粪便基因组DNA提取试剂盒说明书.docx

磁珠法粪便基因组DNA提取试剂盒(常规版)MagBeads Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version)【目录号】FDE-5005、FDE-5030【运输条件】2~25°C；【保存条件】磁珠悬浮液、裂解液2 2~8C,蛋白酶K-20C，其它组分室温;试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成FDE-5005 (50T)FDE-5030 (300T)FDE Mag netic Beads磁珠悬浮液5mL25mLFDE Buffer 1裂解液150mL300mLFDE Buffer 2裂解液212.5mL75mLProte in ase K soluti on蛋白酶K溶液1mL6mLWash Buffer 清洗液30mL180mLElute Buffer 洗脱液5mL30mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2•使用前请检查裂解液1/2中是否出现结晶，如有结晶请将置于于37 C环境中重新溶解3. 蛋白酶K长期不使用，请置于-20C保存，融化后4C保存，并尽快使用；4. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南建议操作。

产品简介】本试剂盒适用于从各种固态或液态粪便样本中分离纯化基因组DNA试剂盒采用具有 独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极 强的富集能力，当条件改变时，磁珠会释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的 目的方法简便、快捷、质量稳定提取所得基因组DNA产物，纯度优良，可应用于酶切、 PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等各种下游分子 生物学实验本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪实现自动化操作 【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围固态粪便200mg5~40pg液态粪便200|jL1~20pg【自备试剂】异丙醇、80% 乙醇、RNase A 溶液（100mg/mL,分散液 10mM Tris-HCI, 1mM EDTA, pH 值8.0）自备仪器&耗材】 仪器自动版：涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅、96孔方孔圆底板、英芮诚ETP-300核酸提取仪、磁棒套手动版：涡旋混合仪、高速离心机、EP管、EP管用磁力架 【仪器自动版操作步骤】以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。

1． 96孔板加液参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂样本位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液75pL异丙醇400pL清洗液600pL80%乙醇600pL80%乙醇600pL洗脱液100pL注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀2；）为提高效率建议使用排枪进行加液操作2．样本裂解1）取约200mg固态粪便样本或约200|jL液态粪便样本，置于EP管中，依次加入1mL 裂解液1和20pL蛋白酶K，涡旋振荡1min （须将管底粪便充分振荡起来），然后置 于58°C环境中裂解30min，每隔5min颠倒混匀一次；注：如需去除请额外加入5“LRNase A溶液2） 裂解完毕，室温、12,000rpm离心5min,转移400pL上清液至新的EP管内；3） 向新的EP管中加入250pL裂解液2,上下颠倒5次混合均匀，室温、12,000rpm 离心 5min 后待用3．上机提取从步骤2裂解完毕样本中吸取450pL上清液至加液完毕的96孔板第2/8列孔位中，将96 孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套，运行仪器操作软件，调用“粪便 核酸提取”程序并执行粪便核酸提取”程序参数设置如下，如仪器程序参数与说明书不一致，请以说明书为准：步骤编号孔位运行类型振荡时间（秒）分离时间（秒）挥发时间（秒）振荡幅度振荡强度一组温度（°C）二组温度三组温度四组温度（C）11磁珠转移11002弱000022DNA结合120004强000032DNA结合4001504弱000043清洗12501005强000054清洗22801005强000065清洗2240103005强000076洗脱5002002强6060606083—弃磁珠—15005强00004．核酸转移程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完 毕，此时可弃去96孔板。

手动版操作步骤】1．样本裂解参照【仪器自动版操作步骤】中步骤2进行操作2．核酸结合向裂解完毕的EP管中按照等体积加入异丙醇和75pL磁珠悬浮液，颠倒混匀后高速 涡旋振荡10min，然后静置2min3．磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如果EP管内盖有液体，可保持EP 管在磁力架上，整体上下颠倒 2~3 次，使磁珠完全被磁力架吸附保持 EP 管固定于 磁力架上，用移液枪完全弃去上清液，期间避免接触磁珠4．清洗1） 向EP管中加入600pL清洗液，将EP管从磁力架上取下，剧烈摇动使磁珠充分分 散，涡旋震荡 1min 后，参照步骤 3进行磁性分离2） 使用600pL 80%乙醇，参照上述步骤4（2）操作2次5．除醇将除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45°C真空干燥箱中，干燥 约10mi n至无明显乙醇味注：若无真空干燥箱，亦可在保持通风橱通风或电风扇的状态下静置踰口，具体时间根据气温 变化可能需要适当调整，以磁珠干燥完全为原则6．核酸洗脱取出EP管，加入lOOpL洗脱液（或去离子水），移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀， 将EP管置于65 C环境中加热洗脱5mi n,然后涡旋洗脱2mi n。

7．核酸转移将EP管置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP 管中，操作过程完成，此时可以弃去磁珠版权声明： © 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南所有权利版本： V201703.051。