卡托普利与缬沙坦对兔动脉粥样硬化肾脏的保护作用.pdf

山西医科大学硕士学位论文卡托普利与缬沙坦对兔动脉粥样硬化肾脏的保护作用姓名：尚粉青申请学位级别：硕士专业：心血管内科指导教师：鹿育萨20060519由吾簌辩天掌壤士拳＆建文卡托普利与缬沙坦对兔动脉粥样硬化肾脏的保护作用播要目的建立动脉粥样硬化( a t h e r o s c l e r o s i s ，A S ) 模型，观察在A S 形成时肾脏组织中血管蘩强素l l ( a n g i o t e n s i nl l ，A n gI I ) 、转纯生长毅予一参；( t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r 一§T G F - I B ，) 、纤溶酶原激滔抑制物一l ( p l a s m i n o g e na c t i v a t o ri n h i b i t o r 一1 ，P A I 一1 ) 和Ⅳ型胶原蛋白的表达以殿卡托普利与缬沙坦从不同水平阻断肾素一血管紧张素系统( r e n i n ．a n g i o t o n i ns y s t e m ，R A S ) 后对‘跨曩疰的保护伶瘸方法3 0 只雄毪新疆兰大白兔，随枫分为4 组：商I 嚣饮食爨 O ．0 5 ) 。

高脂饮食组肾脏T G F —B t表达较对照组显著增加( 0 ．4 3 9 ±0 ．0 4 5V S0 ．2 3 l ±0 ．0 1 9 ，P O ．0 5 ) ，高脂饮食加卡托普剥、离鼹饮食加缬沙坦两组肾脏T G F 一§；表达秃显著差异( 0 ．2 4 5 ±0 ，0 6 2V S0 ．2 5 0 ±0 ．0 4 4 ，P = O ．6 9 1 ) 高自嚣俊食缀弩照觏I —l 轰运较对照组显著增翔( 0 ．3 8 9 ±0 ，0 6 5V S0 1 9 6±0 ．0 1 7 ，P O ．0 5 ) ．C o m p a r e dw i t hDg r o u p ．T G F 一1 3 , l e v e lo fr e n a lt i s s u ei nAg r o u pi n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ( 0 ．4 3 9 士0 ．0 4 5v s0 ．2 31 士0 ．0 1 9 ，P 0 ．0 5 ) ( 0 ．2 4 5 土0 ．0 6 2v sO ．2 5 0 土0 ．0 4 4 ，P 2 0 ．6 9 1 ) ．C o m p a r e dw i t hDg r o u p ，P A I 一1l e v e lo fr e n a lt i s s u e i nAg r o u pi n c r e a s e ds i g n i f i c a n t i y ( O ．3 8 9 士0 ．0 6 5v sO ．1 9 6 土0 ．0 1 7 ，P O ．0 5 ) 。

见附表2 ，附图2 )3 免疫组织化学染色结果分析：3 ．1 肾脏组织中^ n g l I 、T G F _ B 1 、P A I _ 1 及Ⅳ型胶原蛋白表达结果：肾脏组织中A n g I I 、T G F ．1 3 I 、P A I ．1 及Ⅳ型胶原均集中表达在肾小球壁层上皮细胞、肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞和间质区域这些区域可见大量棕黄色阳性染色颗粒肾脏A n gl I 表达较D 组显著增加( O ．3 9 1 ±O ．0 4 9v s0 ．2 1 6 ±0 ．0 2 5 ，P 0 ．0 5 ) A 组肾脏T G F 一1 3 l 表达较D 组显著增加( O ．4 3 9 ±O ．0 4 5V SO ．2 3 l ±O0 1 9 ，P O ．0 5 ) ，B 、C 两组肾脏T G F ．B l 表达无显著差异( O ．2 4 5 ±O ．0 6 2V SO ．2 5 0 ±O ．0 4 4 ，P = O ．6 9 1 ) A 组肾脏P A I ．1 表达较D 组显著增加( O ．3 8 9±O ．0 6 5V S0 ．1 9 6 ±0 ．0 1 7 ，P 2 5 0 p g ／m t ) 摔制细胞增殖，促进细胞肥大。

