中国药典版抗生素品种增修订概况ppt课件.ppt

中国药典中国药典中国药典中国药典20212021年版抗生素种类年版抗生素种类年版抗生素种类年版抗生素种类 增修订概略增修订概略增修订概略增修订概略 一、概略一、概略: 2021年版药典抗生年版药典抗生素种类收载情况，见表：素种类收载情况，见表： 品种品种原料原料新增新增制制剂剂新增新增总总数数新增新增β-β-内内酰酰胺胺类类头孢头孢菌素菌素类类272711114848191975753030青霉素青霉素类类与与酶酶抑制抑制剂剂20203 328286 648489 9碳青碳青酶酶烯类烯类及及单环单环β-β-内内酰酰胺胺类类2 21 12 21 14 42 2大大环环内内酯类酯类13132 235354 448486 6氨基糖苷氨基糖苷类类141425251 139391 1四四环环素素类类6 612121818利福霉素利福霉素类类1 17 78 8林可霉素林可霉素类类2 24 46 6酰酰胺醇胺醇类类4 411111515多多肽类肽类与与肽类肽类4 42 24 42 28 84 4抗真菌抗真菌类类3 33 36 6抗抗肿肿瘤抗生素瘤抗生素类类6 62 26 61 112123 3磷霉素磷霉素类类3 35 58 8其他抗生素其他抗生素3 34 47 7喹诺酮类喹诺酮类12123 334345 546468 8总计总计120120242422822839393483486363l二、二、20212021年版药典抗生素类药规范增年版药典抗生素类药规范增修订要点修订要点: :l1 1、鉴别项下尽能够运用专属性强的鉴、鉴别项下尽能够运用专属性强的鉴别反响别反响, , 如：光谱法：如：光谱法：IR IR 色谱法：色谱法：HPLC TLCHPLC TLC等，与钠、钾、盐酸盐、硫等，与钠、钾、盐酸盐、硫酸盐的鉴别反响酸盐的鉴别反响. . 规范中鉴别反响规范中鉴别反响HPLCHPLC与与TLCTLC二法并列。

有利于基层检验二法并列有利于基层检验机构的选择机构的选择 l2. 2. 新方法新技术进一步在规范中扩展运用新方法新技术进一步在规范中扩展运用l 2.1 2.1 运用运用HPLC-ELSDHPLC-ELSD测定氨基糖苷类测定氨基糖苷类抗生素的组分，有关物质，特定杂质及含抗生素的组分，有关物质，特定杂质及含量的种类进一步添加量的种类进一步添加l 同时又用该方法测定硫酸盐〔同时又用该方法测定硫酸盐〔SO4SO4〕〕的含量l 用用HPLC-ELSDHPLC-ELSD替代替代TLCTLC检查有关物质与检查有关物质与组分，可组分，可 提高检测灵敏度提高检测灵敏度 如如: : 硫酸依替米星及制剂的有关物质硫酸依替米星及制剂的有关物质, ,硫酸盐及硫酸盐及含量测定含量测定 硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡B B以及含以及含量测定，量测定， 硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素C C组分及有组分及有关物质测定，关物质测定， 硫酸小诺霉素及其制剂的组分测定。

硫酸小诺霉素及其制剂的组分测定 妥布霉素及制剂的有关物质测定等妥布霉素及制剂的有关物质测定等l2.2 2.2 本版本版药典运用典运用HPCEHPCE方法的种方法的种类有有2 2个，其个，其中一个中一个为盐酸酸头孢吡吡肟中中N-N-甲基吡咯甲基吡咯烷的含量的含量测定l3. 3. 本版本版药典抗生素典抗生素类增修增修订有关物有关物质项较多，多，β-β-内内酰胺胺类抗生素抗生素127127个种个种类中有中有116116个种个种类采用采用HPLCHPLC测定有关物定有关物质l 喹诺酮类4646个种个种类就有就有4040个种个种类用用HPLCHPLC法法测定有关物定有关物质l 其他如其他如: :l 氯霉素霉素类，大，大环内内酯类，氨基糖苷，氨基糖苷类, ,利福利福平等均增修平等均增修订了有关物了有关物质检查项l3.1 3.1 对检查有关物质与含量测定的对检查有关物质与含量测定的HPLCHPLC方法的方法的系统适用性实验进展修正并完善系统适用性实验进展修正并完善l3.1.1 3.1.1 在系统适用性实验中均规定了主峰与指在系统适用性实验中均规定了主峰与指定杂质峰的分别度，定杂质峰的分别度，l 梯度洗脱时标明主峰的保管时间，使方法的梯度洗脱时标明主峰的保管时间，使方法的可操作性强，保证了结果的准确性。

可操作性强，保证了结果的准确性l3.1.2 3.1.2 对杂质数多或多组分的、分别难度大对杂质数多或多组分的、分别难度大的种类，中检所提供混合杂质对照品，多组分的种类，中检所提供混合杂质对照品，多组分对照品及规范图谱对照品及规范图谱. .l 如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等l l 该混合对照品用于系统适用性实验，测得该混合对照品用于系统适用性实验，测得的色谱图应与规范图谱一致便于操作，保证的色谱图应与规范图谱一致便于操作，保证了方法的有效性了方法的有效性l3.1.3 3.1.3 由于系统适用性对照品及规范图谱的由于系统适用性对照品及规范图谱的提供，确定各杂质峰的保管时间，有利于制剂提供，确定各杂质峰的保管时间，有利于制剂的有关物质检查可利用对照品溶液色谱图中的有关物质检查可利用对照品溶液色谱图中杂质的保管时间，对特定杂质进展控制杂质的保管时间，对特定杂质进展控制l3.1.4 3.1.4 有关物质采用本身对照时，对本身纯有关物质采用本身对照时，对本身纯度低于度低于85%85%的种类，提出对本身对照溶液主峰的种类，提出对本身对照溶液主峰进展校正。

以免纯度较低种类采用本身对照法进展校正以免纯度较低种类采用本身对照法引起的结果偏高而影响正确性引起的结果偏高而影响正确性l4. β-4. β-内内酰胺胺类抗生素的有关物抗生素的有关物质检查方法与国方法与国外外药典根本一致，在分典根本一致，在分别度度实验中根据中根据实践情况践情况进展修正，更有利方法的可操作性展修正，更有利方法的可操作性l 有很多种有很多种类采用采用HPLCHPLC梯度洗脱法梯度洗脱法测定有关物定有关物质，，如：如：头孢地尼，地尼，头孢唑林林钠，拉氧，拉氧头孢钠, , 阿莫阿莫西林及其复方制西林及其复方制剂，氨，氨苄西林等l5. 5. 喹诺酮类抗生素的有关物质检查，喹诺酮类抗生素的有关物质检查，EPEP、、BPBP、、USPUSP均采用均采用TLCTLC、、HPLCHPLC两种方法进展控制两种方法进展控制l 本版药典提出用本版药典提出用HPLCHPLC在主峰洗脱后梯度洗脱的方在主峰洗脱后梯度洗脱的方法，将法，将EPEP用用TLCTLC、、HPLCHPLC两种方法检测的杂质在同一两种方法检测的杂质在同一HPLCHPLC系统中检测系统中检测. .l 同时根据各杂质最大吸收波长的不同，用双波长同时根据各杂质最大吸收波长的不同，用双波长检测，检测，l l 对照品外标法与加校正因子与不加校正因子本对照品外标法与加校正因子与不加校正因子本身对照法同时并列。

杂质身对照法同时并列杂质A A用用HPLCHPLC检测检测, ,灵敏度与正灵敏度与正确性均优于确性均优于TLCTLC法使该类种类规范的技术含量高法使该类种类规范的技术含量高于国外药典规范于国外药典规范l6. 6. 四环素类一致了该种类有关物质与含量测定的四环素类一致了该种类有关物质与含量测定的HPLCHPLC法色谱条件，与法色谱条件，与20052005年版方法比较有较大改良年版方法比较有较大改良l 检出的杂质与检出的杂质与EP6.0EP6.0规定的杂质有相关性并根规定的杂质有相关性并根据国内产品实践情况，制定合理的限制据国内产品实践情况，制定合理的限制l7. 7. 氨基糖苷类用氨基糖苷类用HPLC-ELSDHPLC-ELSD替代替代TLCTLC检查有关物质检查有关物质与组分，提高检测灵敏度；与组分，提高检测灵敏度；l l 同时可用该方法测定硫酸盐〔同时可用该方法测定硫酸盐〔SO4SO4〕的含量〕的含量l8. 8. 红霉素类经对几种红霉素类经对几种HPLCHPLC方法比较后，采用方法比较后，采用同一同一HPLCHPLC方法检查红霉素与其衍生物以及制剂方法检查红霉素与其衍生物以及制剂中红霉素中红霉素A A、、B B、、C C及有关物质。

有利于同类种及有关物质有利于同类种类间质量的比较类间质量的比较l9. 9. 有关物质含量采用多种计算方法，如：不有关物质含量采用多种计算方法，如：不加校正因子的本身对照法，加校正因子的本身加校正因子的本身对照法，加校正因子的本身对照法，杂质对照品外标法根据各种类杂质对照法，杂质对照品外标法根据各种类杂质的情况，在同一种类中可以同时运用的情况，在同一种类中可以同时运用2 2种或种或3 3种种的计算方法的计算方法l10. 10. 添加有机溶媒检查的种类较多添加有机溶媒检查的种类较多l10.1 10.1 部分种类采用规范参与法，该方法可提高检部分种类采用规范参与法，该方法可提高检测灵敏度测灵敏度l10.2 10.2 另由于消费工艺的不同，各消费厂运用的有另由于消费工艺的不同，各消费厂运用的有机溶媒也不同，同一种类中能够有几十种的溶媒，机溶媒也不同，同一种类中能够有几十种的溶媒，为方便操作、经实验在规范中规定各溶剂的相对调为方便操作、经实验在规范中规定各溶剂的相对调整保管时间〔整保管时间〔RARTRART〕，检查时可先做供试品，从供〕，检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的试品中检出的溶媒的RARTRART与规定的与规定的RARTRART比较，确定比较，确定为何种溶媒时，再进展对照品测定，可减少任务量，为何种溶媒时，再进展对照品测定，可减少任务量，大大降低检验本钱，提高任务效率。

大大降低检验本钱，提高任务效率l11. 11. 为保保证临床运用的平安有效，供注射用床运用的平安有效，供注射用β-β-内内酰胺抗生素，除胺抗生素，除检查有关物有关物质外，添加高分子外，添加高分子聚合物的聚合物的检查在原来2121个种个种类根底上添加至根底上添加至4242个种个种类. .l 2005 2005年版年版药典典β-β-内内酰胺胺类抗生素种抗生素种类进展高展高分子分子杂质检查时，由于，由于该方法的分析周期方法的分析周期较长，，本版本版药典典对测定方法定方法进一步完善，采用直径一步完善，采用直径较细内径内径为1cm,1cm,长为30cm30cm的玻璃柱作的玻璃柱作为色色谱柱使分析周期析周期缩短至短至45-6045-60分分钟，，为原来周期的原来周期的1/31/3l  2005年版药典方法色谱柱填充剂均为年版药典方法色谱柱填充剂均为sephadex G10本版药典添加球状蛋白亲水硅胶为色谱柱填本版药典添加球状蛋白亲水硅胶为色谱柱填充剂的高分子聚合物分析方法充剂的高分子聚合物分析方法l12. 2005年版药典氨基糖苷类、大环内酯类的含量年版药典氨基糖苷类、大环内酯类的含量测定方法为微生物检定法的管碟法，本版药典添测定方法为微生物检定法的管碟法，本版药典添加微生物检定法浊度法，二法并列。

加微生物检定法浊度法，二法并列l13. 更多的种类用细菌内毒素的检查替代热原检查更多的种类用细菌内毒素的检查替代热原检查l14. 14. 大容量注射液与眼用制剂添加浸透压摩尔浓度大容量注射液与眼用制剂添加浸透压摩尔浓度检查l15.15.眼用制剂添加防腐剂检查眼用制剂添加防腐剂检查l l16.16.规范中涉及的知杂质，其化学命名均在规范最规范中涉及的知杂质，其化学命名均在规范最后列出，便于与国外药典的杂质比较后列出，便于与国外药典的杂质比较l三、抗生素种三、抗生素种类分分类引引见l 下面将重点引下面将重点引见β-β-内内酰胺胺类、、大大环内内酯类、氨基糖苷、氨基糖苷类、四、四环素素类、、酰胺醇胺醇类、利福霉素、利福霉素类、、喹诺酮类、、抗抗肿瘤瘤类、、肽类的抗生素在新版的抗生素在新版药典典中的增修中的增修订的情况l 1.β- 1.β-内内酰胺胺类抗生素抗生素 l 本本类抗生素包括：抗生素包括：头孢菌素菌素类、、青霉素青霉素类、、酶抑制抑制剂类、碳青霉、碳青霉烯类与与单环β-β-内内酰胺胺类共共127127个种个种类，占，占抗生素种抗生素种类的的36.8%36.8%。

1.11.1种种类类收收载载情况：情况： 表表1.1 1.1 头孢头孢菌素菌素类类种种类类收收载载情况情况 收收载载情况情况 原料原料 制剂制剂总计总计20102010年版年版药药典收典收载载品种品种 27 27 48 48 75 75新增品种新增品种 11 11 19 19 30 30l 头孢菌素类新增种类：l原料： 制剂：l1.头孢尼西钠 1.注射用头孢尼西钠l2.头孢地嗪钠 2.注射用头孢地嗪钠l3.头孢唑肟钠 3.注射用头孢唑肟钠l4.头孢吡肟钠 4.注射用头孢吡肟钠l5.头孢西丁钠 5.注射用头孢西丁钠l6.头孢克肟 6.头孢克肟片；7.头孢克肟胶囊；l 8.头孢克肟颗粒l7.头孢丙烯 9.头孢丙烯片；10.头孢丙烯干混悬剂l8.拉氧头孢钠 11.注射用拉氧头孢钠l9.盐酸头孢他美酯 12.盐酸头孢他美酯片；13.盐酸头孢他美干悬剂；l 14.盐酸头孢他美酯胶囊；15.盐酸头孢他美酯颗粒l10.头孢孟多酯钠 16.注射用头孢孟多酯钠l11.头孢泊肟酯 17.头孢泊肟酯片；18. 头孢泊肟酯胶囊；l 19.头孢泊肟酯干混悬剂 品种品种 收收载载情况情况 原料原料 制剂制剂 总计总计青霉素类青霉素类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 16 16 2 2 28 28 6 6 44 44 8 8酶酶抑制抑制剂类类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 4 4 1 1 4 4 1 1碳青霉碳青霉烯类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 1 1 1 1 2 2单环β-β-内内酰酰胺胺类类20102010年版年版药药典收典收载载品种品种新增品种新增品种 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2表表表表1.2 1.2 青霉素青霉素青霉素青霉素类类，，，，酶酶抑制抑制抑制抑制剂剂，碳青霉，碳青霉，碳青霉，碳青霉烯类烯类与与与与单环单环β-β-内内内内酰酰胺胺胺胺类类种种种种类类收收收收载载情况情况情况情况l青霉素类与酶抑制剂青霉素类与酶抑制剂:l新增种类：新增种类：l 原料：原料：                      制剂：制剂：l 1.阿洛西林钠阿洛西林钠           1.注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠l 2.美洛西林钠美洛西林钠           2.注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠  l 3.他唑巴坦他唑巴坦               3.注射用哌拉西林钠他唑巴坦注射用哌拉西林钠他唑巴坦l                                   4. 阿莫西林克拉维酸钾分散片；阿莫西林克拉维酸钾分散片；l                                   5.阿莫西林克拉维酸钾颗粒；阿莫西林克拉维酸钾颗粒；l                                   6.阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂l单环β-β-内内酰胺胺类新增种新增种类：：l原料：原料： 制制剂：：l氨曲南氨曲南 注射用氨注射用氨曲南曲南l1.2 20211.2 2021年版药典本类抗生素药质量规年版药典本类抗生素药质量规范要点范要点 l1.2.1 1.2.1 性状性状 l 本类药物均为半合成的头孢菌素及其本类药物均为半合成的头孢菌素及其制剂，原料药外观性状普通为白色至微制剂，原料药外观性状普通为白色至微黄色粉末或结晶性粉末。

黄色粉末或结晶性粉末l 注射用粉针剂的外观性状与原料一样注射用粉针剂的外观性状与原料一样l1.2.2 1.2.2 鉴别鉴别 l 原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法HPLCHPLC，光谱法，光谱法IRIR以及钾、钠离子火焰反响，也以及钾、钠离子火焰反响，也有多个种类采用有多个种类采用HPLCHPLC与与TLCTLC二法并列少数种二法并列少数种类有用类有用UVUV鉴别l l 固体口服制剂普通用固体口服制剂普通用HPLCHPLC或或HPLCHPLC与与TLCTLC作作为鉴别，二法并列少数有用为鉴别，二法并列少数有用UVUV法作为鉴别法作为鉴别l1.2.31.2.3溶液的廓清度与溶液的廓清度与颜色色l 检查溶液的廓清度与溶液的廓清度与颜色是控制色是控制β-β-内内酰胺胺类注射用的原料注射用的原料药与制与制剂内在内在质量的一个重要目量的一个重要目的规范中大部分采用与范中大部分采用与规范管范管进展比展比浊和比色和比色的目的目测法l 本版本版药典有多个种典有多个种类采用紫外采用紫外- -可可见分光光度分光光度法在特定的波法在特定的波优点点测定吸光度，控制溶液的定吸光度，控制溶液的颜色，色，如：如：头孢尼西尼西钠、、 头孢噻肟钠。

l1.2.4 1.2.4 有关物质有关物质 l1.2.4.1 1.2.4.1 头孢菌素类药物原料头孢菌素类药物原料2727个种类均规定个种类均规定检查有关物质，制剂检查有关物质，制剂4242个种类除个种类除6 6个种类颗粒与个种类颗粒与干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外, , 其他种类均有有关物质检查其他种类均有有关物质检查l 头孢菌素种类有关物质检查均采用头孢菌素种类有关物质检查均采用HPLCHPLC法，除法，除头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其他均头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其他均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测紫外检测l   其中有头孢地尼、头孢克洛、头孢唑啉钠、其中有头孢地尼、头孢克洛、头孢唑啉钠、 头孢西丁钠、头孢西丁钠、 头孢克肟、头孢噻肟钠、头孢克肟、头孢噻肟钠、 头孢头孢噻吩钠、噻吩钠、 拉氧头孢钠、拉氧头孢钠、 头孢呋辛钠、头孢丙头孢呋辛钠、头孢丙烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共29个种个种类用类用HPLC法梯度洗脱。

法梯度洗脱表表1.3  头孢头孢菌素的有关物菌素的有关物质检查质检查 总总数数 有关物有关物质质 HPLC HPLC梯度洗脱梯度洗脱原料原料 27 27 27 27 12 12制制剂剂 42 42 36 36 17 17l1.2.4.2 1.2.4.2 青霉素青霉素类、、酶抑制抑制剂、碳青霉、碳青霉烯类与与单环β-β-内内酰胺胺类原料原料2222个种个种类均均规定定检查有有关物关物质，，l 制制剂2525个种个种类除除5 5个种个种类片，片，颗粒与干混粒与干混悬剂等由于等由于辅料干料干扰未未规定定检查有关物有关物质外外, , 其其他种他种类均有有关物均有有关物质检查l l有关物质检查均采用有关物质检查均采用HPLCHPLC法，法，l 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测谱，紫外检测l 其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠( (钾钾) )、青霉素、青霉素V V钾、氨苄西林、氨苄西林钠、钾、氨苄西林、氨苄西林钠、氨曲南等原料及其制剂共氨曲南等原料及其制剂共2727个种类采用梯度洗个种类采用梯度洗脱方法。

脱方法 总总数数 有关物有关物质质 HPLC HPLC梯度洗脱梯度洗脱 原料原料 20 20 20 20 11 11 制制剂剂 28 28 23 23 15 15 表1.5 碳青霉烯类与单环β-内酰胺类 有关物质检查 总总数数 有关物有关物质质 HPLC HPLC梯度洗脱梯度洗脱 原料原料 2 2 2 2 1 1 制制剂剂 2 2 2 2 1 1表表表表1.4 1.4 青霉素类与酶抑制剂有关物质检查青霉素类与酶抑制剂有关物质检查青霉素类与酶抑制剂有关物质检查青霉素类与酶抑制剂有关物质检查l1.2.4.3 1.2.4.3 采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱的行为略有差别，故在系统适用性实验中，应的行为略有差别，故在系统适用性实验中，应规定主峰的出峰时间，主峰与知杂质的分别度规定主峰的出峰时间，主峰与知杂质的分别度等要求。

