免疫学检验-5-凝集反应课件.ppt

如何鉴定如何鉴定ABO血型？血型？nABO血型的确认原则是什么？血型的确认原则是什么？n如何鉴定如何鉴定RBC上的血型抗原或血清中的血上的血型抗原或血清中的血型抗体类型型抗体类型？p采用采用凝集反应凝集反应第五章 凝集反应 （agglutinationagglutination）一、定义一、定义 颗颗粒粒性性抗抗原原（或或可可溶溶性性抗抗原原与与载载体体颗颗粒粒结结合合成成致致敏敏颗颗粒粒后后）与与相相应应抗抗体体发发生生特特异异性性反反应应，在在适适当当电电解解质质存存在在下下，形形成成肉肉眼眼可可见见的的凝集块凝集块第一节凝集反应概述第一节凝集反应概述二、发生机制二、发生机制分两阶段进行分两阶段进行特异性结合特异性结合阶段阶段抗原与相应抗体发生特异性结合抗原与相应抗体发生特异性结合速度快，不可见速度快，不可见可见可见反应阶段出现肉眼可见反应阶段出现肉眼可见特异性凝集特异性凝集抗原抗体复合物进一步交联聚集所致抗原抗体复合物进一步交联聚集所致受到多种因素的影响受到多种因素的影响二、发生机制二、发生机制分两阶段进行分两阶段进行特异性结合特异性结合阶段阶段抗原与相应抗体发生特异性结合抗原与相应抗体发生特异性结合。

速度快，不可见速度快，不可见可见可见反应阶段出现肉眼可见反应阶段出现肉眼可见特异性凝集特异性凝集抗原抗体复合物进一步交联聚集所致抗原抗体复合物进一步交联聚集所致受到多种因素的影响受到多种因素的影响三、影响因素三、影响因素抗原因素：抗原因素：颗粒性抗原颗粒性抗原抗原表位数目等抗原表位数目等抗体因素：抗体因素：来源（来源（多克隆抗体多克隆抗体）、亲和力、效价（含量）等亲和力、效价（含量）等IgM的凝集作用的凝集作用IgG不完全抗体不完全抗体：与相应抗原结合，但不形成可见的凝集现象与相应抗原结合，但不形成可见的凝集现象主要为主要为小分子的小分子的IgG类抗体三、影响因素三、影响因素环境因素：环境因素：电解质（生理盐水）电解质（生理盐水）酸碱度：避免酸凝集酸碱度：避免酸凝集温度：温度：37抗原与抗体的适当比例抗原与抗体的适当比例易出现易出现抗体过量前带抑制抗体过量前带抑制四、凝集反应的应用四、凝集反应的应用抗原（抗原（AgAg）或抗体（或抗体（AbAb）的）的定性定性检测检测未知未知AgAg（或（或AbAb）已知已知AbAb（或（或AgAg）是否出现凝集是否出现凝集若若出现出现凝集，则表明凝集，则表明有有相应相应AgAg（或（或AbAb）存在存在；若若不出现不出现凝集，则表明凝集，则表明无无相应相应AgAg（或（或AbAb）存在存在。

抗体的抗体的半定量半定量检测检测将待检标本（未知将待检标本（未知AbAb）作一系列倍比稀释后加入定量抗原作一系列倍比稀释后加入定量抗原（已知（已知AgAg）进行反应，以进行反应，以出现凝集反应的最高稀释度出现凝集反应的最高稀释度作为作为AbAb的效价或滴度的效价或滴度应用凝集反应进行检测，在判定结果时应用凝集反应进行检测，在判定结果时需考虑：需考虑：影响因素影响因素存在时会干扰凝集的出现：若抗原与抗体存在时会干扰凝集的出现：若抗原与抗体相对应，但因受多种因素影响而不出现特异性凝集相对应，但因受多种因素影响而不出现特异性凝集可导致可导致假阴性假阴性结果非特异性凝集非特异性凝集可干扰结果的判断：若抗原与抗体并可干扰结果的判断：若抗原与抗体并不对应，但存在非特异性凝集可导致不对应，但存在非特异性凝集可导致假阳性假阳性结果凝集反应和沉淀反应的不同点凝集反应和沉淀反应的不同点不同点不同点凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应抗原性质抗原性质 颗粒性颗粒性或可溶性抗或可溶性抗原致敏颗粒，呈颗原致敏颗粒，呈颗粒粒悬液悬液可溶性可溶性，大多呈，大多呈透明透明胶状溶液胶状溶液反应时间反应时间 几分钟至十几分钟几分钟至十几分钟数小时至数天数小时至数天稀释对象稀释对象 稀释稀释抗体抗体稀释稀释抗原抗原观察现象观察现象 凝集块凝集块，液体变清，液体变清沉淀物沉淀物五、凝集反应的类型五、凝集反应的类型直接凝集反应。