T G F ．B 促遴肾赃细胞增绶的信号转导通路为：( 1 ) 经舆T G F ．多受体傣弓转导通路( S m a d s蛋白通路≥：T G F ．§诱导T G F ．1 3 RI ／T G F ．§RI I 器聚彝形成，募聚蒋袋褥T G F ．1 3 RI I 磷酸纯T G F 一6 RI 的细胞内G S 盒，导致T G F 一1 3 RI 激酶的激潘T G F ．1 3 RI 磷酸化激活转泶因子S m a d s 2 和S m a d s 3 ，磷酸化的S m a d s 2 或S m a d s 3 结合S m a d s 4 形成髯聚体，接者移位到细黪孩中发挥转豢因子致箨爱；( 2 ) R a s - M A P K 通路：在悉菠绥照中，翅T G F 一函处臻螽，缨胞外信号调节激酶( e x t r a c e l l u l a rs i g n a l ．r e g u l a t e dk i n a s e ，E R K ) 在3 0 h 发生磷酸化，且调节激酶阻断剂熊抑制T G F ．D 诱导I 型胶原的袭达，这表明T G F —p 激活R a s ／R a f ／E R K ／M A P K邋鼹添导M s C 增绶。

M A P K 通路激活导致镪胞周期素D 1 基因的激瓣，细照电G l 期进入S 期，弓l 莛缅稳生长、臻臻、分纯T G F ．1 3 抑制M s C 的机制主要是抑制细胞周期而起作用细胞周期滠一系列细胞周期调控援自调控包括细胞周期蛋白( c y c l i n ) 、细胞周期爨自依赖性激酶( c y c l i nd e p e n d e n tk i n a s e ．C D K ) 以及C D K 捧镬裁( C D K - i n h i b i t o r s ，C K I ) T G F 一§可逶遭戳下途径影瀚缨照蹋期：( ”抑制C D K 的合成i 2 i ；( 2 ) 刺激C K I 表达p ’：T G F - B 可使P 2 7 、P 5 7 表达弱黢增强，C K I 与C D K 结合，破坏或抑制了c y c l i n ／C D K 的结合；C K I 还可抑制细胞周期素激活激酶，山西医辩太学磷士攀位论文阻止C D K 2 的笫1 6 0 位及C D K 4 的第17 2 位苏氨酸的磷酸化，使视嘲膜母细胞溜蛋白( r e t i n b l a s t o m ap r o t e i n ．P R B ) 不缝磷酸纯，缨壤不§l 逶过G I ／S 调控点璐终整予G l 嬲。

2 2对细胞外基质( e x t r a c e l t u l a rm a t r i x ，E C M ) 的影响2 ．2 ．1T G F - p 促进E C M 成分的合成国外有学者将T G F ．p 撼闳导入正常小鼠体内后梭测到警脏E C M 懿高合成：状态，进丽发生E C M 积聚T G F ．1 3 司‘德遴l 、j f l 、l V 型胶原、纾维糖连蛋自( f i b r o n e c t i n ，F N ) 及蛋自多貉的合成；搿黧缀反义T G F ．6 l 可撩翻b l s C 合或I V 胶原及F N 等H l T G F 一1 3 促进E C M 合成的主要机制是：( 1 ) 通过胞浆内S m a d s 信号途径、P K C 途径、r a s ／M E K ／E R K 途经贪导葵下游信号奔囊终缀缀织生长瓣子( C o n n e c t i v et i s s u eg r o w t hf a c t o r ，C T G F ) 表达的增强，C T G F 县有直接促进E C M 合成增加作用1 5 髓j 2 ) 通过磷脂酰腻碱一磷脂酶C ( p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ．p h o s p h o l i p a s eC ，P C ．P L C ) 一P K C 途径，促进肝素样内殷生长壤子( h e p a r i nb i n d i n g —e n d o t h e l i ng r o v c t hf a c t o r ，H B ．E G F ) 黪合成与狂放，H B —E G F 馋鼹予箕受薅E G F R ( E G Fr e c e p t o r ) ，通过E R K 、P 3 8 ／M A P K 途经介导} N 等合成[ 7 1 ；( 3 ) P 3 8 ／M A P K途径：T G F ．1 3 邋过P 3 8 ／M A P K 通路刺激I 烈前胶原al 的合成峭J ：( 4 ) 作为细胞因子网络中的～员，T G F ．B 含量及活性的改变必将影响到其他因子如成纤维母细胞生长因子、臼介素．6 麓在舔肉弱表运，并逶遭螽嚣霾搂发簿餐E e Ⅺ合成豹季筝蠲。