等要求l 如：头孢地尼规定如：头孢地尼规定: :l 主成分头孢地尼峰保管时间约为主成分头孢地尼峰保管时间约为2222分钟，分钟，E-E-异构体峰保管时间约为头孢地尼峰保管时间的异构体峰保管时间约为头孢地尼峰保管时间的1.51.5倍，实际板数按头孢地尼峰计算不低于倍，实际板数按头孢地尼峰计算不低于70007000，头孢地尼峰与其相对保管时间，头孢地尼峰与其相对保管时间0.950.95和和1.11.1处杂处杂质峰的分别度均应不小于质峰的分别度均应不小于1.01.0l 如：头孢丙烯规定：l 头孢丙烯(Z)异构体峰的保管时间约为23～30分钟，头孢丙烯〔E〕异构体峰的保管时间约为30～40分钟，实际板数按头孢丙烯〔Z〕异构体峰计算应不小于10000，头孢丙烯〔Z〕异构体峰与相邻杂质峰间的分别度应符合要求 l如：头孢克洛规定: l 头孢克洛峰的保管时间约为23分钟，头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰的分别度应不小于2.0，头孢克洛峰的拖尾因子应小于1.2l1.2.4.4 1.2.4.4 由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.050.05倍或倍或0.10.1倍的峰可忽略不计。

以免基线噪音倍的峰可忽略不计以免基线噪音影响结果正确性影响结果正确性l1.2.4.5 1.2.4.5 有关物质测定结果计算可分为三种方法：有关物质测定结果计算可分为三种方法：l(1). (1). 不加校正因子的本身对照法；不加校正因子的本身对照法；l(2). (2). 加校正因子的本身对照法；加校正因子的本身对照法；l(3). (3). 知杂质对照品外标法知杂质对照品外标法l     用杂质对照品外标法计算知杂质的用杂质对照品外标法计算知杂质的含量含量,用加校正因子与不加校正因子的用加校正因子与不加校正因子的本身对照法计算知杂质和未知杂质的含本身对照法计算知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量量和杂质的总量l   有关物质包括知杂质与未知杂质，故有关物质包括知杂质与未知杂质，故在方法中可分别规定用杂质对照品外标在方法中可分别规定用杂质对照品外标法、加校正因子与不加校正因子的本身法、加校正因子与不加校正因子的本身对照法计算对照法计算l如：头孢他啶中吡啶与头孢拉定中头孢氨苄均如：头孢他啶中吡啶与头孢拉定中头孢氨苄均采用杂质对照品外标法采用杂质对照品外标法l 头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄中头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄中7-7-氨基氨基去乙酰氧基头孢烷酸〔去乙酰氧基头孢烷酸〔7-ADCA7-ADCA〕及头孢哌酮钠〕及头孢哌酮钠中杂质中杂质A A等均采用杂质对照品外标法。

等均采用杂质对照品外标法l如：如：头孢拉定中知拉定中知杂质：：l 7- 7-氨基去乙氨基去乙酰氧基氧基头孢烷酸〔酸〔7-ADCA7-ADCA〕〕l 双双氢苯苷氨酸〔苯苷氨酸〔220nm220nm〕〕l 头孢氨氨苄l 头孢氨氨苄中知中知杂质：：l 7- 7-氨基去乙氨基去乙酰氧基氧基头孢烷酸〔酸〔7-ADCA7-ADCA〕〕l α- α-苯苷氨酸苯苷氨酸l 头孢羟氨苄中知杂质：l 7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸〔7-ADCA〕l α-对羟基苯苷氨酸l 头孢哌酮钠中知杂质：l 杂质A〔原称为头孢哌酮降介物β〕l如：如：头孢羟氨氨苄: : l 供供试品溶液色品溶液色谱图中如有中如有杂质峰，含峰，含α-α-对羟基苯甘氨酸和基苯甘氨酸和7-7-氨基去乙氨基去乙酰氧基氧基头孢烷酸按外酸按外标法以峰面法以峰面积计算，均不得算，均不得过1.0%1.0%；其他；其他单个个杂质峰面峰面积不得大于不得大于对照溶液主峰面〔照溶液主峰面〔1.0%1.0%〕，其他〕，其他各各杂质峰面峰面积的和不得大于的和不得大于对照溶液主峰面照溶液主峰面积的的3 3倍〔倍〔3.0%3.0%〕〕, ,供供试品溶液色品溶液色谱图中任何小于中任何小于对照照溶液主峰面溶液主峰面积0.050.05倍的峰可忽略不倍的峰可忽略不计. .l如：头孢哌酮钠如：头孢哌酮钠l 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含杂质供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含杂质A A按按外标法以峰面积计算，不得过外标法以峰面积计算，不得过3.0%3.0%，其他单个，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2 2倍倍〔〔2 2％〕，其他各杂质峰面积的和不得大于对％〕，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的照溶液主峰面积的3 3倍〔倍〔3.0%3.0%〕〕, ,供试品溶液色供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.10.1倍的峰倍的峰可忽略不计。

可忽略不计l1.2.4.6 1.2.4.6 在检测中根据杂质最大吸收波在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，采用双波长测定，长的不同，采用双波长测定，l 如：头孢拉定有关物质测定时，用不同如：头孢拉定有关物质测定时，用不同波长波长 测定不同杂质，测定不同杂质，l 用用220nm220nm波长检测双氢苯苷氨酸，波长检测双氢苯苷氨酸，l 用用254nm254nm波长检测其他杂质波长检测其他杂质l1.2.5 1.2.5 高分子聚合物高分子聚合物l1.2.5.1 1.2.5.1 高分子聚合物是高分子聚合物是β-β-内内酰胺胺类抗抗生素生素临床床过敏反响的一个主要要素，故在敏反响的一个主要要素，故在注射用原料及其制注射用原料及其制剂规范中添加范中添加检查高分高分子聚合物，控制一定的限制，子聚合物，控制一定的限制，对临床用床用药平安有效具有平安有效具有艰苦的意苦的意义l 2005 2005年版年版药典已有２１个种典已有２１个种类收收载高高分子聚合物分子聚合物检查，本版，本版药典添加到典添加到 42 42 个种个种类l 其中其中4040个种个种类以葡聚糖凝胶以葡聚糖凝胶G-10(40G-10(40～～120μm)120μm)为填充填充剂的玻璃柱〔的玻璃柱〔1.01.0～～1.4×30cm1.4×30cm〕色〕色谱柱的凝胶色柱的凝胶色谱法法测定，定，l 2 2个种个种类以球状蛋白色以球状蛋白色谱用用亲水硅胶〔水硅胶〔分子量分子量为10001000－－50005000〕〕为填充填充剂为色色谱柱的柱的HPLCHPLC法法测定。

定表表1.6 1.6 凝胶色凝胶色谱测谱测定高分子聚合物定高分子聚合物〔〔200200５年版已收５年版已收载载2121个种个种类类〕〕 原料原料 制制剂剂 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 注射用注射用头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢唑头孢唑林林钠钠 注射用注射用头孢唑头孢唑林林钠钠 头孢头孢曲松曲松钠钠 注射用注射用头孢头孢曲松曲松钠钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 注射用注射用头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋头孢呋辛辛钠钠 注射用注射用头孢呋头孢呋辛辛钠钠 头孢头孢他他啶啶 注射用注射用头孢头孢他他啶啶 青霉素青霉素钠钠 注射用青霉素注射用青霉素钠钠 青霉素青霉素V V钾钾 青霉素青霉素V V钾钾胶囊胶囊 阿莫西林阿莫西林 阿莫西林胶囊阿莫西林胶囊 头孢头孢拉定拉定表表1.7.  凝胶色凝胶色谱测谱测定高分子聚合物定高分子聚合物                     〔〔2021年版新增年版新增19个种个种类类〕〕 原料原料 制制剂剂 头孢唑肟钠头孢唑肟钠 注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠 头孢替唑钠头孢替唑钠 注射用头孢替唑钠注射用头孢替唑钠 头孢尼西钠头孢尼西钠 注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠 头孢噻吩钠头孢噻吩钠 注射用头孢噻吩注射用头孢噻吩 磺苄西林钠磺苄西林钠 注射用磺苄西林钠注射用磺苄西林钠 阿洛西林钠阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠 美洛西林钠美洛西林钠 注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠 氯唑西林钠氯唑西林钠 注射用氯唑西林钠注射用氯唑西林钠 苯唑西林钠苯唑西林钠 注射用苯唑西林钠注射用苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 表表1.8  HPLC测测定高分子聚合物定高分子聚合物      〔〔2021年版新增年版新增2个种个种类类〕〕 原料原料 制制剂剂 头孢头孢地地嗪钠嗪钠 注射用注射用头孢头孢地地嗪钠嗪钠l1.2.5.2 1.2.5.2 国内关于国内关于β-β-内内酰胺胺类抗生素高分子抗生素高分子杂质的研的研讨任任务是于是于7070年代开年代开场，，阅历了近了近4040年的研年的研讨，于，于20002000年版年版药典在典在4 4个种个种类8 8个个药品品规范中正式收范中正式收载了高分子了高分子杂质检查。

l 2005 2005年版年版药典典扩展到展到1111个种个种类的的2121个个药品品规范中均有高分子范中均有高分子杂质检查l l 但在但在20052005年版年版药典典β-β-内内酰胺胺类抗生素种抗生素种类进展高分子展高分子杂质检查时，由于，由于该方法的分析周方法的分析周期期较长，加之在，加之在执行行过程中涉及到程中涉及到较多消多消费厂厂与与检验部部门，任，任务量大幅度添加量大幅度添加l 作作为常常规检验方法有必要方法有必要进展改良，思索到展改良，思索到原原药典收典收载的方法在原理，系的方法在原理，系统适用性适用性实验，，以及方法以及方法验证专属性、重属性、重现性、准确性等方面性、准确性等方面均符合要求，而均符合要求，而仅仅是分析周期是分析周期过长. . l    因此在研讨建立新的方法时，我们仍采用凝胶色谱的分别因此在研讨建立新的方法时，我们仍采用凝胶色谱的分别方式，并采用原方法中的本身对照外标法，进展高分子聚合方式，并采用原方法中的本身对照外标法，进展高分子聚合物杂质的测定在上述二个根本条件不变的前提下进展方法物杂质的测定在上述二个根本条件不变的前提下进展方法学的改良学的改良,完善。

完善l1.2.5.2.1  拟采用直径较细，内径为拟采用直径较细，内径为1cm,长为长为30cm的玻璃柱作的玻璃柱作为色谱柱以为色谱柱以sephadexG10为填充剂，柱内径的减少，柱床为填充剂，柱内径的减少，柱床体积随之也变小体积随之也变小Kv=0也降低分析周期缩短至也降低分析周期缩短至45-60分钟，分钟，是原方法周期的是原方法周期的1/3〔见图1.1，图，图1.3〕〕l1.2.5.2.2 1.2.5.2.2 在系统适用性实验中规定分别在系统适用性实验中规定分别度的要求，在高分子杂质检查时，某些药度的要求，在高分子杂质检查时，某些药物分子单体与高聚物不能到达基线分别时，物分子单体与高聚物不能到达基线分别时，其分别度计算公式为：其分别度计算公式为：l R= R=聚合体的峰高聚合体的峰高/ /单体与聚合体之间的谷单体与聚合体之间的谷高高l〔分别度〔分别度R R应大于应大于2.02.0〕l 由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品中的高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合中的高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合物对照品配制分别度实验用溶液，物对照品配制分别度实验用溶液，l 根据本方法的分别原理，拟参与一定量的蓝根据本方法的分别原理，拟参与一定量的蓝色葡聚糖色葡聚糖20002000，制成含一定浓度蓝色葡聚糖，制成含一定浓度蓝色葡聚糖20002000的样品溶液来进展分别度实验。

的样品溶液来进展分别度实验l根据上面公式，分别度随着聚合物峰高的增大根据上面公式，分别度随着聚合物峰高的增大而增大，故参与蓝色葡聚糖而增大，故参与蓝色葡聚糖20002000的量应该有一的量应该有一定的要求，在研讨方法时，根据种类项下规定定的要求，在研讨方法时，根据种类项下规定的限制及蓝色葡聚糖的限制及蓝色葡聚糖20002000在该系统中的呼应值在该系统中的呼应值, ,－般参与的量为聚合物规定限制呼应值的－般参与的量为聚合物规定限制呼应值的1-21-2倍即可〔见图倍即可〔见图1.21.2，图，图1.41.4〕〕图图1.1  阿莫西林样品分析全程色谱图阿莫西林样品分析全程色谱图图图1.2 阿莫西林分别度计算色谱图阿莫西林分别度计算色谱图  图1.3 头孢他啶样品分析全程色谱图(流速:0.8ml/min)图图1.4 1.4 头孢他啶分别度计算色谱图头孢他啶分别度计算色谱图 l1.2.5.2.3 1.2.5.2.3 方法比较方法比较 l 用用20052005年版药典方法和改良后的方法测年版药典方法和改良后的方法测定定20052005年版药典收载年版药典收载1111个种类的个种类的F F值与高值与高聚物的含量聚物的含量, ,结果根本一致〔见表结果根本一致〔见表1.9,1.101.9,1.10〕。

〕l 因此本版药典凝胶色谱高分子聚合物因此本版药典凝胶色谱高分子聚合物项下仅将色谱柱修订为内径项下仅将色谱柱修订为内径1.01.0～～1.4cm,1.4cm,长为长为3030～～40cm40cm的玻璃柱即两种不同规的玻璃柱即两种不同规格柱并列，可根据实践条件选择，测定格柱并列，可根据实践条件选择，测定结果是一致的结果是一致的 品种品种20052005年版年版药药典方法典方法 F F值值改改进进后的方法后的方法F F值值相相对对偏差偏差 阿莫西林阿莫西林均均值值：：F=42.63*10F=42.63*10-3-3 (n=36) (n=36)均均值值：：F=41.0236*10F=41.0236*10-3-3 (n=31)(n=31)±1.92%±1.92% 头孢唑头孢唑林林钠钠均均值值：：F=1.3807*10F=1.3807*10-3-3 (n=11)(n=11)均均值值：：F=1.3794*10F=1.3794*10-3-3 (n=33)(n=33)±0.17%±0.17% 头孢头孢拉定拉定均均值值 F=0.8150×10 F=0.8150×10-3-3 (n=5)(n=5)　　均均值值：：F=1.6768×10F=1.6768×10-3-3(n=5)(n=5)±1.42%±1.42% 头孢头孢他他啶啶均均值值:F= 0.8682×10:F= 0.8682×10-3-3 (n=5)(n=5)　　　　　　均均值值：：F=0.8984×10F=0.8984×10-3-3(n=5)(n=5)　　±1.71%±1.71%* F* F值为对照品溶液照品溶液浓度度(μg/ml)(μg/ml)与峰面与峰面积的比的比值表表表表1.9 F1.9 F1.9 F1.9 F值值值值的比的比的比的比较较较较表表1.10  高分子聚合物高分子聚合物测测定定结结果的比果的比较较 品种品种 批号批号20052005年版年版药药典方法典方法高聚物含量（高聚物含量（% %））改改进进后的方法后的方法高聚物含量（高聚物含量（% %）） 相相对对偏差偏差阿莫西林囊阿莫西林囊05075010507501（（联联邦制邦制药药））均均值值：：0.056%0.056% (n=2) (n=2)　　均均值值：：0.0506%0.0506% (n=4) (n=4)　　±5.1±5.1％％阿莫西林阿莫西林308507016A308507016A（（联联邦制邦制药药厂）厂） 均均值值：：0.0355%0.0355% (n=2) (n=2)　　均均值值：：0.033%0.033% (n=3) (n=3)　　±2.9±2.9％％头孢唑头孢唑林林钠钠比比对样对样品品（（苏苏州制州制药药）） 均均值值：：0.0093%0.0093% (n=2) (n=2)　　均均值值：：0.011%0.011% (n=6) (n=6)　　±8.3±8.3％％头孢唑头孢唑林林钠钠比比对样对样品品（上海新先（上海新先锋锋 ）） 均均值值：：0.0154%0.0154% (n=2) (n=2)　　均均值值：：0.0148%0.0148% (n=5) (n=5)　　±2.0±2.0％％头孢唑头孢唑林林钠钠CZSS051142CZSS051142（奥奇特）（奥奇特） 均均值值：：0.016%0.016% (n=3) (n=3)　　均均值值：：0.017%0.017% (n=3) (n=3)　　±0.3±0.3％％l1.2.6 1.2.6 运用运用HPCEHPCE测定盐酸头孢吡肟中测定盐酸头孢吡肟中N-N-甲基吡咯烷的含量，是本版药典正甲基吡咯烷的含量，是本版药典正文收载运用文收载运用HPCEHPCE的的2 2个种类之一。

个种类之一l1.2.7 1.2.7 规范中添加有机溶媒检查的种类较多规范中添加有机溶媒检查的种类较多l1.2.7.1 1.2.7.1 本检查法大多采用涂层毛细管柱为本检查法大多采用涂层毛细管柱为色谱柱，等温，程序升温，顶空进样，色谱柱，等温，程序升温，顶空进样，l 内标法，外标法计算结果本版药典部分种内标法，外标法计算结果本版药典部分种类溶媒残留检查项下采用规范参与法计算，该类溶媒残留检查项下采用规范参与法计算，该方法可提高检测灵敏度方法可提高检测灵敏度l1.2.7.2 1.2.7.2 由于消费工艺的不同，各厂运用的有机由于消费工艺的不同，各厂运用的有机溶媒也不同，同一种类中能够有几十种的溶媒，溶媒也不同，同一种类中能够有几十种的溶媒，为方便操作、经实验在规范中规定各溶剂的相对为方便操作、经实验在规范中规定各溶剂的相对调整保管时间〔调整保管时间〔RARTRART〕，〕，l 检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的的RARTRART与规定的与规定的RARTRART比较，确定为何种溶媒时，比较，确定为何种溶媒时，再进展对照品测定，可减少任务量，大大降低检再进展对照品测定，可减少任务量，大大降低检验本钱，提高任务效率。

验本钱，提高任务效率l如：如：头孢泊泊肟酯l残留溶残留溶剂 甲醇、乙甲醇、乙腈、丙、丙酮、二、二氯甲甲烷、异丙、异丙醇、丁醇、丁酮、乙酸乙、乙酸乙酯、四、四氢呋喃、乙酸丁喃、乙酸丁酯、、1,2-1,2-二二氯乙乙烷、乙酸异丙、乙酸异丙酯、苯、四、苯、四氯化碳、化碳、环己己烷、二氧六、二氧六环、甲基异丁基、甲基异丁基酮、吡、吡啶、甲苯、甲苯 照残留溶照残留溶剂测定法〔附定法〔附录Ⅷ PⅧ P〕〕测定l色色谱条件与系条件与系统适用性适用性实验 以以6%6%氰丙基苯基丙基苯基- -94%94%二甲基聚硅氧二甲基聚硅氧烷为固定液〔或极性相近〕的固定液〔或极性相近〕的毛毛细管柱管柱为色色谱柱，柱温柱，柱温40℃40℃，，维持持2222分分钟，以，以每分每分钟100℃100℃速率升温至速率升温至120℃120℃，，维持持1010分分钟进样口温度口温度为200℃200℃，，检测器温度器温度为250℃250℃，，顶空瓶空瓶平衡温度平衡温度为70℃70℃，平衡，平衡时间为3030分分钟，取系，取系统适适用性溶液用性溶液顶空空进样，按正丙醇〔内，按正丙醇〔内标〕、丁〕、丁酮、、乙酸乙乙酸乙酯的的顺序出峰，各峰序出峰，各峰间的分的分别度均度均应符合符合要求。