直接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应其他其他凝集凝集技术技术第二节第二节 直接凝集反应直接凝集反应（direct agglutination test）定义：定义：颗粒性抗原颗粒性抗原+相应抗体相应抗体 肉眼可见凝集块肉眼可见凝集块（细菌，（细菌，RBC等）等）参与反应的抗原称为：参与反应的抗原称为：凝集原凝集原（agglutinogen）；抗体称为抗体称为：凝集素凝集素（agglutinin）NSNSNSNS第二节第二节 直接凝集反应直接凝集反应（direct agglutination test）常用方法常用方法：玻片法玻片法试管法试管法微量血凝反应板法微量血凝反应板法一、玻片凝集试验一、玻片凝集试验（slideagglutination test）定性定性试验，常用试验，常用已知已知AbAb测定测定未知未知AgAg(待检样本待检样本)结果判读：结果判读：已知已知Ab Ab 未知未知Ag Ag 凝集，阳性凝集，阳性(+)(+)不凝集，阴性不凝集，阴性(-)(-)方法评价：方法评价：特异性强，特异性强，简便、快速；敏感度稍简便、快速；敏感度稍低低应用：应用：ABOABO血型鉴定；血型鉴定；细菌的鉴别与分型。

细菌的鉴别与分型抗抗 A抗抗 B1.已知标准血清已知标准血清（已知抗体）（已知抗体）2.受检者受检者5%RBC悬液悬液（未知抗原）（未知抗原）3.结果判断：结果判断：不不凝集凝集4.根据有无凝集现象来判断血型根据有无凝集现象来判断血型 凝集凝集ABO血型的鉴定血型的鉴定ABOABO血型鉴定结果示意图血型鉴定结果示意图抗抗A标准血清标准血清抗抗B标准血清标准血清抗抗A标准血清标准血清抗抗B标准血清标准血清抗抗A标准血清标准血清抗抗B标准血清标准血清抗抗A标准血清标准血清抗抗B标准血清标准血清血型判断：血型判断：B型型血型判断：血型判断：O型型血型判断：血型判断：AB型型血型判断：血型判断：A型型某检验人员在实际工作中，出现了某检验人员在实际工作中，出现了ABOABO血型的定型错误血型的定型错误请你分析造成此错误的可能原因有哪些？请你分析造成此错误的可能原因有哪些？技术问题：技术问题：责任心不强，未按要求操作；责任心不强，未按要求操作；ABOABO标准血清质量不高：效价太低、亲和力不强，误判为阴性反应；标准血清质量不高：效价太低、亲和力不强，误判为阴性反应；红细胞浓度过淡或过浓：导致抗原抗体比例不适当，误判为阴性反应；红细胞浓度过淡或过浓：导致抗原抗体比例不适当，误判为阴性反应；各种原因引起的红细胞溶解（溶血），误判为阴性反应；各种原因引起的红细胞溶解（溶血），误判为阴性反应；操作器材不洁，红细胞被细菌污染，红细胞自凝（冷凝集）、假凝集及操作器材不洁，红细胞被细菌污染，红细胞自凝（冷凝集）、假凝集及细菌性凝集等干扰了结果的判断，可出现假阳性。

细菌性凝集等干扰了结果的判断，可出现假阳性如何避免？如何避免？爱岗敬业，规范操作，试剂避免细菌污染爱岗敬业，规范操作，试剂避免细菌污染所用器材必须干燥清洁、防止溶血所用器材必须干燥清洁、防止溶血设置对照：阳性对照、阴性对照、自身对照等设置对照：阳性对照、阴性对照、自身对照等某检验人员在实际工作中，出现了某检验人员在实际工作中，出现了ABOABO血型的定型错血型的定型错误请你分析造成此错误的可能原因有哪些？误请你分析造成此错误的可能原因有哪些？被检被检RBCRBC问题：问题：受检者红细胞上抗原位点过少，如亚型；或白血病、恶受检者红细胞上抗原位点过少，如亚型；或白血病、恶性肿瘤等导致抗原减弱，弱凝集，误判为阴性反应性肿瘤等导致抗原减弱，弱凝集，误判为阴性反应由于细菌感染使红细胞出现获得性类由于细菌感染使红细胞出现获得性类B B抗原，易误判为抗原，易误判为阳性如何避免？如何避免？用已知血型的标准红细胞检查用已知血型的标准红细胞检查待检血清中未知的抗体待检血清中未知的抗体通常采用通常采用试管法试管法细菌的鉴别用已知细菌诊断血清检测待检细菌方法：轻摇玻片，12分钟后观察结果判定：右侧为阴性对照，不凝集时结果有效若左侧出现凝集块为阳性，反之为阴性根据左侧是否出现凝集来判断待检菌的种类NS待检菌诊断血清NS待检菌二、试管凝集试验二、试管凝集试验(tube agglutination test)试管法试管法：半半定定量量试验。