2 ，2 ．2T G F ．1 3 抑制E C M 降解在撼质降解过程中起主要作用的为基质金瘸嚣自酶( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e ，M M P s ) 和纤溶酶M M P s 为～组含有金麟离子的中性黉白酶，以熬爨形式台成与分泌，被纾溶酶或骜震滚鳐酶所活化，发挥降勰鞋C 艇静作雳嚣金属蛋囱酶组织抑制荆( t i s s u ei n h i b i t o r so f M M P s ，T l M P s ) 可与之结合，抑制其活性T G F ．6 抑制E C M 降解可能是通过以下途径完成：①一些M M P s 基因的启动子区域含有T G F ．B 抑制作用元件，T G F ．§与其结合届可减少M M P sm R N A 的转录；同时T G F ．1 3 可键遂T I M P s 熬合成，驮磊簸坏M M P s r F I M P s 之闻静乎衡，撩隶l 胶灏豹晦簿，程遂纾维纯形成；②纤溶酶原激活剂( p l a s m i n o g e na c t i v a t o r ，P A ) 为M M P s 重要的满化调节因子，T G F ．1 3增加时，P A 活性下降，而纤溶酶原激活剂抑制物( i n h i b i t o ro fP A ，P A I ) 合成增加一J ，从霹孪f | j 裁了ⅪM P s 魏活拖。

2 ．2 ．3T G F ．p 促进细胞合成整合素( i n t e g r i n )研究表明T G F - p 可以刺激M s C 整合豢a1 、a3 、n5 、d6 、d8 及01m R N A 及其蛋白质的表达㈣【1 l l 整合素是具有跨膜蛋白结构的蛋白艨家族，由o 、§两条戢链缀成，每条肽链各有若干势不同亚型，不褥的亚荦佼缝合赋予熬台紊不同静镰台特往整合素可醴作为簸骤蛋自、F N 、层糙连蛋巍等的受钵，介导细胞与纂质及细胞问的粘连吸附，在E C M 的聚集和沉积中超重要作用2 3T G F ．6 的促细胞猢亡作用近袈研究表明，’F G F ．1 3 可以刺激肾小球内戍细胞f 1 2 l 、M s C l 珏l 、是绥熬及餐远麴枣蛰淘皮缀蕤等U 4 1 发生璃亡蒺穰割霹巍怒：( 1 ) T G F ．彝驻逶是缁胞、肾近曲小管内皮细胞凋亡可能是通过S m a d s 途径，S m a d 7 通过诱导核转录因子( n u c l e a rf a c t o r ．k B , N F —k B ) 抑制因子l k B 的表达来下调N F ．k B 的活性；也可以通过山西鞋辞穴攀鞲士学位论文P 3 8 ／M A P K 途径；( 2 ) T G F 一6 促进M s C 搁亡机制：①通过肌酸激酶一2 ( c a s e i nk i n a s e2。