要求l内内标溶液的制溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀稀释制成每制成每1ml1ml中中约含含200μg200μg的溶液，作的溶液，作为内内标溶液l系系统适用性溶液的制适用性溶液的制备 取丁取丁酮和乙酸乙和乙酸乙酯各适各适量，用内量，用内标溶液定量稀溶液定量稀释成每成每1ml1ml中中约含丁含丁酮和和乙酸乙乙酸乙酯各各1mg1mg的溶液，精的溶液，精细量取量取1.0ml1.0ml，置，置顶空空瓶中，密封瓶口，作瓶中，密封瓶口，作为系系统适用性溶液适用性溶液l供供试品溶液的制品溶液的制备 取本品取本品约0.2g0.2g，精，精细称定，称定，置置顶空瓶中，精空瓶中，精细参与内参与内标溶液溶液1.0ml1.0ml使溶解，使溶解，密封瓶口，作密封瓶口，作为供供试品溶液l对照品溶液的制备对照品溶液的制备 根据实验确定的详细检测对根据实验确定的详细检测对象，制备对照品溶液分别精细称取各溶剂适量，象，制备对照品溶液分别精细称取各溶剂适量，用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为混合对照品溶液，混合对照品溶液中各溶剂的浓混合对照品溶液，混合对照品溶液中各溶剂的浓度分别为每度分别为每1ml1ml中含甲醇中含甲醇600 ug600 ug、丙酮、丙酮1mg1mg、异丙、异丙醇醇1mg1mg、乙腈、乙腈82ug82ug、二氯甲烷、二氯甲烷120ug120ug、丁酮、丁酮1mg1mg、、乙酸乙酯乙酸乙酯1mg1mg，四氢呋喃，四氢呋喃150 ug150 ug、四氯化碳、四氯化碳1 ug1 ug、、环己烷环己烷760 ug760 ug、苯、苯1 ug1 ug、、1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷1 ug1 ug、乙、乙酸异丙酯酸异丙酯1mg1mg、二氧六环、二氧六环76 ug76 ug、甲基异丁基酮、甲基异丁基酮1mg1mg、吡啶、吡啶40 ug40 ug、甲苯、甲苯178 ug178 ug。

乙酸丁酯乙酸丁酯1mg1mg、、精细量取混合对照品溶液精细量取混合对照品溶液1.0ml1.0ml，置顶空瓶中，，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液密封，作为对照品溶液l测定法测定法 首先取甲烷气体顶空进样，记录甲烷的首先取甲烷气体顶空进样，记录甲烷的保管时间作为色谱系统的死时间〔保管时间作为色谱系统的死时间〔t0t0〕再取供试〕再取供试品溶液顶空进样，记录色谱图，供试品溶液色谱品溶液顶空进样，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有色谱峰，按下式计算各色谱峰的保管时图中如有色谱峰，按下式计算各色谱峰的保管时间〔间〔tRtR〕相对于正丙醇保管时间〔〕相对于正丙醇保管时间〔tRtR〔正丙醇〕〔正丙醇〕〕的相对调整保管时间〔〕的相对调整保管时间〔RARTRART〕；〕；l将得到的将得到的RARTRART值与下表的值与下表的RARTRART值比较，确定供值比较，确定供试品中的残留溶剂种类；再制备相应的对照品试品中的残留溶剂种类；再制备相应的对照品溶液，取对照品溶液顶空进样，记录色谱图，溶液，取对照品溶液顶空进样，记录色谱图，按内标法以峰面积比值计算，甲基异丁基酮不按内标法以峰面积比值计算，甲基异丁基酮不得过得过0.5%0.5%；、其他均应符合规定。

其他均应符合规定溶溶剂剂RARTRART值值甲醇甲醇丙丙酮酮异丙醇异丙醇乙乙腈腈二二氯氯甲甲烷烷正丙醇正丙醇丁丁酮酮乙酸乙乙酸乙酯酯四四氢呋氢呋喃喃四四氯氯化碳化碳环环己己烷烷苯苯1,2-1,2-二二氯氯乙乙烷烷乙酸异丙乙酸异丙酯酯甲基异丁基甲基异丁基酮酮二氧六二氧六环环吡吡啶啶甲苯甲苯乙酸丁乙酸丁酯酯0.1820.1820.4820.4820.5290.5290.5710.5710.6490.6491.0001.0001.2641.2641.3431.3431.4541.4541.6861.6861.7011.7011.9411.9411.8791.8792.0142.0142.4042.4042.8382.8383.0233.0233.0533.0533.3863.386l1.2.8.2-1.2.8.2-乙基己酸乙基己酸 l 对消消费工工艺过程中运用程中运用2-2-乙基己酸的原料，乙基己酸的原料，添加添加2-2-乙基己酸乙基己酸检查，采用气相色，采用气相色谱法法测定方法也收方法也收载在在20212021年版年版药典二部〔附典二部〔附录Ⅷ LⅧ L〕〕. .l如如: :头孢地地嗪钠、、l 头孢呋辛辛钠、、l 头孢孟多孟多酯钠、、l 氨氨苄西林西林钠等。

等l1.2.9 1.2.9 水分水分 l 本本类药物原料物原料药均采用水分均采用水分测定法第一法定法第一法A A测定水分，定水分，l 制制剂中中辅料料对水分水分测定法有干定法有干扰时，那么改，那么改为枯燥失重枯燥失重l 如如: :注射用注射用头孢他他啶，因含有，因含有10%10%的碳酸的碳酸钠对水分水分测定有干定有干扰，改，改为60℃60℃真空减真空减压枯燥，枯燥，l 头孢地尼胶囊也改地尼胶囊也改为60℃60℃真空减真空减压枯燥l1.2.10 1.2.10 不溶性微粒与可见异物不溶性微粒与可见异物 l 供注射用的原料药添加不溶性微粒与供注射用的原料药添加不溶性微粒与可见异物检查可见异物检查, ,以保证制剂能符合注射剂以保证制剂能符合注射剂的要求l 由于不溶性微粒光阻法测定结果仅与由于不溶性微粒光阻法测定结果仅与一定浓度范围内的样品溶液成正比关系，一定浓度范围内的样品溶液成正比关系，因此在规范中规定不溶性微粒检查供试因此在规范中规定不溶性微粒检查供试品溶液浓度品溶液浓度l l 本本类药物制物制剂规格格较多，最多有多，最多有1111个个规格。

格思索思索临床运用的平安性，在床运用的平安性，在规范中范中规定：定：l 规格格1.0g1.0g以下的制以下的制剂按按标示量折算，每示量折算，每1g1g样品中，含品中，含10µm10µm以上的微粒不得以上的微粒不得过60006000粒，含粒，含25µm25µm以上的微粒不得以上的微粒不得过600600粒；粒；l 规格格1.0g1.0g以上〔包括以上〔包括1.0g1.0g〕的制〕的制剂按每按每1 1个个供供试品容器中含品容器中含10µm10µm以上的微粒不得以上的微粒不得过60006000粒，粒，含含25µm25µm以上的微粒不得以上的微粒不得过600600粒l1.2.11 1.2.11 含量测定含量测定l 本类共本类共127127个种类的含量测定均采用个种类的含量测定均采用HPLCHPLC法或法或HPLCHPLC梯度洗脱梯度洗脱l 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测紫外检测l 为保证方法的专属性与结果的正确性利用该为保证方法的专属性与结果的正确性利用该类药物遇光照或加热能产生反式异构体或类药物遇光照或加热能产生反式异构体或E E异构异构体等有关物质。

用于制备系统适用性实验用分别体等有关物质用于制备系统适用性实验用分别度溶液，测定分别度，度溶液，测定分别度，l 结果按外标法以峰面积计算结果按外标法以峰面积计算, ,即得 l如：拉氧如：拉氧头孢钠l【含量【含量测定】定】 照高效液相色照高效液相色谱法〔附法〔附录Ⅴ DⅤ D〕〕测定l色色谱条件与系条件与系统适用性适用性实验 用十八用十八烷基基硅硅烷键合硅胶合硅胶为填充填充剂；以；以0.01mol/L0.01mol/L醋醋酸酸铵溶液溶液- -甲醇〔甲醇〔19:119:1〕〕为流流动相；相；检测波波长为254nm254nm取拉氧头孢对照品适量，照品适量，加水溶解并稀加水溶解并稀释制成每制成每1ml1ml中中约含含0.25mg0.25mg的溶液，取上述溶液适量，在的溶液，取上述溶液适量，在80℃80℃水浴水浴中加中加热3030分分钟，冷却，取，冷却，取10μl10μl注入液相注入液相色色谱仪，，记录色色谱图，拉氧，拉氧头孢R R异构体、异构体、拉氧拉氧头孢S S异构体依次流出；拉氧异构体依次流出；拉氧头孢R R异构体和拉氧异构体和拉氧头孢S S异构体的分异构体的分别度度应不不小于小于4.04.0，两主峰与相，两主峰与相邻杂质峰的分峰的分别度度均均应符合要求。

符合要求l测定法定法 取本品适量〔取本品适量〔约相当于拉氧相当于拉氧头孢25mg25mg〕，精〕，精细称定，置称定，置100ml100ml量瓶中，加水溶解并量瓶中，加水溶解并稀稀释至刻度，至刻度，摇匀；精匀；精细量取量取10μl10μl注入液相注入液相色色谱仪，，记录色色谱图；另取拉氧；另取拉氧头孢对照品适照品适量，同法量，同法测定，按外定，按外标法以峰面法以峰面积计算供算供试品品中中C20H20N6O9SC20H20N6O9S的含量l如：如：头孢地尼地尼l【含量【含量测定】定】 照高效液相色照高效液相色谱法〔附法〔附录Ⅴ DⅤ D〕〕测定l色色谱条件与系条件与系统适用性适用性实验 用十八用十八烷基硅基硅烷键合合硅胶硅胶为填充填充剂；以；以0.25%0.25%四甲基四甲基氢氧化氧化铵溶液〔用溶液〔用磷酸磷酸调理理pHpH值至至5.55.5〕〕- -乙乙腈- -甲醇〔甲醇〔900900：：6060：：4040〕，〕，每每1000ml1000ml中参与中参与0.1mol/L0.1mol/L乙二胺四醋酸二乙二胺四醋酸二钠溶液溶液0.4ml0.4ml为流流动相，相，检测波波长为254nm254nm。

取取头孢地尼地尼对照品照品约20mg20mg，置，置100ml100ml量瓶中，加上述量瓶中，加上述0.1mol/L0.1mol/L磷磷酸酸盐缓冲液冲液2ml2ml溶解后，用流溶解后，用流动相稀相稀释至刻度，至刻度，摇匀，在水浴中加匀，在水浴中加热不少于不少于3030分分钟，放冷，得每，放冷，得每1ml1ml中中约含含0.2mg0.2mg头孢地尼与其降解地尼与其降解杂质的混合溶液〔的混合溶液〔其中相其中相对主峰保管主峰保管时间0.90.9与与1.21.2处杂质的量各的量各约为2%2%〕，〕，l取取20μl20μl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图，，头孢地尼峰保管地尼峰保管时间约为8 8分分钟，，E-E-异构体峰保管异构体峰保管时间约为头孢地尼峰保管地尼峰保管时间的的3.53.5倍，倍，实际板数按板数按头孢地尼峰地尼峰计算不低于算不低于20002000，，头孢地尼地尼峰与其相峰与其相对保管保管时间0.90.9和和1.21.2处杂质峰的分峰的分别度均度均应不小于不小于1.21.2l测定法定法 取本品取本品约20mg20mg，精，精细称定，置称定，置100ml100ml棕色量瓶中，加上述棕色量瓶中，加上述0.1mol/L0.1mol/L磷酸磷酸盐缓冲液冲液2ml2ml溶解后，用流溶解后，用流动相稀相稀释至刻度，至刻度，摇匀，精匀，精细量取量取20μl20μl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图；；另取另取头孢地尼地尼对照品适量，同法照品适量，同法测定。

按外定按外标法以峰面法以峰面积计算，即得算，即得l如：如： 氨曲南氨曲南 l【含量【含量测定】定】 照高效液相色照高效液相色谱法〔附法〔附录Ⅴ DⅤ D〕〕测定。

定l色色谱条件与系条件与系统适用性适用性实验 用十八用十八烷基硅基硅烷键合硅胶合硅胶为填充填充剂；以；以0.05mol/L0.05mol/L磷酸二磷酸二氢钾溶溶液〔用液〔用1mol/L1mol/L磷酸溶液磷酸溶液调理理pHpH值至至3.0±0.13.0±0.1〕〕- -甲醇〔甲醇〔8080：：2020〕〕为流流动相；相；检测波波长为270nm.270nm.取取经紫外光灯〔紫外光灯〔254nm254nm〕下照射〕下照射2424小小时后的本品后的本品适量，加流适量，加流动相溶解并稀相溶解并稀释制成每制成每1ml1ml中中约含含1mg1mg的溶液，量取的溶液，量取20μl20μl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图，氨曲南峰与氨曲南，氨曲南峰与氨曲南E E异构体峰〔相异构体峰〔相对保保管管时间约1.61.6〕的分〕的分别度度应大于大于3.03.0l l测定法定法 取本品取本品约50mg50mg，精，精细称定，置称定，置50ml50ml量量瓶中，加流瓶中，加流动相溶解并稀相溶解并稀释至刻度，至刻度，摇匀，精匀，精细量取量取20μl20μl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图；另；另取氨曲南取氨曲南对照品适量，同法照品适量，同法测定。

按外定按外标法以法以峰面峰面积计算，即得算，即得l1.3 1.3 规范中涉及的知杂质，在规范最后列出其规范中涉及的知杂质，在规范最后列出其化学命名，便于与国外药典规范中的杂质比较化学命名，便于与国外药典规范中的杂质比较l如：头孢哌酮钠如：头孢哌酮钠l杂质杂质A A：：(5aR,6R)-6-[[(2R)-2-[[(4-ethyl-2,3-(5aR,6R)-6-[[(2R)-2-[[(4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)carbonyl]amino]dioxopiperazin-1-yl)carbonyl]amino]l -2-(4-hydroxyphenyl)acetyl]amino]- -2-(4-hydroxyphenyl)acetyl]amino]-5a,6-dihydro-3H,7H-azeto[2,1-b]furo[3,4-5a,6-dihydro-3H,7H-azeto[2,1-b]furo[3,4-d][1,3]thiazine-1,7(4H)-dioned][1,3]thiazine-1,7(4H)-dionel中文名：中文名：(5aR,6R)-6-[[(2R)-2-[[(4-(5aR,6R)-6-[[(2R)-2-[[(4-乙基乙基-2,3--2,3-二氧代哌嗪二氧代哌嗪-1--1-基基) )甲酰基甲酰基] ]氨基氨基]-2-(4-]-2-(4-羟基苯基羟基苯基) )乙酰基乙酰基] ]氨基氨基] -5a,6-] -5a,6-二氢二氢-3H,7H--3H,7H-氮杂环丁烷氮杂环丁烷并并[2,1-b][2,1-b]呋喃并呋喃并[3,4-d][1,3][3,4-d][1,3]噻嗪噻嗪-1,7(4H)--1,7(4H)-二二酮酮l如：头孢唑林钠如：头孢唑林钠l杂质杂质 A A：：R=H: (6R,7R)-7-amino-3-R=H: (6R,7R)-7-amino-3-[[(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-[[(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)sulphanyl] methyl]-8-oxo-5-thia-yl)sulphanyl] methyl]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acidcarboxylic acidl 中文名：中文名：(6R,7R)-7-(6R,7R)-7-氨基氨基-3-[[(5--3-[[(5-甲甲基基-1,3,4--1,3,4-噻二唑噻二唑-2--2-基基) )硫代硫代] ]甲基甲基]-8-]-8-氧代氧代-5--5-硫代硫代-1--1-氮杂双环氮杂双环[4.2.0][4.2.0]辛辛-2--2-烯烯-2--2-羧酸羧酸l杂质杂质E E：：5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-thiolthioll 中文名：中文名：5-5-甲基甲基-1,3,4--1,3,4-噻二唑噻二唑-2--2-甲甲硫醇硫醇l2 2．大环内酯类抗生素．大环内酯类抗生素l 该类抗生素可分为十四元环、十五元该类抗生素可分为十四元环、十五元环和十六元环三类。

它们均为多组分抗环和十六元环三类它们均为多组分抗生素l 十四元环有红霉素及其衍生物，具有十四元环有红霉素及其衍生物，具有构造相近构造相近, ,无紫外吸收无紫外吸收, ,特征性反响不明特征性反响不明显的特点，以红霉素、琥乙红霉素、克显的特点，以红霉素、琥乙红霉素、克拉霉素、罗红霉素为代表拉霉素、罗红霉素为代表. .l 十五元环有阿奇霉素；十五元环有阿奇霉素；l 十六元环有乙酰螺旋霉素、吉他霉素十六元环有乙酰螺旋霉素、吉他霉素等，等， 收收载载情况情况 原料原料 制剂制剂 总计总计20102010年版药典收载品种年版药典收载品种 13 13 35 35 48 48其中其中新增品种新增品种 2 2 4 4 6 62.1 2.1 2.1 2.1 种种种种类类类类收收收收载载载载情况情况情况情况见见见见表表表表2.12.12.12.1表表表表2.1 20212.1 20212.1 20212.1 2021年版年版年版年版药药药药典大典大典大典大环环环环内内内内酯类酯类酯类酯类种种种种类类类类收收收收载载载载情况情况情况情况l新增种类：新增种类：l原料：原料： 制剂：制剂：l交沙霉素、交沙霉素、 交沙霉素片、交沙霉素片、l丙酸交沙霉素、丙酸交沙霉素、 丙酸交沙霉素颗粒、丙酸交沙霉素颗粒、l 麦白霉素胶囊。

麦白霉素胶囊l 红霉素肠溶胶囊红霉素肠溶胶囊 2.22.2增修增修订订工程概略工程概略见见表表2.22.2表表2.2 20212.2 2021年版年版药药典大典大环环内内酯类酯类种种类类增修增修订订工程工程 项目项目 修订修订 增订增订删去删去结结构式构式1 1含量限度含量限度5 5性状性状3 3鉴别鉴别3 3（（HPLC 1HPLC 1项项 和和IR IR 2 2 项项））23(HPLC 1123(HPLC 11项项，，颜颜色反色反应应和和TLCTLC各各6 6项项) ) 3 3（（IRIR））释释放度放度/ /溶出度溶出度13131 1组分与有关物质组分与有关物质26263 3残留溶残留溶剂剂1 1干燥失重干燥失重2 2可可见见异物和不溶性微粒异物和不溶性微粒1 1含量含量3737其中其中浊浊度法增度法增订订2121项项 l2.3 2.3 本类抗生素质量规范要点本类抗生素质量规范要点l2.3.1 2.3.1 鉴别鉴别 l 规范中凡用规范中凡用HPLCHPLC法测定组分含量以及有关物法测定组分含量以及有关物质的种类均采用质的种类均采用HPLCHPLC法作为鉴别，并添加部分法作为鉴别，并添加部分种类的种类的TLCTLC法鉴别，大部分种类法鉴别，大部分种类HPLCHPLC法和法和TLCTLC法法并列，可任选一项；并列，可任选一项；l 原料药也有用原料药也有用IRIR作为鉴别，如罗红霉素；作为鉴别，如罗红霉素；l 有紫外吸收特性的种类也可用有紫外吸收特性的种类也可用UVUV法作为鉴别，法作为鉴别，如麦白霉素、交沙霉素；如麦白霉素、交沙霉素；l 部分种类采用显色反响。

部分种类采用显色反响l2.3.22.3.2组分测定与有关物质组分测定与有关物质l2.3.2.12.3.2.1组分测定组分测定 l 采用采用HPLCHPLC法测定，组分测定规范品和规范法测定，组分测定规范品和规范图谱由中检所提供，作为系统适用性实验的参图谱由中检所提供，作为系统适用性实验的参比如图2.12.1图图2.1 130347-200403批乙酰螺旋霉素规范品组分测定典型色谱图批乙酰螺旋霉素规范品组分测定典型色谱图l  组分测定涉及种类合计组分测定涉及种类合计17个，较个，较2005年版添年版添加加8个种类，个种类，l分别为分别为:l麦白霉素胶囊、麦白霉素胶囊、l乳糖酸红霉素、乳糖酸红霉素、 注射用乳糖酸红霉素、注射用乳糖酸红霉素、l硬脂酸红霉素、硬脂酸红霉素、    硬脂酸红霉素片、硬脂酸红霉素片、l硬脂酸红霉素胶囊、硬脂酸红霉素颗粒、硬脂酸红霉素胶囊、硬脂酸红霉素颗粒、l红霉素肠溶胶囊，红霉素肠溶胶囊，l  l初次对红霉素及其衍生物组分检测方法进展了初次对红霉素及其衍生物组分检测方法进展了一致，在其盐类及制剂中均添加了红霉素一致，在其盐类及制剂中均添加了红霉素A A组组分的检查。

