1(MS+BA0.5+KT2+NAA1)、条纹 3(改良 MS+BA1+KT1+NAA0.5), 50 天后记录数据如下:丄卄氓甘 培养基条纹1条纹3序号原芽数后牙数增殖倍数原芽数后牙数增殖倍数139422215311381101231138合计9343.814624.9条纹1中芽较膨大，叶片肥厚，大，有些异常，愈伤组织较多；条纹3中增殖较好芦荟: 诱导培养MS+NAA0.15+BA2.5+…叶片生根不生长也不增殖；B1即MS+NAA0.1+BA5 约10天后萌动，一个月后形成丛生芽，一茎段上约4~5芽三个月后转接增殖于B1、月2 （MS+NAA0.1+BA3）中培养转接后20天，B1中每芽丛6〜7芽，月2中每芽丛4〜5芽（此 数据原芽未统计，且统计数少，不足为据从现象上看， B1 中芽丛多，生长均匀，无明 显愈伤组织块，月 2中有些茎段似有愈伤组织化及褐变迹象，部分叶尖发褐焦尖（培养基含 水过少，瓶内湿度不足？？）。

芽转入月2' （MS+NAA0.1+BA3+活性炭），单芽生长，小芽 丛也生长、生根转入后20天，单芽及小芽丛均有根1,平均长度约1cm （活性炭促进生 根？）花叶芋:幼叶叶柄在月2培养基中， 10〜15天后叶柄基部膨大， 20〜30天后有1叶柄长出新 叶（是否带茎尖？？或BA高直接分化芽？？后污染大花蕙兰: 诱导培养接于蝴1 （蝴1： 1/2MS （无机）+NAA0.5+活性炭0.1%+2 %糖+0.7% 琼脂）， 30天后萌动， 60天后形成数芽，日久生根蝴1上增殖缓慢， 10个月后约形成10 个芽，其中外侧三芽生根成苗转接蕙1 （蕙1： 1/2MS+香蕉汁100g/L+活性炭0.1%+3%糖 +0.7%琼脂）中大苗生长良好，增殖较好，一个月后增殖率可达2.5倍继续转接增殖慢， 大苗生长好后转接入蕙（蕙：1/2MS+NAA0.01+BA0.1+0.1%活性炭+3%糖+0.7%琼脂） 蝴蝶兰：无菌苗转接入蝴1、蝴2中（蝴1： 1/2MS （无机）+NAA0.5+活性炭0.1%+2 %糖 +0.7%琼脂，蝴2： MS+NAA0.5+BA0.5+活性炭0.1%+3%糖+0.7%琼脂）其中蝴2中生长不 良，死亡率较高，少有增殖，蝴1 中生长一般，大苗生长差，小芽有增殖。

转接入蝴3（蝴 3 （H3A）： 1/2MS+NAA0.5+0.1%活性炭+香蕉100g/L+3%糖+0.7%琼脂）生长增殖均较好鹅掌柴：茎段接入月4 （月4： MS+KT2+3%糖+0.7%琼脂）中两周后产生愈伤组织，黄色 半透明，转接入仙2（仙2： MS+BA2+KT0.2），一个月后愈伤组织上长苗，后褐化？？死亡 白掌：茎段接入月 2，月 2再转月 2，数月后生成芽丛并生根，且根很长仙客来：将种子接于仙（1/2MS+3%糖+0.7%琼脂）上，种子约一个月后萌动，发芽率约80%， 获得黄化苗，苗瘦弱，基部逐渐形成小球茎接触培养基的叶片部分绿色且卷曲，似有愈伤 组织生成，但之后无进一步生长，并逐渐褐化原苗转接到仙 1（1/2MS+NAA0.5+BA0.1+AD 10+3%糖+0.7%琼脂）萌发种子形成的小球茎 约一个月后形成叶片，发芽率约50%，较长时间的培养并无继代，无生长似老化， 3-4个月 后转接不生长仅有少数由褐转黄继续继代转入仙客来NAA （MS+NAA0.2+BA3+KT1+3%糖+0.7%琼脂），生长较好，长时间 未转接，苗褐化死亡，基部仅残留褐色球茎转入仙客来IBA （MS+IBA0.5+BA2+KT1+ 3% 糖+0.7%琼脂）中生长不良。