试验常用常用已知已知AgAg，测测定定未知未知 AbAb(待检血清待检血清)方法评价：方法评价：特异性易受影响；特异性易受影响；敏感性不高敏感性不高应用：应用：多用以测定多用以测定抗体的含量抗体的含量（效价、滴度效价、滴度）肥达氏反应肥达氏反应、外斐氏反应外斐氏反应、交叉配血试验交叉配血试验0.50.50.50.50.50.5 0.50.50.50.5弃掉弃掉0.50.5 试管凝集试验原理结结果果 1 2 3 4 5 6 7菌液菌液结果观察：结果观察：观察管底是否有凝集现象观察管底是否有凝集现象完全凝集（）完全凝集（）：凝集块完全沉于管底，液体澄清凝集块完全沉于管底，液体澄清75%75%凝集（）凝集（）：凝集块沉于管底，液体稍混凝集块沉于管底，液体稍混50%50%凝集（）凝集（）：凝集块沉于管底，液体混浊凝集块沉于管底，液体混浊以上结果均为以上结果均为阳性阳性，均出现，均出现肉眼明显可见的凝集肉眼明显可见的凝集25%25%凝集（弱阳性）凝集（弱阳性）：液体混浊液体混浊阴性：阴性：无变化结果判读：结果判读：以产生以产生明显凝集明显凝集现象（现象（“”）的的最最高稀释度高稀释度作为作为AbAb的效价（含量）。

的效价（含量）第三节第三节 间接凝集反应间接凝集反应(indirect agglutination test)(indirect agglutination test)一、载体种类一、载体种类二、间接凝集反应类型二、间接凝集反应类型三、间接血凝试验三、间接血凝试验四、胶乳凝集试验四、胶乳凝集试验五、间接凝集试验的应用五、间接凝集试验的应用 间接凝集试验：间接凝集试验：用人工方法将可溶性抗原用人工方法将可溶性抗原(或或 抗体）抗体）吸附或偶联于载体吸附或偶联于载体上，使之成为上，使之成为致敏致敏 载体颗粒载体颗粒，再与相应抗体（或抗原）作用，再与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质的参与下，出现的凝集现象在适宜电解质的参与下，出现的凝集现象优点：优点：敏感度比直接凝集反应敏感度比直接凝集反应高高 2 28 8倍倍，亦明亦明显高于沉淀反应显高于沉淀反应间接凝集反应间接凝集反应（indirect agglutination test）可溶性抗原可溶性抗原+载体颗粒载体颗粒致敏颗粒致敏颗粒+相相应应抗体抗体凝集凝集块块（RBCRBC、胶乳、胶乳颗颗粒等）粒等）载体可溶性抗原致敏致敏NSNS致敏颗粒凝集载体载体(carrier):(carrier):试验体系中试验体系中与免疫无关与免疫无关的颗粒。

的颗粒对载体的要求：对载体的要求：不溶于水，在不溶于水，在NSNS中性质稳定，无化学、血清学活性中性质稳定，无化学、血清学活性大小均一，短时间内不致下沉大小均一，短时间内不致下沉能够直接吸附或偶联抗原或抗体，且不影响其活性能够直接吸附或偶联抗原或抗体，且不影响其活性致敏：致敏：抗原抗原(或抗体或抗体)偶联于颗粒表面的过程偶联于颗粒表面的过程致敏颗粒致敏颗粒（sensitized particle):吸附有已知抗吸附有已知抗 原或抗体的颗粒原或抗体的颗粒载体载体可溶性抗原可溶性抗原致敏致敏致致敏敏颗颗粒粒NSNS凝凝集集颗颗粒粒 间接凝集试验示意图间接凝集试验示意图 一、常用载体种类一、常用载体种类红细胞：红细胞：新鲜红细胞吸附蛋白质的能。