详细见表分的检查详细见表2.32.3表表2.3 2.3 组组分分测测定定 品种品种 组组分分测测定定 方法方法 系系统统适用性要求适用性要求 乙乙酰酰螺旋霉素螺旋霉素乙乙酰酰螺旋霉素片螺旋霉素片乙乙酰酰螺旋霉素胶囊螺旋霉素胶囊单单乙乙酰酰螺旋霉素螺旋霉素IIII与与IIIIII双乙双乙酰酰螺旋霉素螺旋霉素IIII与与IIIIII同同20052005年年版版修修订为订为：：系系统统适用性适用性对对照品溶液色照品溶液色谱图应谱图应与与标标准准图谱图谱一致一致吉他霉素吉他霉素吉他霉素片吉他霉素片吉他霉素吉他霉素A5A5、、A4A4、、A1A1、、A13A13以及以及总组总组分分同同20052005年年版版修修订为订为：：系系统统适用性适用性对对照品溶液色照品溶液色谱图应谱图应与与标标准准图谱图谱一致一致麦白霉素麦白霉素麦白霉素片麦白霉素片麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊修修订为订为：：麦迪霉素麦迪霉素A1A1、、A2A2和吉他和吉他霉素霉素A4A4、、A6A6、、A8A8同同20052005年年版版修修订为订为：：系系统统适用性适用性对对照品溶液色照品溶液色谱图应谱图应与与标标准准图谱图谱一致，一致，并并规规定定组组分出峰分出峰顺顺序。

序红红霉素霉素红红霉素霉素肠肠溶片溶片红红霉素霉素肠肠溶胶囊溶胶囊红红霉素霉素A A红红霉素霉素B B红红霉素霉素C C修修订订HPLCHPLC法法红红霉素霉素A A：：对对照品外照品外标标法法计计算；算；红红霉素霉素B B：加校正因子：加校正因子自身自身对对照照计计算；算；红红霉素霉素C C：自身：自身对对照法照法计计算同同红红霉素霉素按按红红霉素霉素C C、、红红霉素霉素A A、、杂杂质质1 1、、红红霉素霉素B B、、红红霉素霉素烯烯醇醇醚醚峰的峰的顺顺序出峰（必要序出峰（必要时时，用，用红红霉素霉素C C、、红红霉素霉素B B、、红红霉素霉素烯烯醇醇醚对醚对照品照品进进行峰定位）行峰定位）红红霉素Ａ峰霉素Ａ峰与与红红霉素霉素烯烯醇醇醚醚峰的分离峰的分离度度应应大于大于14.014.0，，红红霉素霉素A A的拖尾因子的拖尾因子应应小于小于2.02.0同同红红霉素霉素硬脂酸硬脂酸红红霉素霉素硬脂酸硬脂酸红红霉素片霉素片硬脂酸硬脂酸红红霉素胶囊霉素胶囊硬脂酸硬脂酸红红霉素霉素颗颗粒粒红红霉素霉素A A红红霉素霉素B B红红霉素霉素C C乳糖酸乳糖酸红红霉素霉素注射用乳糖酸注射用乳糖酸红红霉素霉素红红霉素霉素A A红红霉素霉素B B红红霉素霉素C Cl2.3.2.1.1 2.3.2.1.1 乙酰螺旋霉素与吉他霉素的组分乙酰螺旋霉素与吉他霉素的组分 l测定方法同测定方法同20052005年版年版, , l 修订系统适用性实验，系统适用性对照品溶修订系统适用性实验，系统适用性对照品溶液的色谱图应与规范图谱一致液的色谱图应与规范图谱一致. .l 2.3.2.1.2 2.3.2.1.2 麦白霉素的组分麦白霉素的组分l 主要组分有主要组分有5 5个，个，20052005年版仅控制麦迪霉年版仅控制麦迪霉素素A1,, 2021A1,, 2021版全面控制麦迪霉素版全面控制麦迪霉素A1A1、、A2A2和吉和吉他霉素他霉素A4A4、、A6A6、、A8A8；；l 本品主成分为麦迪霉素本品主成分为麦迪霉素A1A1，故采用麦迪霉素，故采用麦迪霉素A1A1的规范品为基准的规范品为基准, , 以外标法计算各组分含量以外标法计算各组分含量. .l规定〔按枯燥品计〕：规定〔按枯燥品计〕：l麦迪霉素麦迪霉素A1 A1 不得低于不得低于48%48%l吉他霉素吉他霉素A6 A6 不得低于不得低于12%12%l5 5个组分总含量不得低于个组分总含量不得低于70%70%。

l测定方法测定方法:HPLC:HPLC，色谱柱，色谱柱C18C18、检测波长、检测波长232nm232nml2.3.2.1.3 2.3.2.1.3 红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素红霉素l 红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素主要红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素主要组分均为红霉素组分均为红霉素A A、、B B、、C .C .l 测定方法：测定方法：HPLCHPLC法，色谱柱法，色谱柱C18 , C18 , l 检测波长检测波长215 nm215 nm；；l l3 3个种类规定限制一样：个种类规定限制一样：l 红霉素红霉素A: A: 以无水物计不得少于以无水物计不得少于88.0%88.0%，用对照，用对照品外标法计算品外标法计算. .l 红霉素红霉素B: B: 不得大于不得大于5%,5%,用加校正因子〔用加校正因子〔0.70.7〕〕的本身对照法计算的本身对照法计算l 红霉素红霉素C: C: 不得大于不得大于5% ,5% ,用本身对照法计算用本身对照法计算。

l2.3.2.2 2.3.2.2 有关物质有关物质l 除琥乙红霉素仍采用除琥乙红霉素仍采用TLCTLC法外，法外，20052005年版采年版采用用TLCTLC法的种类均修订为法的种类均修订为HPLCHPLC法，共法，共2626个种类个种类采用采用HPLCHPLC法；法；l 完善了完善了HPLCHPLC系统适用性要求，明确主峰与系统适用性要求，明确主峰与指定杂质的分别度，确保方法的有效性和准确指定杂质的分别度，确保方法的有效性和准确性；性；l l 添加特定杂质的控制〔如阿奇霉素〕和总杂添加特定杂质的控制〔如阿奇霉素〕和总杂的控制〔如罗红霉素〕；的控制〔如罗红霉素〕；l 初次对红霉素及其衍生物有关物质检测方法初次对红霉素及其衍生物有关物质检测方法进展了一致见表进展了一致见表2.42.4表表2.4 2.4 有关物质测定有关物质测定(1) (1) 品种品种方法（方法（HPLCHPLC））丙酸交沙霉素丙酸交沙霉素1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照 2. 2.检测检测波波长长231nm231nm交沙霉素交沙霉素1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照 2. 2.检测检测波波长长231nm231nm克拉霉素克拉霉素 克拉霉素片克拉霉素片克拉霉素胶囊克拉霉素胶囊克拉霉素克拉霉素颗颗粒粒1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照2 2．．检测检测波波长长210nm210nm阿奇霉素阿奇霉素阿奇霉素干混阿奇霉素干混悬剂悬剂阿奇霉素片阿奇霉素片阿奇霉素分散片阿奇霉素分散片阿奇霉素胶囊阿奇霉素胶囊阿奇霉素阿奇霉素颗颗粒粒1.1.原原TLCTLC法修法修订为订为HPLCHPLC法，无法，无该项检查该项检查的已增的已增订订2.2.加校正因子（阿奇霉素加校正因子（阿奇霉素GxGx为为0.10.1与与红红霉素霉素A A偕偕亚亚胺胺醚为醚为0.40.4）与不）与不加校正因子（阿奇霉素加校正因子（阿奇霉素B B和其他和其他单单个个杂质杂质）的自身）的自身对对照照3.3.检测检测波波长长210nm210nm4.4.供注射用和供口服制供注射用和供口服制剂剂用，不同限度用，不同限度5.5.制制剂剂扣除相扣除相对对保留保留时间时间0.150.15之前的之前的辅辅料峰料峰红红霉素霉素1.1.加校正因子（加校正因子（红红霉素霉素烯烯醇醇醚为醚为0.090.09和和杂质杂质1 1为为0.150.15）与不加校正）与不加校正因子的自身因子的自身对对照照 2. 2.检测检测波波长长215nm215nm乳糖酸乳糖酸红红霉素霉素注射用乳糖酸注射用乳糖酸红红霉霉素素1.1.加校正因子（加校正因子（红红霉素霉素烯烯醇醇醚为醚为0.090.09和和杂质杂质1 1为为0.150.15）与不加校正）与不加校正因子的自身因子的自身对对照照2.2.检测检测波波长长215nm215nm表表2.4 2.4 有关物质测定有关物质测定(2) (2) 品种品种方法（方法（HPLCHPLC））硬脂酸硬脂酸红红霉素霉素硬脂酸硬脂酸红红霉素片霉素片硬脂酸硬脂酸红红霉素胶霉素胶囊囊1.1.加校正因子（加校正因子（红红霉素霉素烯烯醇醇醚为醚为0.090.09和和杂质杂质1 1为为0.150.15）与不加校正因）与不加校正因子的自身子的自身对对照照2.2.检测检测波波长长215nm215nm依托依托红红霉素霉素1.1.游离游离红红霉素霉素2.2.外外标标法法计计算算 检测检测波波长长190nm190nm麦白霉素麦白霉素1.1.以麦迪霉素以麦迪霉素A A1 1为为基准基准, ,外外标标法法计计算各有关物算各有关物质总质总量（不得量（不得过过25%25%））检测检测波波长长232nm232nm麦白霉素片麦白霉素片1.1.以麦迪霉素以麦迪霉素A A1 1为为基准基准, ,外外标标法法计计算各有关物算各有关物质总质总量（不得量（不得过过30%30%））2.2.检测检测波波长长232nm232nm麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊1.1.以麦迪霉素以麦迪霉素A A1 1为为基准基准, ,外外标标法法计计算各有关物算各有关物质总质总量（不得量（不得过过30%30%））2.2.检测检测波波长长232nm232nm罗红罗红霉素霉素罗红罗红霉素片霉素片罗红罗红霉素分散片霉素分散片罗红罗红霉素胶囊霉素胶囊1.1.不加校正因子的自身不加校正因子的自身对对照照2.2.原料明确除二甲基甲原料明确除二甲基甲酰酰胺峰外，并胺峰外，并对该对该峰定位。

峰定位3.3.制制剂剂扣除相扣除相对对保留保留时间时间0.30.3之前的峰之前的峰4. 4. 检测检测波波长长210nm210nm5.5.系系统统适用性增加主峰与适用性增加主峰与红红霉素的分离度，并明确前相霉素的分离度，并明确前相邻杂质邻杂质峰（相峰（相对对保留保留时间为时间为0.950.95）和后相）和后相邻杂质邻杂质峰（相峰（相对对保留保留时间为时间为1.21.2）位置）位置琥乙琥乙红红霉素霉素方法（方法（TLCTLC法）法）l2.3.3 2.3.3 溶出度溶出度l 除乳糖酸红霉素是供注射用外，其他除乳糖酸红霉素是供注射用外，其他均为口服制剂〔片、胶囊、干混悬剂、均为口服制剂〔片、胶囊、干混悬剂、颗粒〕由于原料的水溶性较差，因此颗粒〕由于原料的水溶性较差，因此要求口服制剂检查溶出度或释放度要求口服制剂检查溶出度或释放度l 共共2525个制剂，其中个制剂，其中2 2个红霉素肠溶制剂个红霉素肠溶制剂检查释放度，其他均检查溶出度；检查释放度，其他均检查溶出度；l 颗粒剂中包衣颗粒和非包衣颗粒制定颗粒剂中包衣颗粒和非包衣颗粒制定了相应的溶出度检查法〔如罗红霉素颗了相应的溶出度检查法〔如罗红霉素颗粒〕；粒〕；l 混悬颗粒和干混悬剂根据溶出曲线调混悬颗粒和干混悬剂根据溶出曲线调查结果断定能否认入规范。

查结果断定能否认入规范l  溶出度溶出度项下溶出液的下溶出液的测定，定，l  6个种个种类采用直接紫外采用直接紫外—可可见分光光度分光光度法〔法〔231～～235nm波波优点〕、点〕、l  9个种个种类采用硫酸采用硫酸显色反响后紫外色反响后紫外—可可见分光光度法〔分光光度法〔482nm波波优点〕、点〕、l  10个种个种类那么采用那么采用HPLC法〔阿奇霉素、法〔阿奇霉素、克拉霉素和克拉霉素和罗红霉素由硫酸霉素由硫酸显色法修色法修订成成HPLC法〕l  l 因制剂中某些辅料与硫酸也会发生显色反响，因制剂中某些辅料与硫酸也会发生显色反响，采用硫酸显色法时采用硫酸显色法时, ,采用本身对照法，以抵消采用本身对照法，以抵消辅料的干扰；辅料的干扰；l 同时多组分种类亦采用本身对照法，以消除同时多组分种类亦采用本身对照法，以消除组分比例差别对结果的影响组分比例差别对结果的影响l如如: :麦白霉素片麦白霉素片, ,麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊, ,吉他霉素片吉他霉素片l 溶出度介质可加酶，如麦白霉素胶囊和罗红溶出度介质可加酶，如麦白霉素胶囊和罗红霉素胶囊，后者还规定了胰酶的加量以单位表霉素胶囊，后者还规定了胰酶的加量以单位表示〔每示〔每1ml1ml中含胰蛋白酶不少于中含胰蛋白酶不少于0.080.08活性单位、活性单位、胰淀粉酶不少于胰淀粉酶不少于1.11.1活性单位和胰脂肪酶不少活性单位和胰脂肪酶不少于于0.40.4活性单位活性单位 〕〕, ,更为科学合理。

见表更为科学合理见表2.52.5 品种品种 方法方法乙乙酰酰螺旋霉素片螺旋霉素片乙乙酰酰螺旋霉素胶囊螺旋霉素胶囊1.1.一法一法 , 2.uv , 2.uv法法检测检测波波长长231nm , 3.231nm , 3.自身自身对对照法照法吉他霉素片吉他霉素片1.1.二法二法 , 2.uv , 2.uv法法. .检测检测波波长长231nm , 3.231nm , 3.自身自身对对照法照法交沙霉素片交沙霉素片1.1.二法二法 . 2.uv . 2.uv法法. .检测检测波波长长231nm , 3.231nm , 3.自身自身对对照法照法麦白霉素片麦白霉素片1.1.一法一法, 2.uv, 2.uv法法. .检测检测波波长长232nm , 3.232nm , 3.自身自身对对照法照法麦白霉素胶囊麦白霉素胶囊1.1.一法一法 , 2.uv , 2.uv法法检测检测波波长长235nm , 3.235nm , 3.自身自身对对照法照法 4. 4.盐盐酸酸- -胃蛋白胃蛋白酶酶为为介介质质表表表表2.5 (1)2.5 (1)2.5 (1)2.5 (1)溶出度测定溶出度测定溶出度测定溶出度测定 〔溶出液〔溶出液〔溶出液〔溶出液uvuvuvuv法测定〕法测定〕法测定〕法测定〕表表2.5 (1)2.5 (1)溶出度测定溶出度测定 〔溶出液硫酸溶液显色〔溶出液硫酸溶液显色,uv,uv法测定〕法测定〕 品种品种方法方法红红霉素霉素肠肠溶片溶片红红霉素霉素肠肠溶胶囊溶胶囊1.1.释释放度放度, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（75→10075→100））显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 482nm 3. 3. 自身自身对对照法照法罗红罗红霉素霉素颗颗粒（包粒（包衣）衣）1.1.一法一法, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（75→10075→100））显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 3. 482nm 3. 自身自身对对照法照法琥乙琥乙红红霉素片霉素片琥乙琥乙红红霉素分散片霉素分散片琥乙琥乙红红霉素胶囊霉素胶囊1.1.二法二法 , 2. , 2.硫酸溶液（硫酸溶液（75→10075→100））显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 482nm 3. 3. 自身自身对对照法照法依托依托红红霉素片霉素片依托依托红红霉素胶囊霉素胶囊1.1.二法二法, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（75→10075→100））显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 482nm 3. 3. 自身自身对对照法照法克拉霉素克拉霉素颗颗粒粒1.1.二法二法, 2., 2.硫酸溶液（硫酸溶液（75→10075→100））显显色，色，uvuv法法检检测测波波长长482nm 3. 482nm 3. 自身自身对对照法照法 品种品种 方法方法阿奇霉素片阿奇霉素片阿奇霉素分散片阿奇霉素分散片阿奇霉素胶囊阿奇霉素胶囊 1.1.二法二法, ,  2.HPLC2.HPLC法法 ,  3.3.对对照品外照品外标标法法计计算算罗红罗红霉素片霉素片罗红罗红霉素分散片霉素分散片1.1.一法一法 , 2.HPLC , 2.HPLC法法 3. 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,罗红罗红霉素干混霉素干混悬剂悬剂1.1.二法二法, 2.HPLC, 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,罗红罗红霉素胶囊霉素胶囊1.1.一法一法, 2.HPLC, 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算 , , 4. 4.明确明确酶酶的加量以的加量以单单位表示位表示, ,罗红罗红霉素霉素颗颗粒（非粒（非包衣）包衣）1.1.二法二法 , 2.HPLC , 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,克拉霉素片克拉霉素片1.1.一法一法 , 2.HPLC , 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,克拉霉素胶囊克拉霉素胶囊1.1.二法二法, 2.HPLC, 2.HPLC法法 , 3. , 3.对对照品外照品外标标法法计计算算, ,表表表表2.5 (2) 2.5 (2) 2.5 (2) 2.5 (2) 溶出度溶出度溶出度溶出度测测测测定定定定 ( ( ( (溶出液溶出液溶出液溶出液HPLCHPLCHPLCHPLC法法法法测测测测定定定定) ) ) )l2.3.4 2.3.4 含量含量测定定l 除个除个别种种类〔如克拉霉素、〔如克拉霉素、罗红霉素、阿奇霉素、阿奇霉素〕采用霉素〕采用HPLCHPLC法外，其他种法外，其他种类均采用微生物均采用微生物检定法定法测定效价，定效价，见表表2.62.6。

l 2005 2005版版药典采用管碟法，本版典采用管碟法，本版药典添加典添加浊度法，两法并列供度法，两法并列供选择，在附，在附录中明确仲裁方中明确仲裁方法法为管碟法；管碟法；l 阿奇霉素系列由微生物法修阿奇霉素系列由微生物法修订为HPLCHPLC法，系法，系统适用性适用性实验规定定““规范品溶液色范品溶液色谱图应与与规范范图谱一致〞；一致〞；l    罗红霉素系列完善系霉素系列完善系统适用性适用性实验，添加主，添加主峰与峰与红霉素的分霉素的分别度，并明确与前相度，并明确与前相邻杂质峰峰〔相〔相对保管保管时间为0.95〕和后相〕和后相邻杂质峰〔相峰〔相对保管保管时间为1.2〕位置；〕位置；l   依托依托红霉素霉素为红霉素霉素酯类衍生物，故在微生衍生物，故在微生物法物法测定含量定含量时，必需使，必需使药物完全水解成物完全水解成红霉霉素，有抗菌活性后，方能素，有抗菌活性后，方能测定抑菌才干，定抑菌才干，l本版本版药典典进展了充分研展了充分研讨后将水解条件由后将水解条件由“37℃水浴中放置水浴中放置6小小时〞修〞修订为“60℃水浴中水浴中放置放置4小小时〞，〞，缩短短实验时间。

 表表2.6 2.6 含量含量测测定定 品种品种 HPLC HPLC 微生物法微生物法( ( 管碟法管碟法或或 浊浊度法度法) ) 48 48 10 10 38 38l3、氨基糖苷类抗生素、氨基糖苷类抗生素  l3.1 氨基糖苷类抗生素的特点氨基糖苷类抗生素的特点l3.1.1 本类药物构造中都有以氨基环己醇本类药物构造中都有以氨基环己醇与氨基糖缩合而成的苷，构造中没有共与氨基糖缩合而成的苷，构造中没有共轭双键所以没有可供分析用的特征的紫轭双键所以没有可供分析用的特征的紫外吸收仅有末端吸收，构造中具有不对外吸收仅有末端吸收，构造中具有不对称碳原子有旋光性称碳原子有旋光性l l3.1.2 本类抗生素相对其他类抗生素而言本类抗生素相对其他类抗生素而言稳定性较好，制剂为注射液种类较多稳定性较好，制剂为注射液种类较多 l3.1.3  本类抗生素有效成分为游离硷，普本类抗生素有效成分为游离硷，普通均以硫酸盐方式存在作为药物，由于通均以硫酸盐方式存在作为药物，由于都含有易溶于水的氨基糖碱性苷，故均都含有易溶于水的氨基糖碱性苷，故均能以分子中的碱性基团〔能以分子中的碱性基团〔-NH2基〕与无基〕与无机酸结合成可溶于水、但几乎不溶于有机酸结合成可溶于水、但几乎不溶于有机溶剂的盐类。