菊花： 茎段接种于 B1 （B1: MS+BA 5+NAA0.5+3%糖 +0.7%琼脂）、月 2 （月 2: MS+NAA0.1+BA3+3%糖+0.7%琼脂），一周后产生愈伤组织，B1中愈伤组织坚实色深，月 2 中愈伤组织色较浅， 20 天后月 2 中有芽分化将愈伤组织转接到月 2、仙 2（仙 2：MS+BA2+KT0.2）、草莓（MS+NAA0.025+BA0.25+3%糖+0.7%琼脂）中进行分化培养，月2 中分化苗生长正常，但愈伤组织发褐，一个月后苗最高达 1.5cm，多数达0.5cm ；MS+NAA0.025+BA0.25+3%糖+0.7%琼脂中分化的小苗正常，单较月2中的略差，愈伤组织 发褐，苗可达0.5cm高；仙2中分化的小苗，叶上无绒毛，叶大，叶全缘，苗多而密，愈伤 组织绿色为主，苗达1cm高，继续培养苗逐渐转为正常虎耳草：匍匐茎茎段，接种于月 2 中一周后萌动，茎段变粗变白，形成半透明愈伤组织， 20天后形成芽丛分割转接到月 2中，增殖效果好，可达每20天20倍左右 吊兰：茎段接种于月 2中， 20天后变绿，基部膨大，形成芽丛，于月 2中增殖，月 6中生 长壮苗、生根。

绫锦：幼叶接入B1中，一周后基部膨大，一个月后根达2〜3,长达1cm左右，而后在叶 基部形成芽点，两个月后形成小苗，高达0.5cm，原叶逐渐褐化死亡转入月2培养基，50 日后，一带叶与根的材料黄褐死，另一带根的芽增殖成芽丛，约含5 芽转入条纹，生长良 好玫瑰海棠：分别取不同外植体接入玫2（玫2： MS+BA1+ 3%糖+0.7%琼脂）中培养花瓣 （整个）基部一个月后形成小芽点，两个月后形成芽丛；花轴分枝的节一个月后也形成芽点， 两个月后形成芽丛；茎段的节部腋芽一个月后萌动，两个月后形成高约1cm的芽；腋芽约 一个月后萌动，无明显生长芽丛转入条纹，生长良好水晶掌：接叶、茎段（带小叶）茎：7个，分别接月2几B1 （光下）：月2中5个茎段，均萌动，约两周后萌动（有带小叶 1 片）叶片长大，其中有1 茎段形成小芽丛及愈伤组织块； B1 中 2茎段有1 萌动，叶长大 叶片接入培养基月 2、 ab叶片：接入培养基后分别于弱光与正常光下培养弱光下：约一周后有叶片萌动，基部膨大， 50 日后， ab 中形成大量愈伤组织，叶片基 部最先形成的愈伤组织部分为胚状体，诱导率约80%（4/5）起始时生长较光下快，后转慢， 2个月后置于光下；月2中基部形成芽丛（约两周后，6/8）,可见小叶片，约2mm，芽数多， 两个月后约 20-30/块，从外观上看芽似乎从叶基部伤口处的叶肉组织形成的愈伤组织中分化 而成。

后转光下正常光下：ab中约一周后萌动（11/11），形成愈伤组织块，同时愈伤组织中有部分呈胚 状组织状，表面光滑，淡绿色，颗粒从mm-7mm愈伤组织有淡黄绿色，半透明状，也有 黄褐色半透明状，也有白色半透明状；月2中 50日后萌动（1/5），仅1 萌动形成1 芽，另4 叶色变褐ab中形成的愈伤组织有两种形态，一种应为胚状愈伤组织，黄绿色，颗粒大，约3mm 直径，表面有少量皱摺；另一种为一般愈伤组织，黄色疏松小颗粒状聚集成块继代培养：原胚状愈伤组织转入MS0,部分形成大量根；转入愈2,生成大量根并有部分根上形成 芽丛原疏松愈伤组织转入MS0，部分形成大量根，部分继续保持愈伤组织状态；转入ab中 部分老化，部分有带叶片的继续形成愈伤组织原芽丛转入月 2月 3，部分转化成愈伤组织，同时有新的愈伤组织形成在月3 中芽丛 较健壮，在月 2 中部分芽丛愈伤组织化，且愈伤组织部分变红。