机溶剂的盐类3.2 3.2 种类收载情况：种类收载情况： 表表3.1 3.1 种类收载情况种类收载情况原料原料制剂制剂注射液注射液注射用注射用滴眼液滴眼液口服液口服液片片缓释片缓释片颗粒颗粒妥布霉素妥布霉素√√√*√*硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素√√√√√√硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素√√硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素√√√√√√硫酸西索霉素硫酸西索霉素√√硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素√√√√√√√√√√硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星√√√√*为新增种类为新增种类原料原料制制剂剂注射液注射液注射用注射用滴眼液滴眼液口服口服液液片片缓释缓释片片颗颗粒粒阿米卡星阿米卡星硫酸奈替米星硫酸奈替米星√√硫酸依替米星硫酸依替米星√√√√硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素√√硫酸硫酸链链霉素霉素√√硫酸新霉素硫酸新霉素√√√√盐盐酸大酸大观观霉素霉素√√总计总计14148 86 64 41 14 41 11 13.3 3.3 关键检测工程方法一览：关键检测工程方法一览：表表3.2 3.2 检测工程方法检测工程方法原料原料有关物有关物质质（包括特定（包括特定杂杂质质））组组分分硫酸硫酸盐盐含量含量测测定定TLCTLCHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-UVHPLC-UVHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-HPLC-UVUVHPLC-HPLC-ELSDELSD滴滴定定妥布霉素妥布霉素√√微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸小硫酸小诺诺霉素霉素√√√√微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸巴硫酸巴龙龙霉素霉素√√无无微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素卡卡B B√√ELSDELSD硫酸西索霉素硫酸西索霉素√√√√微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸硫酸庆庆大霉素大霉素√√√√√√微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星√√√√HPLC-UVHPLC-UV阿米卡星阿米卡星√√HPLC-UVHPLC-UV原料原料有关物有关物质质（包括特定（包括特定杂杂质质））组组分分硫酸硫酸盐盐含量含量测测定定TLCTLCHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-HPLC-UVUVHPLC-HPLC-ELSDELSDHPLC-HPLC-UVUVHPLC-HPLC-ELSDELSD滴滴定定硫酸奈替米星硫酸奈替米星√√√√微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸依替米星硫酸依替米星√√√√HPLC-ELSDHPLC-ELSD硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素√√微微1 1硫酸硫酸链链霉素霉素√√√√微生物（微生物（ⅠⅠ、、ⅡⅡ））硫酸新霉素硫酸新霉素新新霉霉胺胺√√微生物微生物（（ⅠⅠ））盐盐酸大酸大观观霉素霉素√√微生物微生物（（ⅡⅡ））l3.4 修订情况概要修订情况概要l3.4.1鉴别鉴别  l    普通采用普通采用TLC法与硫酸盐反响，法与硫酸盐反响，l    含量测定或组分采用含量测定或组分采用HPLC-ELSD的方法时，的方法时，也可用也可用HPLC作为鉴别，作为鉴别，l   个别种类也有用个别种类也有用IR作为鉴别反响，作为鉴别反响，l   少数种类有显色反响鉴别。

少数种类有显色反响鉴别l   在鉴别实验中规定在鉴别实验中规定TLC和和HPLC两个色谱鉴两个色谱鉴别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于灵敏操作灵敏操作l例例1.硫酸依替米星硫酸依替米星  l【鉴别】【鉴别】 〔〔1〕〕TLCl                  〔〔2〕〕HPLCl                  〔〔3〕硫酸盐鉴别反响〕硫酸盐鉴别反响l以上〔以上〔1〕、〔〕、〔2〕两项可选做一项〕两项可选做一项l例例2.  阿米卡星阿米卡星 l【鉴别】【鉴别】  〔〔1〕〕TLCl                  〔〔2〕〕HPLCl                  〔〔3〕〕IRl                  〔〔4〕硫酸盐鉴别反响〕硫酸盐鉴别反响l       以上〔以上〔1〕、〔〕、〔2〕两项可选做一项〕两项可选做一项l3.4.2、检查、检查l3.4.2.1  供无菌分装的原料规范正文中添加了供无菌分装的原料规范正文中添加了(1)可见异物、可见异物、(2) 、不溶性微粒、、不溶性微粒、(3)无菌l 例例1. 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星 l可见异物可见异物    取本品取本品5份，各份，各0.6g，分别加微粒检，分别加微粒检查用水查用水5ml使溶解，依法检查〔附录使溶解，依法检查〔附录IX H〕，〕，应符合规定。

〔供注射用〕应符合规定〔供注射用〕l  不溶性微粒不溶性微粒   取本品取本品3g，加微粒，加微粒检查用水用水100ml，制成每，制成每1ml中含中含30mg的溶液，依法的溶液，依法检查〔附〔附录IX C〕每1g供供试品中，含品中，含10μm以上的微以上的微粒不得粒不得过6000粒，含粒，含25μm以上的微粒不得以上的微粒不得过600粒〔供注射用〕粒〔供注射用〕l无菌无菌  取本品，加取本品，加0.9％无菌氯化钠溶液制成每％无菌氯化钠溶液制成每1ml中含阿米卡星中含阿米卡星8mg的供试液，经薄膜过滤的供试液，经薄膜过滤法处置，用法处置，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液分次冲洗〔每膜不少于分次冲洗〔每膜不少于500ml〕，以金黄色葡〕，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查〔附录萄球菌为阳性对照菌，依法检查〔附录XI H〕，〕，应符合规定〔供注射用〕应符合规定〔供注射用〕l3.4.2.2 浸透压摩尔浓度浸透压摩尔浓度  l    2005年版药典首先在抗生素类滴眼液年版药典首先在抗生素类滴眼液-硫酸硫酸卡那霉素滴眼液规范中列入浸透压检查，卡那霉素滴眼液规范中列入浸透压检查，l   本版药典将其扩展为本版药典将其扩展为4个滴眼液，个滴眼液，l   两种表示方法并列两种表示方法并列:l   妥布霉素滴眼液、庆大霉素滴眼液和硫酸卡妥布霉素滴眼液、庆大霉素滴眼液和硫酸卡那霉素滴眼液〔均为浸透压摩尔浓度为那霉素滴眼液〔均为浸透压摩尔浓度为260-320mOsmol/kg〕〕l   硫酸新霉素滴眼液〔浸透压摩尔浓度比为硫酸新霉素滴眼液〔浸透压摩尔浓度比为0.95-1.15〕。

〕l3.4.2.3 防腐剂防腐剂  l   本版药典对氨基糖苷类抗生素滴眼液中常用本版药典对氨基糖苷类抗生素滴眼液中常用防腐剂如羟苯乙酯、丙酯、苯扎氯胺等进展检防腐剂如羟苯乙酯、丙酯、苯扎氯胺等进展检查l例例1.   硫酸新霉素硫酸新霉素 l          检查羟苯乙酯检查羟苯乙酯 l              方法为方法为HPLC〔限制：〔限制： 80%-120%〕〕 l例例2.   妥布霉素滴眼液妥布霉素滴眼液 l          检查羟苯乙酯、羟苯丙酯、苯扎氯铵，检查羟苯乙酯、羟苯丙酯、苯扎氯铵，l              方法为方法为 HPLC〔限制：〔限制： 80%-120% 〕〕 l3.4.2.4有关物质、组分有关物质、组分l   有关物质、组分、特定杂质检查方法修正为有关物质、组分、特定杂质检查方法修正为HPLC-ELSD方法的种类较多方法的种类较多 ，，l但有些种类如新霉素、盐酸大观霉素仍采用但有些种类如新霉素、盐酸大观霉素仍采用TLC法l3.4.2.4.1  HPLC-ELSD方法扩展运用，方法扩展运用，l    2005年版药典除硫酸卡那霉素，硫酸庆大霉年版药典除硫酸卡那霉素，硫酸庆大霉素素,硫酸小诺霉素三个原料及其制剂共硫酸小诺霉素三个原料及其制剂共9个种类个种类的组分、特定杂质检查方法为的组分、特定杂质检查方法为HPLC-ELSD方方法，法，l   l2021年版药典有年版药典有7个原料及其制剂共个原料及其制剂共23种类采种类采用用HPLC-ELSD方法检查有关物质、组分、特方法检查有关物质、组分、特定杂质。

定杂质l2005年版药典采用的薄层色谱法年版药典采用的薄层色谱法(TLC)测定有测定有关物质，属于半定量方法，只能对杂质进展限关物质，属于半定量方法，只能对杂质进展限制检查，不能准确测定样品中单个杂质和总杂制检查，不能准确测定样品中单个杂质和总杂质量l              l     ELSD属于通用型检测器属于通用型检测器, 几乎对一切的化合物均有呼应，流动相和环境温度对呼应值的影响小几乎对一切的化合物均有呼应，流动相和环境温度对呼应值的影响小,适宜用于无特征紫外吸收化合物的定性和定量分析，适宜用于无特征紫外吸收化合物的定性和定量分析，l    由于其色谱呼应值由于其色谱呼应值(峰面积的对数值峰面积的对数值)与对应的质量〔溶液浓度的对数值〕呈线性关系，因此用回归方程计算含量与对应的质量〔溶液浓度的对数值〕呈线性关系，因此用回归方程计算含量l   虽然虽然ELSD检测器在灵敏度上不如检测器在灵敏度上不如UV检测器，但较之检测器，但较之TLC其灵敏度要高得多其灵敏度要高得多l    l3.4.2.4.2  柱前衍生柱前衍生HPLC方法初次运用在中方法初次运用在中国药典氨基糖苷类抗生素有关物质检查项中，国药典氨基糖苷类抗生素有关物质检查项中，l   阿米卡星和硫酸阿米卡星阿米卡星和硫酸阿米卡星:l    柱前衍生柱前衍生HPLC法可以在同一色谱条件下法可以在同一色谱条件下同时检出卡那霉素、杂质同时检出卡那霉素、杂质B、杂质、杂质A以及其它以及其它杂质，并可参考杂质，并可参考BP2021阿米卡星项下系统适阿米卡星项下系统适用性色谱图定位，且药厂出口采用此法，对用性色谱图定位，且药厂出口采用此法，对本法的可行性已有数据可证明。

本法的可行性已有数据可证明 图3.1 阿米卡星混合溶液的分别色谱图图图3.2   BP2021阿米卡星项下系统适用性色谱阿米卡星项下系统适用性色谱l3.4.2.4.3  硫酸盐硫酸盐 l    除部分种类仍采用原滴定方法，本版药典初除部分种类仍采用原滴定方法，本版药典初次采用次采用HPLC-ELSD方法对其进展测定方法对其进展测定l    2005年版中测定硫酸盐含量采用的是容量法年版中测定硫酸盐含量采用的是容量法与传统的分量法测定相比，有其先进性，但滴与传统的分量法测定相比，有其先进性，但滴定终点突跃不明显定终点突跃不明显.l   l  本版药典建立的本版药典建立的HPLC-ELSD方法测定方法测定硫酸盐含量，采用硫酸滴定液作为对照硫酸盐含量，采用硫酸滴定液作为对照品，处理了对照品的问题，该方法方便、品，处理了对照品的问题，该方法方便、准确l例如：例如：2021年版药典中年版药典中;l硫酸西索霉素、硫酸西索霉素、l硫酸庆大霉素、硫酸庆大霉素、l硫酸奈替米星硫酸奈替米星l硫酸依替米星硫酸依替米星l均采用均采用HPLC-ELSD方法测定硫酸盐含量方法测定硫酸盐含量l3.4.4 含量测定含量测定 有以下五种方式，表有以下五种方式，表3.3l〔〔1〕硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制剂〕硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制剂共共7个规范的含量测定为个规范的含量测定为HPLC-ELSD方法。

方法l〔〔2〕阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制剂共〕阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制剂共4个个规范的含量测定采用柱前衍生化规范的含量测定采用柱前衍生化HPLC-UV方方法l〔〔3〕硫酸新霉素〕硫酸新霉素 硫酸核糖霉素及其制剂共硫酸核糖霉素及其制剂共5个个规范的含量测定采用微生物检定法管碟法规范的含量测定采用微生物检定法管碟法.l〔〔4〕盐酸大观霉素及其制剂共〕盐酸大观霉素及其制剂共2个规范的含量个规范的含量测定采用微生物检定法浊度法测定采用微生物检定法浊度法l〔〔5〕其他〕其他21个规范的含量测定均采用微生物个规范的含量测定均采用微生物检定法管碟法和微生物检定法浊度法两法并列，检定法管碟法和微生物检定法浊度法两法并列，可任选一方法可任选一方法 表3.3 含量测定HPLC- HPLC- ELSDELSD法法柱前衍生化柱前衍生化 HPLC-UVHPLC-UV法法微生物微生物检检定法定法 ( ( 管碟法管碟法) )微生物微生物检检定法定法 ( (浊浊度法度法) ) 微生物微生物检检定法定法 ( ( 管碟法管碟法或或 浊浊度法度法) ) 7 7 4 4 5 5 2 2 21 21l4、四环素类抗生素、四环素类抗生素l4.1 四环类抗生素的根本特点，四环类抗生素的根本特点，l4.1.1 构造特点构造特点 l   四环素类抗生素为四骈苯或萘骈萘的衍四环素类抗生素为四骈苯或萘骈萘的衍生物，生物， 是两性化合物。

分子中存在酚羟是两性化合物分子中存在酚羟基和烯醇型羟基，显弱酸性；同时含有基和烯醇型羟基，显弱酸性；同时含有二甲胺基，显弱碱性，故遇酸及碱，均二甲胺基，显弱碱性，故遇酸及碱，均能生成相应的盐，临床上大多采用盐酸能生成相应的盐，临床上大多采用盐酸盐l  本品分子构造中具有多个不对称碳原子，本品分子构造中具有多个不对称碳原子，因此有旋光性因此有旋光性l4.1.2 性状性状  l    四环类抗生素都是结晶型物质，分子内含有四环类抗生素都是结晶型物质，分子内含有蒽酮类发色团，普通为黄色结晶性粉末，枯燥蒽酮类发色团，普通为黄色结晶性粉末，枯燥的四环类游离碱和它们的盐类都比较稳定，但的四环类游离碱和它们的盐类都比较稳定，但在储存中遇光促使颜色变深，能够有降解物产在储存中遇光促使颜色变深，能够有降解物产生l   四环类抗生素的游离碱，在水中的溶解度很四环类抗生素的游离碱，在水中的溶解度很小，当小，当pH值低于值低于4或高于或高于8时，可以得到高浓度时，可以得到高浓度的四环类化合物的水溶液的四环类化合物的水溶液 l4.1.3.化学性质化学性质l4.1.3.1差向异构化性质差向异构化性质l    四环类抗生素在酸性〔四环类抗生素在酸性〔pH2.0～～6.0〕溶〕溶液中，液中，A环上环上4位手性碳原子构型易发生位手性碳原子构型易发生差向异构化反响，构成差向化合物，四差向异构化反响，构成差向化合物，四环素、金霉素、去甲环素等很容易差向环素、金霉素、去甲环素等很容易差向化，构成化，构成4-差向异构体，差向异构体，l     土霉素由于土霉素由于5位上的羟基和位上的羟基和4位上的二位上的二甲胺基易构成氢键，因此较稳定，不易甲胺基易构成氢键，因此较稳定，不易发生差向异构化。

发生差向异构化l      l四环类抗生素的差向异构化反响，可用四环类抗生素的差向异构化反响，可用下式表示：下式表示：l4.1.3.2降解反响降解反响l    (1)酸性条件下酸性条件下:l    四环类在较酸溶液中特别在加热情况下，四环类在较酸溶液中特别在加热情况下， 产产生脱水四环类降解产物，脱水产物的共轭双键生脱水四环类降解产物，脱水产物的共轭双键的数目增多，因此色泽加深的数目增多，因此色泽加深l    (2) 碱性条件下碱性条件下:l    四环类抗生素在碱性溶液中放置一段时间，四环类抗生素在碱性溶液中放置一段时间，C环翻开，生成无活性的具有内酯构造的异四环翻开，生成无活性的具有内酯构造的异四环类抗生素在紫外光照射下具有剧烈荧光环类抗生素在紫外光照射下具有剧烈荧光l   (3) 四环类抗生素能与许多金属离子构四环类抗生素能与许多金属离子构成有色络合物成有色络合物l   在无菌检查去抑菌作用时可以利用该性在无菌检查去抑菌作用时可以利用该性质l   也可用于四环类抗生素的分析和鉴定也可用于四环类抗生素的分析和鉴定4.2 4.2 种类收载情况：种类收载情况： 表表4.1 4.1 种类收载种类收载情况情况原料原料制制剂剂(12)(12)注射用注射用眼膏眼膏胶囊胶囊软软膏膏片片盐盐酸土霉素酸土霉素√√盐盐酸四酸四环环素素√√√√√√盐盐酸多西酸多西环环素素√√√√盐盐酸米酸米诺环诺环素素√√√√盐盐酸金霉素酸金霉素√√√√盐盐酸美他酸美他环环素素√√√√6 61 11 14 41 15 5l4.3 本版四环类抗生素修订情况概要本版四环类抗生素修订情况概要l4.3.1 性状性状  根本未修订。

根本未修订l4.3.2 鉴别鉴别  l     普通采用普通采用TLC/HPLC、、IR和氯化物反响，和氯化物反响，部分种类添加了紫外鉴别部分种类添加了紫外鉴别l    如如:盐酸多西环素在甲醇溶液中紫外特征较盐酸多西环素在甲醇溶液中紫外特征较强强,故添加了紫外鉴别：故添加了紫外鉴别：20ug/ml甲醇溶液在甲醇溶液在269nm和和354nm处有最大吸收，在处有最大吸收，在234nm和和296nm处有最小吸收处有最小吸收l4.3.3 检查检查l4.3.3.1有关物质有关物质  l   有关物质测定方法仍以有关物质测定方法仍以HPLC为主，但测定为主，但测定条件随含量测定方法修正有所改动条件随含量测定方法修正有所改动 色谱条件色谱条件同修正后含量测定的色谱条件〔见表〕，同修正后含量测定的色谱条件〔见表〕，l4.3.3.1.1 杂质含量计算方法杂质含量计算方法l    四环素知杂质含量用加校正因子的本身对照四环素知杂质含量用加校正因子的本身对照法计算，法计算，l   米诺环素、土霉素、多西环素用知杂质对照米诺环素、土霉素、多西环素用知杂质对照品定位，用不加校正因子的本身对照法计算，品定位，用不加校正因子的本身对照法计算，l   金霉素用杂质对照品外标法计算知杂质的含金霉素用杂质对照品外标法计算知杂质的含量。

量l4.3.3.1.2 限制确限制确实定定 l 限制是参考限制是参考EP6.0及及结合国内合国内样品情况而确定品情况而确定l如：如：盐酸多西酸多西环素素<欧洲欧洲药典典> 6.0报道，道，盐酸多酸多西西环素〔素〔Doxycycline Hyclate〕中有〕中有6个潜在个潜在杂质，，分分别命名命名为杂质A、、B、、C、、D、、E、、F，其中，其中杂质A (β-多西多西环素，又称素，又称为6-表多西表多西环素，素，6-epidoxycycline)，是合成，是合成过程中美他程中美他环素素转变为多西多西环素素时产生的生的6-差向副差向副产物，物，杂质B美他美他环素是合成中素是合成中间体，体，杂质E土霉素土霉素为合成起始原料，合成起始原料，杂质F能能够是土霉素中的是土霉素中的杂质2-乙乙酰-2-去去酰胺土胺土霉素在合成多西霉素在合成多西环素素过程的共存物，程的共存物，杂质C、、D 能能够是多西是多西环素在溶液或放置素在溶液或放置过程中生成的差向程中生成的差向异构体 l    2005年版药典规范中土霉素作为特定杂质的年版药典规范中土霉素作为特定杂质的单独规定限制，因多批原料及片剂中均未检出单独规定限制，因多批原料及片剂中均未检出土霉素，故将土霉素作为其他杂质控制，另添土霉素，故将土霉素作为其他杂质控制，另添加对其他单个杂质和总杂质的限制控制。

加对其他单个杂质和总杂质的限制控制l如：如：盐酸土霉素酸土霉素<欧洲欧洲药典典>6.0规定：定：4-差向土差向土霉素霉素≤0.5%，四，四环素素≤2.0%，，2-乙乙酰-2去去酰胺土胺土霉素霉素≤2.0%，其他，其他杂质总和和≤2.0%，，l   国内国内样品品4-差向土霉素和四差向土霉素和四环素的含量很少，素的含量很少，故将其作故将其作为其他其他杂质控制，不再控制，不再单独独规定限制，定限制，其他其他杂质总和和≤2.0%；；l   三批三批样品中品中2-乙乙酰-2-去去酰胺土霉素的含量胺土霉素的含量约为2.5%，有文献，有文献报道道2-乙乙酰-2-去去酰胺土霉素的胺土霉素的抗菌活性很低抗菌活性很低[2]，但未，但未见其毒性的相关其毒性的相关报道，道，故本故本规范范规定其限制定其限制为3.5%，，l   限制限制为：： 供供试品溶液色品溶液色谱图中如有中如有杂质峰，峰， 2-乙乙酰-2-去去酰胺土霉素胺土霉素杂质峰面峰面积不得大于不得大于对照溶液主峰面照溶液主峰面积的的1.75倍〔倍〔3.5%〕，其他各〕，其他各杂质峰峰面峰峰面积的和不得大于的和不得大于对照溶液主峰面照溶液主峰面积〔〔2.0%〕。

〕l  如：如：盐酸四酸四环素素<欧洲欧洲药典典>6.0版版规定：定：4-差差向四向四环素素≤3.0%，，2-乙乙酰-2去去酰胺四胺四环素素≤1.5%〔〔该杂质在四在四环素的峰尾流出〕，脱水四素的峰尾流出〕，脱水四环素素 ≤0.5%，差向脱水四，差向脱水四环素素≤0.5%l   经实验，国内，国内样品品4-差向四差向四环素的含量均小素的含量均小于于3.0%，故将，故将<中国中国药典典>2005年版年版规范范规定定的的4-差向四差向四环素素≤4.0%的限制改的限制改为3.0%l  该色色谱条件下初次条件下初次检出了土霉素，含量很少，出了土霉素，含量很少，三批三批样品均在品均在0.1%以下，以下，l   三批三批样品中不存在品中不存在2-乙乙酰-2去去酰胺四胺四环素素杂质，如其他，如其他样品含有品含有2-乙乙酰-2去去酰胺四胺四环素素时，，可将可将该杂质作作为其他其他杂质控制，控制，规定其他定其他杂质限制限制为1.0%，， l  限制为：供试品溶液色谱图中如有杂质限制为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，土霉素、峰，土霉素、4-差向四环素、盐酸金霉素差向四环素、盐酸金霉素、脱水四环素、差向脱水四环素按校正、脱水四环素、差向脱水四环素按校正后的峰面积计算〔分别乘以校正因子后的峰面积计算〔分别乘以校正因子 1.0、、1.42、、1.39、、0.48和和0.62〕分别不得大于〕分别不得大于对照溶液主峰面积的对照溶液主峰面积的0.25倍〔倍〔0.5%〕、〕、1.5倍〔倍〔3.0%〕、〕、0.5倍〔倍〔1.0%〕、〕、0.25倍倍〔〔0.5%〕、〕、0.25倍〔倍〔0.5%〕，其他各杂〕，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的积的0.5倍〔倍〔1.0%〕。

〕l4.3.4含量测定含量测定  l4.3.4.1  盐酸多西环素盐酸多西环素, 盐酸四环素盐酸四环素, 盐酸土霉盐酸土霉素等素等l   由于由于2005年版药典测定四环素类的流动相中年版药典测定四环素类的流动相中的草酸铵容易结晶析出呵斥系统堵塞，加之流的草酸铵容易结晶析出呵斥系统堵塞，加之流动相中的二甲基甲酰胺容易吸附在管路和检测动相中的二甲基甲酰胺容易吸附在管路和检测池中，影响后续种类的检测，池中，影响后续种类的检测，l   2021年版药典的起草时对流动相作了较大修年版药典的起草时对流动相作了较大修正，对多西环素及其制剂色谱分别的影响要素正，对多西环素及其制剂色谱分别的影响要素包括水相缓冲盐的种类和浓度、包括水相缓冲盐的种类和浓度、pH值、扫尾剂、值、扫尾剂、有机相、柱温等进展了系统的调查，确定了新有机相、柱温等进展了系统的调查，确定了新的流动相的流动相. l   用醋酸铵和乙腈替代草酸胺及用醋酸铵和乙腈替代草酸胺及N,N－二甲基－二甲基甲酰胺，甲酰胺，l   并在流动相中添加了少量的并在流动相中添加了少量的EDTA，用经于，用经于竞争性抑制色谱填料中残留重金属离子与四环竞争性抑制色谱填料中残留重金属离子与四环素类及杂质的络合，素类及杂质的络合，l   添加了少量三乙胺可以封锁柱填料中部分剩添加了少量三乙胺可以封锁柱填料中部分剩余硅羟基的影响，减少拖尾。

余硅羟基的影响，减少拖尾l    土霉素，四环素等同系种类经系统调查后也土霉素，四环素等同系种类经系统调查后也采用了上述流动相系统，仅在醋酸铵的浓度、采用了上述流动相系统，仅在醋酸铵的浓度、比例以及比例以及pH值等条件进展了调整表值等条件进展了调整表4.2 流动相配比见下表流动相配比见下表: : 表表4.2 4.2 含量测定流动相〔含量测定流动相〔20212021年版〕年版〕盐酸土霉素盐酸土霉素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液[0.25mol·L[0.25mol·L-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1mol·L-0.1mol·L-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：：1010：：1 1）用醋酸调节）用醋酸调节pHpH值至值至7.5]7.5]－乙腈－乙腈(88(88：：12) 12) 盐酸四环素盐酸四环素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液[0.15mol·L[0.15mol·L-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1mol·L-0.1mol·L-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：：1010：：1 1）用醋酸调节）用醋酸调节pHpH值至值至8.5]8.5]－乙腈－乙腈(83(83：：17) 17) 盐酸多西环素盐酸多西环素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液[0.25mol·L[0.25mol·L-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1mol·L-0.1mol·L-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：：1010：：1 1）用冰醋酸调节）用冰醋酸调节pHpH值至值至8.8]8.8]－乙腈－乙腈(85(85：：15) 15) 盐酸美他环素盐酸美他环素醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液[0.25mol·L[0.25mol·L-1-1醋酸铵醋酸铵-0.1mol·L-0.1mol·L-1-1EDTAEDTA钠盐钠盐- -三乙三乙胺（胺（100100：：1010：：1 1）用冰醋酸调节）用冰醋酸调节pHpH值至值至8.3]8.3]－乙腈－乙腈(85(85：：15) 15) 盐酸米诺环素盐酸米诺环素0.2mol·L0.2mol·L-1-1醋酸铵醋酸铵- -二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺- -四氢呋喃四氢呋喃 (600 (600：：398398：：2)2)，，内含内含0.01mol0.01mol的的EDTAEDTA钠（与钠（与20052005年版）年版）盐酸金霉素盐酸金霉素高氯酸高氯酸- -二甲亚砜二甲亚砜- -水水(8:525:467)(pH(8:525:467)(pH小于小于2.0)2.0)l   按上述流动相对多西环素、四环素、土霉素按上述流动相对多西环素、四环素、土霉素进展分别研讨，可以使主成分与杂质到达良好进展分别研讨，可以使主成分与杂质到达良好分别，分别的杂质数根本与分别，分别的杂质数根本与EP6.0报导的一致。

报导的一致图中代号图中代号EPEP代号代号峰名称峰名称1 1E E杂质杂质E(E(土霉素土霉素) )2 2D D杂质杂质D D（（4-4-差向差向-6--6-差向多西环素差向多西环素, ,3 3C C杂质杂质C C（（4-4-差向多西环素）差向多西环素）4 4B B杂质杂质B B（美他环素）（美他环素）5 5A A杂质杂质A(β-A(β-多西环素多西环素) )多西环素多西环素6 6F F杂质杂质F(2-F(2-乙酰乙酰-6--6-脱碳酰胺多西环素脱碳酰胺多西环素) )图图4.1. 多西环素分别图多西环素分别图 出峰顺序出峰顺序(Rt)(Rt)峰名称峰名称5.4715.4714 4－差向四环素－差向四环素6.1486.148土霉素土霉素9.5889.588差向脱水四环素差向脱水四环素14.21014.210盐酸四环素盐酸四环素23.14723.147盐酸金霉素盐酸金霉素26.58126.581脱水四环素脱水四环素 图4.2. 四环素分别图出峰顺序出峰顺序(RT)(RT)峰名称峰名称9.1959.1954-4-差向四环素峰（与土霉素色谱峰相对保留时间约为差向四环素峰（与土霉素色谱峰相对保留时间约为0.90.9））1078910789土霉素峰土霉素峰12.19412.1942-2-乙酰乙酰-2--2-去酰胺土霉素峰（与土霉素色谱峰相对去酰胺土霉素峰（与土霉素色谱峰相对 保留时间约为保留时间约为1.11.1））                  图图4.3. 土霉素分别图土霉素分别图l几点留意：几点留意： l(1)  由于流动相由于流动相pH值在值在7.5-8.8，因此需求选择耐，因此需求选择耐碱性的色谱柱。

碱性的色谱柱l(2)   主峰与其有关物质的峰形和分别效果受柱温主峰与其有关物质的峰形和分别效果受柱温影响较大，本品检测时控制柱温是有必要的影响较大，本品检测时控制柱温是有必要的l(3)  与主峰相对保管时间为与主峰相对保管时间为1.1处的杂质能够为处的杂质能够为2-乙酰乙酰-2-去酰胺四环类杂质在土霉素、多西环素去酰胺四环类杂质在土霉素、多西环素中都存在，故在系统适用性实验中应规定与其的中都存在，故在系统适用性实验中应规定与其的分别度l4.3.4.2金霉素金霉素  l   采用酸性流动相：氯酸采用酸性流动相：氯酸-二甲亚砜二甲亚砜-水水(8:525:467)(pH小于小于2.0)取代了取代了2005年版的流年版的流动相，分别效果如下实验过碱性流动相，效动相，分别效果如下实验过碱性流动相，效果不理想留意：采用耐酸的色谱柱果不理想留意：采用耐酸的色谱柱出峰出峰顺顺序序(RT)(RT) 峰名称峰名称8.3298.329 盐盐酸四酸四环环素素9.3669.366 4- 4-差向异金霉素（差向异金霉素（EICTCEICTC））11.24511.245 去甲基金霉素去甲基金霉素14.26714.267 4- 4-差向金霉素差向金霉素16.97916.979 盐盐酸金霉素酸金霉素20.78320.783 乙乙酰酰-2--2-脱氨甲脱氨甲酰酰金霉素（金霉素（ADCTCADCTC））20.78320.783 2- 2-脱水四脱水四环环素素         图图4.4.  金霉素分别图金霉素分别图图4.4图4.. 金霉素分别图 金霉素分别图l5、酰胺醇类抗生素、酰胺醇类抗生素  本类种类包括：氯本类种类包括：氯霉素类，甲砜霉素类。

霉素类，甲砜霉素类l5.1氯霉素类氯霉素类l5.1.1根本特点根本特点 l  本品由本品由J.Ehlrich于于1947年发现，从链霉年发现，从链霉菌菌Streptomyces Venezuela的培育液中得的培育液中得到，到，1949年开场化学合成氯霉素中含年开场化学合成氯霉素中含有两个不对称的碳原子，有四个立体异有两个不对称的碳原子，有四个立体异构体，一对赤式异构体无活性；构体，一对赤式异构体无活性；L-(+)-苏苏式异构体的抗菌作用仅相当于式异构体的抗菌作用仅相当于D-(-)-苏式苏式异构体的异构体的0.5％化学合成法得％化学合成法得D,L-苏式苏式混旋体，又称合霉素，进一步拆分得氯混旋体，又称合霉素，进一步拆分得氯霉素l   本品在醋酸乙酯中呈左旋，在无水乙醇中呈本品在醋酸乙酯中呈左旋，在无水乙醇中呈右旋，这一特征为琥珀氯霉素和无味氯霉素所右旋，这一特征为琥珀氯霉素和无味氯霉素所不具备的不具备的l  氯霉素水溶液不稳定，水溶液易水解，氯霉素水溶液不稳定，水溶液易水解，l           得得2-氨基氨基-1-〔〔4-硝基苯〕硝基苯〕-1，，3-丙二醇5.1.25.1.2种类收载情况：未新增种类收载情况：未新增 品种品种原料原料 制剂制剂 12 12 3 3 9 9l5.1.3  2021年版药典本类药质量量规范要点年版药典本类药质量量规范要点l5.1.3.1 性状性状  l氯霉素为白色或微带黄绿色结晶或结晶性粉末氯霉素为白色或微带黄绿色结晶或结晶性粉末.l棕榈氯霉素为白色或类白色粉末。

棕榈氯霉素为白色或类白色粉末l琥珀氯霉素为白色或类白色结晶性粉末琥珀氯霉素为白色或类白色结晶性粉末.l5.1.3.2  鉴别鉴别l采用采用HPLC、、TLC以及以及IR等方法作为鉴别反响，等方法作为鉴别反响，也有用也有用UV法作为鉴别反响法作为鉴别反响l5.1.3.3.1有关物质有关物质  l    在在2005年版药典执行过程中发如今规定的色年版药典执行过程中发如今规定的色谱条件下，杂质对硝基苯甲醛峰的峰形严重前谱条件下，杂质对硝基苯甲醛峰的峰形严重前倾，对称性差，导致测定结果的误差很大倾，对称性差，导致测定结果的误差很大l   在原色谱条件的根底上进展了修正，修订了在原色谱条件的根底上进展了修正，修订了流动相系统与检测波长流动相系统与检测波长l    氯霉素及其滴耳液，滴眼液中的二醇物与对氯霉素及其滴耳液，滴眼液中的二醇物与对硝基苯甲醛测定照含量测定项下硝基苯甲醛测定照含量测定项下HPLC法的色法的色谱条件测定，用对照品以外标法计算杂质含量谱条件测定，用对照品以外标法计算杂质含量图图5.1. 氯霉素分别图〔优化前〕氯霉素分别图〔优化前〕              图图5.2. 氯霉素分别图〔优化后〕氯霉素分别图〔优化后〕l5.1.3.3.2残留溶剂残留溶剂 l   由于氯霉素在消费过程中运用了二类溶剂氯由于氯霉素在消费过程中运用了二类溶剂氯苯与三类溶剂乙醇，新增了苯与三类溶剂乙醇，新增了2种溶剂的检查，种溶剂的检查，采用残留溶剂检查法的第二法。

采用残留溶剂检查法的第二法l5.1.3.3.3 防腐剂防腐剂   l    氯霉素滴眼液新增羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟氯霉素滴眼液新增羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯的检查，用苯丙酯的检查，用HPLC 法与有关物质同时检法与有关物质同时检出，限制出，限制80%-120%出峰顺序出峰顺序 峰名称峰名称 1 1羟苯甲酯羟苯甲酯 2 2羟苯乙酯羟苯乙酯 3 3羟苯丙酯羟苯丙酯 4 4氯霉素二醇物；氯霉素二醇物； 5 5对硝基苯甲醛对硝基苯甲醛 6 6氯霉素氯霉素 图5.3. 氯霉素有关物质与防腐剂分别图l5.1.3.3.4 琥珀氯霉素与棕榈氯霉素中的游离氯琥珀氯霉素与棕榈氯霉素中的游离氯霉素霉素    l    用用TLC法检查，与氯霉素对照品溶液主斑点法检查，与氯霉素对照品溶液主斑点比较比较l5.1.3.3.5 琥珀氯霉素琥珀氯霉素 l   在正文下新增可见异物、不溶性微粒和细菌在正文下新增可见异物、不溶性微粒和细菌内毒素表表5.1 5.1 色谱条件比较色谱条件比较 流动相流动相检测波长检测波长20052005年版年版药典色谱药典色谱条件条件含含0.1%0.1%庚烷磺酸钠的溶液（取庚烷磺酸钠的溶液（取0.01%0.01%庚烷磺酸钠溶液庚烷磺酸钠溶液500ml500ml与二甲基甲酰胺与二甲基甲酰胺5ml5ml、冰醋酸、冰醋酸0.5ml0.5ml，混匀），混匀）- -乙醇（乙醇（7575：：2525））272nm272nm20102010年版年版药典色谱药典色谱条件条件含含0.1%0.1%庚烷磺酸钠的溶液（取磷酸二氢钾庚烷磺酸钠的溶液（取磷酸二氢钾6.8g6.8g，用，用0.1%0.1%庚庚烷磺酸钠溶液稀释至烷磺酸钠溶液稀释至1000ml1000ml，再加三乙胺，再加三乙胺5ml5ml，混匀，用，混匀，用磷酸调节磷酸调节pHpH值至值至2.52.5））277nm277nm5.1.4含量测定含量测定5.1.4.1 色谱条件色谱条件  对对HPLC法测定含量的色谱条件法测定含量的色谱条件进展了优化：进展了优化：l5.1.4.2．．2005年版药典规定氯霉素滴眼液标示年版药典规定氯霉素滴眼液标示量为：不得少于标示量的量为：不得少于标示量的85.0%，，l现修订为：应为标示量的现修订为：应为标示量的90.0-120.0%l   5.1.4.3．琥珀氯霉素及注射用琥珀氯霉素，．琥珀氯霉素及注射用琥珀氯霉素，棕榈氯霉素及其制剂采用紫外一可见光分光光棕榈氯霉素及其制剂采用紫外一可见光分光光度法测定含量，未修订。

度法测定含量，未修订l5.2 甲砜霉素类甲砜霉素类l5.2.1种类收载情况：种类收载情况：l甲砜霉素、甲砜霉素、 甲砜霉素肠溶片和甲砜霉素甲砜霉素肠溶片和甲砜霉素胶囊胶囊l5.2.2增、修订情况增、修订情况l5.2.2.1  鉴别鉴别  l   原料项下的原料项下的TLC鉴别中的展开剂比例参鉴别中的展开剂比例参照照BP2021进展了修订，由乙酸乙酯进展了修订，由乙酸乙酯-甲醇甲醇〔〔97：：13〕修订为〕修订为;乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇〔甲醇〔97：：3〕l5.2.2.2  吸收系数吸收系数  增订了吸收系数检查项增订了吸收系数检查项,l其他工程均未做修正其他工程均未做修正l6、利福霉素类、利福霉素类l6.1、根本特点、根本特点  l利福平系由链霉菌利福平系由链霉菌S.mediterranei发酵培发酵培育的代谢产物利福霉素育的代谢产物利福霉素SV合成的半合成合成的半合成抗结核抗生素，在其发酵和合成过程中抗结核抗生素，在其发酵和合成过程中能够产生利福霉素能够产生利福霉素SV、醌式利福平、、醌式利福平、N-氧化利福平及氧化利福平及3-甲酰利福霉素等杂质甲酰利福霉素等杂质l6.2、种类收载情况：、种类收载情况：l利福平利福平l利福平片、利福平片、l利福平胶囊、利福平胶囊、l利福平滴眼液利福平滴眼液l异福片异福片(利福平与异烟肼的复方制剂利福平与异烟肼的复方制剂)l异福胶囊异福胶囊l异福酰胺片〔利福平与异烟肼与吡嗪酰胺的复异福酰胺片〔利福平与异烟肼与吡嗪酰胺的复方制剂〕方制剂〕l异福酰胺胶囊异福酰胺胶囊l本类药物为抗结核病药本类药物为抗结核病药, 以利福平为原料制成以利福平为原料制成的一方制剂及滴眼用制剂；的一方制剂及滴眼用制剂；l为适宜不同结核病人的需求制成各成分比例不为适宜不同结核病人的需求制成各成分比例不同规格的复方制剂。

同规格的复方制剂l6.3 修订和增订工程概略修订和增订工程概略l6.3.1  鉴别鉴别 l6.3.1.1  用含量测定项下的用含量测定项下的HPLC方法记录的色方法记录的色谱图中，供试品溶液主峰〔或几个主峰〕的保谱图中，供试品溶液主峰〔或几个主峰〕的保管时间与对照品溶液主峰〔或几个主峰〕的保管时间与对照品溶液主峰〔或几个主峰〕的保管时间一致作为鉴别管时间一致作为鉴别l l6.3.1.2  利福平原料及其制剂均相应添加利福平原料及其制剂均相应添加TLC鉴鉴别，别，HPLC与与TLC两项鉴别任选一项两项鉴别任选一项l6.3.1.3 滴眼液中如含有聚维酮，对滴眼液中如含有聚维酮，对TLC展开有展开有影响，建议用影响，建议用HPLC鉴别l6.3.2  有关物质有关物质  l利福平中存在各种知杂质，如：醌式利福平，利福平中存在各种知杂质，如：醌式利福平，N-氧化利福平，氧化利福平，3-甲酰利福霉素甲酰利福霉素SV,l在在2005年版药典利福平的有关物质检查，用年版药典利福平的有关物质检查，用HPLC方法并利用上述知杂质与主成分的校正方法并利用上述知杂质与主成分的校正因子，对各杂质进展校正，用加校正因子的本因子，对各杂质进展校正，用加校正因子的本身对照法计算含量。

身对照法计算含量l   2021年版药典修正为采用杂质对照品按外标年版药典修正为采用杂质对照品按外标法计算含量，结果更准确法计算含量，结果更准确l6.3.4、溶出度、溶出度l本品为难溶于水的药物，故口服制剂均进展溶本品为难溶于水的药物，故口服制剂均进展溶出度检查出度检查l对复方制剂异福片〔胶囊〕项下的溶出度，除对复方制剂异福片〔胶囊〕项下的溶出度，除测定利福平外，添加了异烟肼的测定，测定利福平外，添加了异烟肼的测定，l   异福酰胺片〔胶囊〕添加吡嗪酰胺和异烟肼异福酰胺片〔胶囊〕添加吡嗪酰胺和异烟肼的测定，用紫外一可见分光光度法测定利福平，的测定，用紫外一可见分光光度法测定利福平，用用HPLC测定吡嗪酰胺和异烟肼测定吡嗪酰胺和异烟肼l6.3.5 浸透压摩尔浓度浸透压摩尔浓度    滴眼制剂新增浸透压摩滴眼制剂新增浸透压摩尔浓度检查尔浓度检查 为为 260-320mOsml/kgl l6.3.6  含量测定含量测定   l6.3.6.1` 滴眼用利福平修订了含量测定中系统适滴眼用利福平修订了含量测定中系统适用性分别度实验用的对照物，原规范为利福平用性分别度实验用的对照物，原规范为利福平与醌式利福平的分别度，新规范为利福平与利与醌式利福平的分别度，新规范为利福平与利福霉素福霉素SV的分别度。

的分别度l6.3.5.2  本类药物含量测定均采用本类药物含量测定均采用HPLC法测定，法测定，在系统适用性实验中用知杂质制备分别度实验在系统适用性实验中用知杂质制备分别度实验用溶液，保证了方法的专属性，准确性用溶液，保证了方法的专属性，准确性l6.3.5.3   复方制剂中用几个主成分与醌式利福复方制剂中用几个主成分与醌式利福平制备分别度实验用溶液，进展系统适用性实平制备分别度实验用溶液，进展系统适用性实验，保证结果的准确性验，保证结果的准确性 7. 7. 喹诺酮类抗生素喹诺酮类抗生素7.1 7.1 种类收载情况种类收载情况 表表7.1 20217.1 2021年版药典喹诺酮类种类收年版药典喹诺酮类种类收载情况载情况 原料原料 制剂制剂 总计总计收载品种收载品种 12 12 34 34 46 46新增品种新增品种 3 3 5 5 8 8l新增种类：新增种类：l  原料：原料：                            制剂制剂:l 左氧氟沙星左氧氟沙星                    左氧氟沙星片左氧氟沙星片l盐酸左氧氟沙星盐酸左氧氟沙星             盐酸左氧氟沙片，盐酸左氧氟沙片， l                                         盐酸左氧氟沙星胶囊盐酸左氧氟沙星胶囊l盐酸洛美沙星盐酸洛美沙星                 盐酸洛美沙星片，盐酸洛美沙星片，l                                         盐酸洛美沙星胶囊盐酸洛美沙星胶囊l7.2  2005年版药典本类抗菌药质量规范年版药典本类抗菌药质量规范要点要点l7.2.1   喹诺酮类抗生素是一类全合成的喹诺酮类抗生素是一类全合成的新型抗生素药，本版药典规定原料药均新型抗生素药，本版药典规定原料药均以有效成分计算含量。

以有效成分计算含量l7.2.2  由于本类药品含量测定与有关物质由于本类药品含量测定与有关物质大多采用大多采用HPLC法与法与HPLC梯度洗脱，故梯度洗脱，故鉴别采用鉴别采用HPLC法并附加其他方法法并附加其他方法l    在鉴别实验中规定在鉴别实验中规定TLC和和HPLC两个两个色谱鉴别项，可根据实验室条件任选其色谱鉴别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于灵敏操作中之一，便于灵敏操作l7.2.3  有关物质有关物质l7.2.3.1  本类药品有关物质采用本类药品有关物质采用HPLC法与法与HPLC梯度洗脱均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，梯度洗脱均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测反相色谱，紫外检测l    原料原料12个种类均规定检查有关物质，制剂个种类均规定检查有关物质，制剂34个个种类除种类除6个种类乳膏剂，胶囊，片未规定检查有个种类乳膏剂，胶囊，片未规定检查有关物质外关物质外, 其他种类均有有关物质检查其他种类均有有关物质检查l    其中除吡哌酸，甲磺酸培氟沙星，氟罗沙星外，其中除吡哌酸，甲磺酸培氟沙星，氟罗沙星外，其他原料及其制剂共其他原料及其制剂共31个种类采用个种类采用HPLC梯度洗梯度洗脱方法脱方法.表表7.2 7.2 喹诺酮类抗生素有关物质检查喹诺酮类抗生素有关物质检查 总计总计  HPLC等度洗脱等度洗脱 HPLC梯度洗脱梯度洗脱原料原料 12 12 3 3 9 9制剂制剂 34 34 5 5 23 23l7.2.3.2  环丙沙星，盐酸环丙沙星，氧氟沙星，环丙沙星，盐酸环丙沙星，氧氟沙星，诺氟沙星的有关物质检查，诺氟沙星的有关物质检查，EP、、BP、、USP均采均采用用TLC、、HPLC两种方法进展控制。

两种方法进展控制l   本版药典用本版药典用HPLC梯度洗脱方法，将梯度洗脱方法，将EP6.0用用TLC、、HPLC两种方法检测的杂质两种方法检测的杂质,一次检测，一次检测，提高了任务效率，提高了任务效率，l   l   在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，用在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，用双波长测定，双波长测定，l  用杂质对照品法与本身对照法计算杂质的含用杂质对照品法与本身对照法计算杂质的含量l  杂质杂质A用用HPLC检测的灵敏度、正确性优于检测的灵敏度、正确性优于TLC法l     如：环丙沙星如：环丙沙星EP6.0/BP2021、、USP31和和<中中国药典国药典>2005年版二部均以高效液相等度洗脱年版二部均以高效液相等度洗脱方法检查有关物质，方法检查有关物质，l   国外药典均采用磷酸三乙胺系统等度洗脱，国外药典均采用磷酸三乙胺系统等度洗脱，中国药典采用枸橼酸三乙胺系统等度洗脱；中国药典采用枸橼酸三乙胺系统等度洗脱；l  另各国药典均采用薄层色谱法检查氟喹啉酸另各国药典均采用薄层色谱法检查氟喹啉酸〔杂质〔杂质A〕l  本规范在参考磷酸三乙胺系统根底上，在环本规范在参考磷酸三乙胺系统根底上，在环丙沙星主峰被洗脱后，采用梯度洗脱方式，添丙沙星主峰被洗脱后，采用梯度洗脱方式，添加有机相比例，使脂溶性杂质氟喹啉酸〔杂质加有机相比例，使脂溶性杂质氟喹啉酸〔杂质A〕得到有效洗脱。

〕得到有效洗脱 l本规范确定的梯度洗脱系统能有效分别杂质本规范确定的梯度洗脱系统能有效分别杂质A、、B、、lC、、E、、I、、D和和H，，图图7.1环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕278nml    l   根据杂质在根据杂质在278nm和和262nm不同波长的不同波长的呼应情况，分别以呼应情况，分别以278n检测杂质检测杂质B、、C、、D、、E、、I和其他杂质，以和其他杂质，以262nm检测杂质检测杂质A，，l  杂质杂质A用杂质对照品外标法计算含量用杂质对照品外标法计算含量.l  杂质杂质B、、C、、E、、I、、D和和H，用加校正因，用加校正因子与不加校正因子的本身对照法计算知子与不加校正因子的本身对照法计算知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量杂质和未知杂质的含量和杂质的总量图图7.2环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕278nm图图7.2环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕环丙沙星有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕262nml7.2.3.3    采用梯度洗脱采用梯度洗脱时，由于不同色，由于不同色谱柱的柱的行行为略有差略有差别，故在系，故在系统适用性适用性实验中，中，应规定主峰的出峰定主峰的出峰时间，主峰与知，主峰与知杂质的分的分别度。

度l如：如：盐酸酸环丙沙星丙沙星l称取氧氟沙星称取氧氟沙星对照品、照品、环丙沙星丙沙星对照品和照品和杂质I对照品各适量，加流照品各适量，加流动相相A溶解并稀溶解并稀释制成每制成每1ml中中约含氧氟沙星含氧氟沙星5μg、、环丙沙星丙沙星0.5mg和和杂质I 10μg的混合溶液，取的混合溶液，取20μl注入液相色注入液相色谱仪，，以以278nm为检测波波长，，记录色色谱图，，环丙沙星丙沙星峰的保管峰的保管时间约为12分环丙沙星峰与氧氟沙丙沙星峰与氧氟沙星峰和星峰和杂质I峰的分峰的分别度均度均应符合要求符合要求 图7.3 有关物质检查系统适用性溶液色谱图〔梯度洗脱〕 (盐酸环丙沙星)l如：如：盐酸洛美沙星酸洛美沙星l取洛美沙星取洛美沙星对照品适量，加水溶解并稀照品适量，加水溶解并稀释制成制成每每1ml中中约含含1.0mg的溶液，水浴加的溶液，水浴加热60分分钟，，冷却，取此液冷却，取此液20µl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图，洛美沙星峰保管，洛美沙星峰保管时间约为9分分钟，， 与主峰与主峰相相对保管保管时间分分别约0.8和和1.1处应能能检测到到杂质峰，且洛美沙星峰与两峰，且洛美沙星峰与两杂质峰的分峰的分别度均度均应符合要求。

符合要求l如如: :氧氟沙星氧氟沙星l称取氧氟沙星称取氧氟沙星对照品、照品、环丙沙星丙沙星对照品和照品和杂质E E对照品各适量，用照品各适量，用0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液溶解并酸溶液溶解并稀稀释制成每制成每1ml1ml中中约含氧氟沙星含氧氟沙星1.2mg1.2mg、、环丙沙丙沙星和星和杂质E E各各6μg6μg的混合溶液，取的混合溶液，取10μl10μl注入液注入液相色相色谱仪，以，以294nm294nm为检测波波长，，记录色色谱图，，氧氟沙星峰的保管氧氟沙星峰的保管时间约为1515分分钟氧氟沙星氧氟沙星峰与峰与杂质E E峰和氧氟沙星峰与峰和氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分丙沙星峰的分别度度应分分别大于大于2.02.0与与2.52.5图图7.4  氧氟沙星系统适用性实验分别度测试溶液色谱图氧氟沙星系统适用性实验分别度测试溶液色谱图       〔含杂质〔含杂质A和杂质和杂质B〕〔梯度洗脱〕〕〔梯度洗脱〕l7.2.3.4   由于梯度洗脱基线噪音相对较大，由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶峰面峰面0.05倍或倍或0.1倍的峰可忽略不计。

以倍的峰可忽略不计以免基线噪音影响结果正确性免基线噪音影响结果正确性l7.2.3.5  有关物质测定，结果计算分为三种方法：有关物质测定，结果计算分为三种方法：l〔〔1〕不加校正因子的本身对照法；〕不加校正因子的本身对照法；l〔〔2〕加校正因子的本身对照法；〕加校正因子的本身对照法；l〔〔3〕知杂质对照品外标法〕知杂质对照品外标法l用杂质对照品外标法计算知杂质的含量用杂质对照品外标法计算知杂质的含量.l用加校正因子与不加校正因子的本身对照法计用加校正因子与不加校正因子的本身对照法计算知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量算知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量l如：盐酸环丙沙星如：盐酸环丙沙星l供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A〔〔262nm检测〕按外标法以峰面积计算，不得过检测〕按外标法以峰面积计算，不得过0.3%杂质B、、C、、D和和E峰〔峰〔278nm检测〕按检测〕按校正后的峰面积计算〔分别乘以校正因子校正后的峰面积计算〔分别乘以校正因子0.7、、0.6、、1.4和和6.7〕，均不得大于对照溶液主峰面〕，均不得大于对照溶液主峰面积〔积〔0.2%〕；其他单个杂质〔〕；其他单个杂质〔278nm检测〕峰检测〕峰面积不得大于对照溶液主峰面积〔面积不得大于对照溶液主峰面积〔0.2%〕。

各〕各杂质〔杂质〔278nm检测〕校正后峰面积的和不得大检测〕校正后峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的于对照溶液主峰面积的3.5倍〔倍〔0.7%〕，供试〕，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰可忽略不计倍的峰可忽略不计l如如:氧氟沙星氧氟沙星l供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A〔〔238nm检测〕按外标法以峰面积计算，不得过检测〕按外标法以峰面积计算，不得过0.3%其他单个杂质〔其他单个杂质〔294nm检测〕峰面积不检测〕峰面积不得大于对照溶液主峰面积〔得大于对照溶液主峰面积〔0.2%〕，其他各杂〕，其他各杂质峰面积的和〔质峰面积的和〔294nm检测〕不得大于对照溶检测〕不得大于对照溶液主峰面积的液主峰面积的2.5倍〔倍〔0.5%〕，供试品溶液色〕，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰可倍的峰可忽略不计忽略不计 图7.5 有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕238n图图7.5  有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕有关物质检查供试品溶液色谱图〔梯度洗脱〕294nml7.2.4   大容量注射液与滴眼液添加浸透压摩尔大容量注射液与滴眼液添加浸透压摩尔浓度检查。

浓度检查l   如如:乳酸环丙沙星氯化钠注射液乳酸环丙沙星氯化钠注射液, l   氧氟沙星氯化钠注射液氧氟沙星氯化钠注射液l7.2.5  滴眼液添加防腐剂如：苯扎溴铵，羟苯滴眼液添加防腐剂如：苯扎溴铵，羟苯甲酯、羟苯乙酯，羟苯丙酯，硫柳汞等的检查甲酯、羟苯乙酯，羟苯丙酯，硫柳汞等的检查l    用用HPLC 法与有关物质同时检出，法与有关物质同时检出，l    限制限制:   80%-120%l7.2.6含量测定含量测定l本类共本类共46个种类的含量测定均采用个种类的含量测定均采用HPLC法或法或HPLC梯度洗脱梯度洗脱l     均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测色谱，紫外检测l   为保证方法的专属性与结果的正确性利用为保证方法的专属性与结果的正确性利用该类药物知杂质对照品，同系物或加热能产生该类药物知杂质对照品，同系物或加热能产生降解物质用于制备系统适用性实验用分别度降解物质用于制备系统适用性实验用分别度溶液，测定分别度，保证了结果的准确性溶液，测定分别度，保证了结果的准确性l   按外标法以峰面积计算供试品中的含量按外标法以峰面积计算供试品中的含量。

l如如 甲磺酸培氟沙星甲磺酸培氟沙星  l【含量【含量测定】定】 照高效液相色照高效液相色谱法〔附法〔附录Ⅴ  D〕〕测定定l  色色谱条件与系条件与系统适用性适用性实验   用十八用十八烷基硅基硅烷键合硅胶合硅胶为填充填充剂;以以0.04mol/L磷酸二磷酸二氢钾溶液溶液-0.05mol/L四丁基溴化四丁基溴化铵溶液溶液-乙乙腈〔〔80∶ ∶8∶ ∶9〕〔〕〔用磷酸用磷酸调理理pH值至至4.0〕〕为流流动相相;柱温柱温40℃；；检测波波长为273nm. 取培氟沙星取培氟沙星对照品与照品与诺氟沙星氟沙星对照品各适量，加流照品各适量，加流动相溶解并稀相溶解并稀释制成每制成每1ml中含培氟沙星与中含培氟沙星与诺氟沙星各氟沙星各约20µg的混合溶液，的混合溶液，取取20μl注入液相色注入液相色谱仪，出峰，出峰顺序依次序依次为诺氟沙氟沙星、培氟沙星，培氟沙星峰的保管星、培氟沙星，培氟沙星峰的保管时间约为15分分钟，，诺氟沙星峰与培氟沙星峰的分氟沙星峰与培氟沙星峰的分别度度应大于大于6.0,培氟沙星峰与相培氟沙星峰与相邻峰峰间的分的分别度度应符合要求符合要求l测定法定法   取本品适量，精取本品适量，精细称定，加水溶解并称定，加水溶解并定量稀定量稀释制成每制成每1m中中约含培氟沙星含培氟沙星20μg的溶的溶液，精液，精细量取量取20μl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图；另取培氟沙星；另取培氟沙星对照品，同法照品，同法测定，按外定，按外标法以峰面法以峰面积计算出供算出供试品中品中C17H20FN3O3的的含量。

含量图图7.6 诺氟沙星和培氟沙星的分别情况诺氟沙星和培氟沙星的分别情况l 如： 左氧氟沙星l 【含量测定】 照高效液相色谱法〔附录Ⅴ D〕测定l色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵高氯酸钠溶液〔取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸调理pH值至2.2〕-乙腈〔85：15〕为流动相；检测波长为294nm称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.12mg、环丙沙星和杂质E各6μg的混合溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保管时间约为15分钟，左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰间的分别度应分别大于2.0与2.5l测定法定法  取本品取本品约60mg，精，精细称定，置称定，置50ml量量瓶中，加瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀酸溶液溶解并定量稀释至至刻度，刻度，摇匀，精匀，精细量取量取5ml，置，置50ml量瓶中，量瓶中，用用0.1mol/L盐酸溶液稀酸溶液稀释至刻度，至刻度，摇匀，精匀，精细量取量取10μl注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图；另取；另取左氧氟沙星左氧氟沙星对照品适量，同法照品适量，同法测定，按外定，按外标法法以峰面以峰面积计算，即得。

算，即得l7.3 规范中涉及的知范中涉及的知杂质，在，在规范最后列出其范最后列出其化学命名，便于与国外化学命名，便于与国外药典典规范中的范中的杂质比比较l如：氧氟沙星如：氧氟沙星l杂质ıA. l〔〔±〕〕9,10-二氟二氟-3-甲基甲基-7-氧代氧代-2,3-二二氢-7H-吡吡啶并并[1,2,3-de]-1,4-苯并苯并恶唑-6-羧酸酸l杂质E.l〔〔±〕〕9 -氟氟-3-甲基甲基-7-氧代氧代-10-〔〔1-哌嗪基〕基〕-2,3-二二氢-7H-吡吡啶并并[1,2,3-de]-1,4-苯并苯并恶唑-6-羧酸酸l如：盐酸环丙沙星如：盐酸环丙沙星l杂质杂质A. l1-环丙基环丙基-6-氟氟-7-氯氯-4-氧代氧代-1,4-二氢喹啉二氢喹啉-3-羧羧酸酸 〔氟喹啉酸〕〔氟喹啉酸〕l杂质杂质B.l1-环丙基环丙基--4-氧代氧代-7-〔〔1-哌嗪基〕哌嗪基〕-1,4-二氢喹二氢喹啉啉-3-羧酸羧酸l杂质杂质C.l1-环丙基环丙基-6-氟氟- 7-[(2-氨乙基氨乙基)氨基氨基] -4-氧代氧代-1,4-二氢喹啉二氢喹啉-3-羧酸羧酸l杂质杂质D. l1-环丙基环丙基-7-氯氯- 4-氧代氧代-6-〔〔1-哌嗪基〕哌嗪基〕-1,4-二二氢喹啉氢喹啉-3-羧酸羧酸l杂质杂质E. l1-环丙基环丙基-6-氟氟---7-〔〔1-哌嗪基〕哌嗪基〕4-〔〔1H〕喹〕喹啉酮啉酮l杂质杂质I.l1-环丙基环丙基-7-氯氯-6-[(2-氨乙基氨乙基)氨基氨基] -4-氧代氧代-1,4-二氢二氢-3-喹啉甲酸喹啉甲酸l8、抗肿瘤抗生素类、抗肿瘤抗生素类l  2021年版药典共收载丝裂霉素、放线菌年版药典共收载丝裂霉素、放线菌素素D、盐酸平阳霉素、盐酸多柔比星、盐、盐酸平阳霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红霉素及其注射用制酸表柔比星、盐酸柔红霉素及其注射用制剂共剂共12个种类，个种类，l   盐酸平阳霉素，盐酸表柔比星及注射用盐酸平阳霉素，盐酸表柔比星及注射用盐酸表柔比星为新增种类。

盐酸表柔比星为新增种类表表8.1 8.1 种类收载情况种类收载情况 原料原料  制剂制剂 总计总计20102010年版药典收载品种年版药典收载品种 6 6 6 6 12 12新增品种新增品种 2 2 1 1 3 38.1 8.1 增修订工程概略见表增修订工程概略见表8.28.2，， 表表8.2 20218.2 2021年版药典抗肿瘤抗生素类年版药典抗肿瘤抗生素类种类增修订工程种类增修订工程项目目修修订增增订鉴别鉴别2 2（（UVUV））pHpH1 1/ /有关物有关物质2 24 4防腐剂（羟苯甲酯）防腐剂（羟苯甲酯） / /1 1降压物质降压物质/ /6 6含量含量2 2l8.2 本类抗生素质量规范要点本类抗生素质量规范要点l本类抗生素除盐酸平阳霉素是博莱霉素类抗生本类抗生素除盐酸平阳霉素是博莱霉素类抗生素中的素中的A5组分，国外药典收载的硫酸组分，国外药典收载的硫酸/盐酸博盐酸博莱霉素主组分为莱霉素主组分为A2、、B2，，l其他种类国外药典均有收载，增修订后的质量其他种类国外药典均有收载，增修订后的质量规范已与国际药典接轨，有的已超越国外药典。

规范已与国际药典接轨，有的已超越国外药典l8.2.1 性状性状     盐酸平阳霉素为白色或类白色疏盐酸平阳霉素为白色或类白色疏松块状物或粉末，其他种类颜色较深，松块状物或粉末，其他种类颜色较深，l如丝裂霉素为深紫色结晶性粉末；如丝裂霉素为深紫色结晶性粉末；l放线菌素放线菌素D为鲜红色或深红色结晶，或橙红色为鲜红色或深红色结晶，或橙红色结晶性粉末；结晶性粉末；l盐酸多柔比星为橙红色结晶性粉末盐酸多柔比星为橙红色结晶性粉末l对光均不稳定，尤其是放线菌素对光均不稳定，尤其是放线菌素D，需避光或，需避光或遮光储存遮光储存l8.2.2 含量限制含量限制   l   各种类纯度相差较大，各种类纯度相差较大，l   其中盐酸平阳霉素纯度较低，含量限制为其中盐酸平阳霉素纯度较低，含量限制为85%,l    丝裂霉素限制为丝裂霉素限制为90%，，l    放线菌素放线菌素D限制为限制为95%，，l    其他那么为其他那么为97%或或98%l8.2.3 鉴别鉴别 l    原料大多收载了原料大多收载了HPLC法〔除放线菌素法〔除放线菌素D〕、〕、IR法〔除盐酸平阳霉素〕，法〔除盐酸平阳霉素〕，l   由于具有紫外吸收，该类原料均收载了由于具有紫外吸收，该类原料均收载了UV法，法，专属性较强；专属性较强；l   个别采用显色反响。

个别采用显色反响l    该类注射用制剂大多加了适量辅料，故未收该类注射用制剂大多加了适量辅料，故未收载载IR鉴别l8.2.4有关物质有关物质l8.2.4.1 盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红盐酸多柔比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红霉素采用霉素采用HPLC等度洗脱法，等度洗脱法，l    丝裂霉素、放线菌素丝裂霉素、放线菌素D、盐酸平阳霉素那么采、盐酸平阳霉素那么采用用HPLC梯度洗脱法，梯度洗脱法，l    分别规定了系统适用性实验分别规定了系统适用性实验,确保有关物质有效确保有关物质有效分别和检出分别和检出l   l1.主峰与破坏溶液降解产物的分别度〔如盐酸主峰与破坏溶液降解产物的分别度〔如盐酸平阳霉素〕、平阳霉素〕、l  2.主峰与特定杂质的分别度〔如丝裂霉素、盐主峰与特定杂质的分别度〔如丝裂霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星〕酸多柔比星、盐酸表柔比星〕l  3.梯度洗脱规定主峰保管时间范围、梯度洗脱规定主峰保管时间范围、l  4.采用系统适用性对照品溶液色谱图与规范图采用系统适用性对照品溶液色谱图与规范图谱比较〔如放线菌素谱比较〔如放线菌素D〕等方式，〕等方式， HPLC HPLC等度洗脱法等度洗脱法 HPLC HPLC梯度洗脱法梯度洗脱法盐盐酸多柔比星酸多柔比星注射用注射用盐盐酸多柔比星酸多柔比星丝丝裂霉素裂霉素注射用注射用丝丝裂霉素裂霉素盐盐酸表柔比星酸表柔比星注射用注射用盐盐酸表柔比星酸表柔比星放放线线菌素菌素D D注射用注射用放放线线菌素菌素D D盐盐酸柔酸柔红红霉素霉素注射用注射用盐盐酸柔酸柔红红霉素霉素盐盐酸平阳霉素酸平阳霉素注射用注射用盐盐酸平阳霉素酸平阳霉素表表表表8.3 8.3 8.3 8.3 有关物质有关物质有关物质有关物质l8.2.4.2有关物质测定结果计算有关物质测定结果计算:l    采用不加校正因子的主成分本身对照法和加采用不加校正因子的主成分本身对照法和加校正因子的主成分本身对照法。

根据种类不同校正因子的主成分本身对照法根据种类不同选择适宜的方法，或结合运用选择适宜的方法，或结合运用l    盐酸平阳霉素，由于其纯度较低，在运用本盐酸平阳霉素，由于其纯度较低，在运用本身对照法时，起草所天津所发明性地对本身对身对照法时，起草所天津所发明性地对本身对照溶液峰面积进展校正，抑制了主成分纯度低照溶液峰面积进展校正，抑制了主成分纯度低对结果的影响对结果的影响l例例8.1 盐酸平阳霉素有关物酸平阳霉素有关物质检查l有关物有关物质  取本品适量，加水溶解并稀取本品适量，加水溶解并稀释制成每制成每1ml中中含含2.0mg的溶液，作的溶液，作为供供试品溶液；精品溶液；精细量取量取2ml，置，置100ml量瓶中，用水稀量瓶中，用水稀释至刻度，至刻度，摇匀，作匀，作为对照溶液照含量照含量测定定项下色下色谱条件，量取条件，量取对照溶液照溶液20μl注入液注入液相色相色谱仪，，调理理检测灵敏度，使主成分色灵敏度，使主成分色谱峰的峰高峰的峰高约为满量程的量程的20%，精，精细量取供量取供试品溶液与品溶液与对照溶液照溶液各各20μl，分，分别注入液相色注入液相色谱仪，，记录色色谱图供试品品溶液色溶液色谱图中如有中如有杂质峰，最大峰，最大杂质峰面峰面积不得大于不得大于校正后校正后对照溶液主峰面照溶液主峰面积的的3.5倍〔倍〔7.0%〕，其它〕，其它单个个杂质峰面峰面积不得大于校正后不得大于校正后对照溶液主峰面照溶液主峰面积的的2.5倍倍〔〔5.0%〕，各〕，各杂质峰面峰面积和不得大于校正后和不得大于校正后对照溶液照溶液主峰面主峰面积的的7.5倍〔倍〔15.0%〕，供〕，供试品溶液色品溶液色谱图中任中任何小于何小于对照品溶液主峰面照品溶液主峰面积0.025倍的峰可忽略不倍的峰可忽略不计。

〔〔对照溶液主峰面照溶液主峰面积除以供除以供试品的含量，即品的含量，即为校正后校正后的的对照溶液主峰面照溶液主峰面积〕三批测定结果见表三批测定结果见表8.48.4表表8.4 8.4 三批样品测定结果三批样品测定结果         结果计算结果计算                              061101080105080302峰面积归一化法峰面积归一化法最大单一杂质最大单一杂质（（%））5.0 5.86.6总杂质（总杂质（%））13.3 14.6 14.2 不加校正因子自身对不加校正因子自身对照法照法最大单一杂质最大单一杂质（（%））5.6 6.77.6总杂质（总杂质（%））14.9 16.7 16.2 加校正因子自身对照加校正因子自身对照法法最大单一杂质最大单一杂质（（%））4.9 5.7 6.5 总杂质（总杂质（%））12.9 14.3 13.9 l    采用采用<中国药典中国药典>2005年版的液相色谱条件测年版的液相色谱条件测定盐酸平阳霉素有关物质，按峰面积归一化法定盐酸平阳霉素有关物质，按峰面积归一化法计算，三批样品有关物质量均小于计算，三批样品有关物质量均小于8%，，l    缘由在于原方法未能实现主峰前后两个较大缘由在于原方法未能实现主峰前后两个较大的杂质与主峰的分别。

的杂质与主峰的分别l     经调查，这两个杂质经过酸破坏和氧化破坏经调查，这两个杂质经过酸破坏和氧化破坏后分别有所添加后分别有所添加l   l有研讨阐明博莱霉素类物质易在分析过程中产有研讨阐明博莱霉素类物质易在分析过程中产生异构化，生异构化，l    因此，起草所分别搜集了主峰及主峰前后两因此，起草所分别搜集了主峰及主峰前后两个杂质峰，在一样的色谱条件下单独进样分析，个杂质峰，在一样的色谱条件下单独进样分析，l    结果，主峰及两个杂质均呈单一色谱峰，保结果，主峰及两个杂质均呈单一色谱峰，保管时间与有关物质检查色谱图中相应峰的保管管时间与有关物质检查色谱图中相应峰的保管时间一样时间一样 l    后对搜集的主成分及两个杂质进展了质谱扫后对搜集的主成分及两个杂质进展了质谱扫描，发现三者的质谱图有差别，描，发现三者的质谱图有差别，l    初步可以断定本法色谱图中新增的两个杂质初步可以断定本法色谱图中新增的两个杂质不是异构化产生，不是异构化产生，l  而是盐酸平阳霉素的酸降解物和氧化降解物，而是盐酸平阳霉素的酸降解物和氧化降解物，两个杂质的构造有待进一步确证两个杂质的构造有待进一步确证。

l系系统适用性适用性实验规定定为：取本品两份，每份：取本品两份，每份约8mg，一份加，一份加1mol/L盐酸溶液酸溶液1.0ml，另一份加，另一份加30%过氧化氧化氢溶液溶液1.0ml，，摇匀，放置匀，放置1小小时后，后，混合，加水混合，加水2ml，，摇匀，得每匀，得每1ml中中约含含盐酸平酸平阳霉素阳霉素2.0mg及其酸降解物〔及其酸降解物〔约含含10%〕与氧〕与氧化降解物〔化降解物〔约含含15%〕的混合溶液，取〕的混合溶液，取20μl注注入液相色入液相色谱仪，，记录色色谱图，出峰，出峰顺序序为酸降酸降解物峰、平阳霉素峰、氧化降解物峰〔相解物峰、平阳霉素峰、氧化降解物峰〔相对保保管管时间分分别约为0.94，，1.0，，1.1〕，平阳霉素峰〕，平阳霉素峰的保管的保管时间约为20分分钟酸降解物峰与平阳霉酸降解物峰与平阳霉素峰分素峰分别度度应不小于不小于1.0，平阳霉素峰与氧化降，平阳霉素峰与氧化降解物峰分解物峰分别度度应不小于不小于1.5色谱图见图8.1图图8.1盐酸平阳霉素分别度实验盐酸平阳霉素分别度实验HPLC图谱图谱l采用新建立的色谱方法分析博莱霉素、博安霉采用新建立的色谱方法分析博莱霉素、博安霉素及盐酸平阳霉素的混合液，在该色谱条件下素及盐酸平阳霉素的混合液，在该色谱条件下三者均能得到较好分别，见图三者均能得到较好分别，见图8.2。

图图8.2  博莱霉素类抗生素混合溶液博莱霉素类抗生素混合溶液HPLC图谱图谱l8.2.5 特定成分特定成分l   对丝裂霉素中肉桂酰胺、注射用盐酸多柔比对丝裂霉素中肉桂酰胺、注射用盐酸多柔比星及盐酸表柔比星中多柔比星酮特定杂质进展星及盐酸表柔比星中多柔比星酮特定杂质进展控制；增订了注射用盐酸表柔比星中羟苯甲酯控制；增订了注射用盐酸表柔比星中羟苯甲酯检查l8.2.6 降压物质降压物质l   一切种类均收载该项检查，所设定的降压物一切种类均收载该项检查，所设定的降压物质检查项严于临床运用剂量，符合注射剂平安质检查项严于临床运用剂量，符合注射剂平安性检查法运用指点原那么的要求，具有一定的性检查法运用指点原那么的要求，具有一定的平安性l8.2.7 细菌内毒素细菌内毒素  一切种类均收载该项检查一切种类均收载该项检查l8.2.8含量测定含量测定 l  除放线菌素除放线菌素D采用采用UV法外，其他均采用法外，其他均采用HPLC，色谱条件有同有关物质项下的，也可，色谱条件有同有关物质项下的，也可与有关物质不同〔如丝裂霉素〕与有关物质不同〔如丝裂霉素〕l   该类注射用制剂规格较小，故控制含量均匀该类注射用制剂规格较小，故控制含量均匀度，含量测定分别测定度，含量测定分别测定10瓶含量，求平均值即瓶含量，求平均值即得。

得l9、多肽类与肽类抗生素、多肽类与肽类抗生素l     2021年版药典共收载硫酸多粘菌素年版药典共收载硫酸多粘菌素B、、盐酸去甲万古霉素、盐酸万古霉素、替盐酸去甲万古霉素、盐酸万古霉素、替考拉宁及其注射用制剂共考拉宁及其注射用制剂共8个种类，个种类，l    盐酸万古霉素和替考拉宁及其制剂共盐酸万古霉素和替考拉宁及其制剂共4个种类为新增种类，个种类为新增种类，l   盐酸去甲万古霉素那么为我国特有盐酸去甲万古霉素那么为我国特有      项目目            修修订    增增订  删去去鉴别鉴别2 2（（HPLC HPLC 与与TLCTLC二选一）二选一）2 (HPLC)2 (HPLC)2 2（显色）（显色）溶液澄清度与颜色溶液澄清度与颜色2 2/ // /组分与有关物分与有关物质2 22 2/ /残留溶剂残留溶剂1 1/ // /苯丙氨酸苯丙氨酸1 1（原计算公式有误）（原计算公式有误）/ // /炽灼残渣炽灼残渣/ // /1 1热原热原2 2（细菌内毒素）（细菌内毒素）/ // /可见异物和不溶性微粒可见异物和不溶性微粒1 1/ // /重金属重金属/ /1 1/ /硫酸盐硫酸盐/ /1 1（（EDTAEDTA滴定）滴定） / /含量含量1 1/ // / 9.1 9.1 9.1 9.1 增修订工程概略见表增修订工程概略见表增修订工程概略见表增修订工程概略见表9.19.19.19.1 表表表表9.1 20219.1 20219.1 20219.1 2021年版药典多肽类与肽类种类增年版药典多肽类与肽类种类增年版药典多肽类与肽类种类增年版药典多肽类与肽类种类增修订工程修订工程修订工程修订工程l9.2 本类抗生素质量规范要点本类抗生素质量规范要点l    盐酸去甲万古霉素为我国特有种类，其质量盐酸去甲万古霉素为我国特有种类，其质量规范参照盐酸万古霉素并结合本身特点制定，规范参照盐酸万古霉素并结合本身特点制定，l    其他种类国外药典均有收载，增修订后的质其他种类国外药典均有收载，增修订后的质量规范已与国际药典接轨，有的已超越国外药量规范已与国际药典接轨，有的已超越国外药典。

典l9.2.1 鉴别鉴别  l   上述种类均收载了上述种类均收载了HPLC法，原规范收载法，原规范收载TLC法的〔硫酸多黏菌素〕，那么与其并列，法的〔硫酸多黏菌素〕，那么与其并列，可任选一项；可任选一项；l  盐酸万古霉素、替考拉宁同时收载盐酸万古霉素、替考拉宁同时收载IR法；法；l  盐酸去甲万古霉素那么同时采用盐酸去甲万古霉素那么同时采用UV法，专属法，专属性均较强性均较强l9.2.2组分测定与有关物质组分测定与有关物质l9.2.2.1组分测定组分测定 l   上述种类有的纯度较高，如盐酸万古霉素和上述种类有的纯度较高，如盐酸万古霉素和盐酸去甲万古霉素，盐酸去甲万古霉素，l   有的那么为多组分，如替考拉宁和硫酸多黏有的那么为多组分，如替考拉宁和硫酸多黏菌素菌素B，但均采用，但均采用HPLC法控制组分含量，法控制组分含量，l   除硫酸多粘菌素采用等度洗脱外，其他种类除硫酸多粘菌素采用等度洗脱外，其他种类那么采用梯度洗脱法，那么采用梯度洗脱法，l   l  系统适用性实验规定了系统适用性实验规定了l      降解产物与主峰的分别度、降解产物与主峰的分别度、l     主峰保管时间范围、各组分相对保管时间等，主峰保管时间范围、各组分相对保管时间等，确保组分有效分别和检出。

确保组分有效分别和检出l  典型色谱图见图典型色谱图见图9.1、、9.2、、9.3，，l          图图9.1样品万古霉素样品万古霉素B和有关物质检查色谱图和有关物质检查色谱图图图9.2  中检所替考拉宁规范品组分测定的色谱图中检所替考拉宁规范品组分测定的色谱图 图9.3 硫酸多黏菌素B组分测定的典型色谱图 〔色谱柱：shim-pack VP-ODS色谱250×4.6mm；〕 保留时间保留时间 组分组分 15.906min 15.906min 多粘菌素多粘菌素B2B2 17.932min 17.932min 多黏菌素多黏菌素B3B3 26.178min 26.178min 多粘菌素多粘菌素B1-B1-I I 31.996min 31.996min 多粘菌素多粘菌素B1B1l9.2.2.2 有关物质有关物质l    替考拉宁在组分测定中规定其他组分不得大替考拉宁在组分测定中规定其他组分不得大于于5%，未收载有关物质外，，未收载有关物质外，l    其他种类均收载该项检查，色谱条件同组分其他种类均收载该项检查，色谱条件同组分项下，但分列有关物质工程，并添加总杂控制。

项下，但分列有关物质工程，并添加总杂控制l9.2.2.3 特定成分特定成分l9.2.2.3.1替考拉宁中氯化钠替考拉宁中氯化钠  l   本品工艺含氯化钠，含量较低，直接滴定法本品工艺含氯化钠，含量较低，直接滴定法耗费硝酸银滴定液的体积较小，而且铬酸钾指耗费硝酸银滴定液的体积较小，而且铬酸钾指示剂法指示终点突跃时颜色变化比较缓慢示剂法指示终点突跃时颜色变化比较缓慢l    为减小实验误差，采用自动电位滴定法，抑为减小实验误差，采用自动电位滴定法，抑制了终点颜色判别不易掌握的难题，制了终点颜色判别不易掌握的难题，l   l    并采取加量法，即准确预加一定量的氯化钠并采取加量法，即准确预加一定量的氯化钠〔如〔如0.9%氯化钠注射液氯化钠注射液10.0ml〕进展滴定，再〕进展滴定，再以空白对照实验扣减本底测得样品中氯化钠的以空白对照实验扣减本底测得样品中氯化钠的实践含量实践含量l9.2.2.3.2硫酸多黏菌素硫酸多黏菌素B中苯丙氨酸中苯丙氨酸 l     取本品取本品约0.375g，精，精细称定，置称定，置100ml量瓶量瓶中，加中，加0.1 mol/L盐酸溶液溶解并稀酸溶液溶解并稀释至刻度，至刻度，摇匀。

照紫外匀照紫外-可可见分光光度法〔附分光光度法〔附录ⅣA〕，〕，在在264nm(A264)、、258nm(A258)和和252nm(A252)、、 280nm(A280)和和300nm(A300)的波的波优点分点分别测定吸光度定吸光度l按下式按下式计算硫酸多黏菌素算硫酸多黏菌素B中的苯丙氨酸的百中的苯丙氨酸的百分含量〔分含量〔%〕：〕：l    (9.4787/W〕〕(A258－－0.5A252＋＋0.5A264－－1.84A280＋＋0.8A300)l式中式中 W为硫酸多黏菌素硫酸多黏菌素B供供试品的分量品的分量(g)l按枯燥品按枯燥品计算，含苯丙氨酸算，含苯丙氨酸应为9.0％～％～12.0％l9.2.2.3 含量测定含量测定 l    除盐酸去甲万古霉素采用除盐酸去甲万古霉素采用HPLC法外，其他法外，其他均采用微生物效价检定法管碟法均采用微生物效价检定法管碟法。