甘草总黄酮的提取.doc

甘草总黄酮的提取工艺研究摘要：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草总黄酮类化合物最佳提取工艺方法：选取乙醇浓度、提取时间、温度、料液比个主要影响因素，采用正交法，以甘草总黄酮类化合物得率作为检测指标结果：应用酸溶碱沉法获得甘草总黄酮类化合物的最佳提取工艺是：75%的乙醇，提取2h，酸沉PH为2.5，液料比为20:1结论：该方法提取率高，稳定性好，操作简便，适合工业化生产关键词：甘草 甘草总黄酮 正交设计 提取工艺甘草为双子叶植物豆科甘草，胀果甘草， 或光果甘草的根及根茎始载于《神农本草经》，列为上品甘草性平，味甘，归十二经有解毒、祛痰、止痛、解痉以至抗癌等药理作用在中医上，甘草补脾益气，滋咳润肺，缓急解毒，调和百药临床应用分“生用”与“蜜炙”之别生用主治咽喉肿痛，痛疽疮疡，胃肠道溃疡以及解药毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能减退，大便溏薄，乏力发热以及咳嗽、心悸等甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源[1]甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强心血管功能、增强免疫力等作用[2-5]因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。

为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件1、仪器与试药1.1仪器:烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH24数显恒温水浴锅、分析天平、AB1042N电子天平、布氏漏斗、SHZ2C型循环水多用真空泵1.2试剂:甘草，市售;试剂:蒸馏水、氢氧化钠、盐酸2、方法与结果在利用碱溶酸沉法从甘草中获得甘草总黄酮的过程中，我们通过预试验发现影响提取得率的主要因素为乙醇浓度、提取时间、温度、料液比故选择乙醇浓度(A)、提取时间(B)、酸沉pH值(C)、料液比(D)作为考察的四个因素，各取三个水平(见表1)，以甘草总黄酮得率(%)为考察指标提取工艺与试验结果、方差分析和验证试验结果依次见表2、表3、和表42.1正交试验设计2.1.1正交因素水平设计 采用碱溶酸沉法进行提取，选择乙醇浓度、提取时间、酸沉PH值、料液比四个因素，每个因素选择三个水平，设计正交试验因素水平表(见表1)表1 正交因素水平设计表Table1 Orthogonal design factor level table水平因素A乙醇浓度(%)B提取时间(h)C酸沉PH值D液料比1651.53.0152752.02.5203852.52.0252.1.2正交试验设计结果分别取药材10g，按上述L9(34)正交表方案进行试验，以最后甘草总黄酮得率为指标进行分析，结果见表2，方差分析见表3。

表2 正交试验设计及结果Table2 Orthogonal test design and results实验号因素结果ABCD11.00001.00001.00001.00002.3121.00002.00002.00002.00002.4131.00003.00003.00003.00002.4242.00001.00002.00003.00002.4452.00002.00003.00001.00002.5362.00003.00001.00002.00002.4573.00001.00003.00002.00002.4183.00002.00001.00003.00002.3593.00003.00002.00001.00002.36K17.14007.16007.11007.2000K27.42007.29007.21007.2700K37.12007.23007.36007.2100R0.30000.13000.25000.0700SS0.01880.00280.01060.0010表3 方差分析表Table3 Analysis of Variance Table方差来源离差平方和SS自由度f均方SF值显著性PA0.01882.00000.009419.6279P<0.05B0.00282.00000.00142.9535P>0.05C0.01062.00000.005311.0465P>0.05D0.00102.00000.00051.0000P>0.052.13 结果分析由直观分析可知，利用水提醇沉法提取甘草总黄酮的过程中，影响提取效果的因素顺序为：乙醇浓度＞酸沉PH值＞提取时间＞液料比，以乙醇浓度影响最大，为主要因素，其它为次要因素。

考虑到继续增加乙醇浓度和延长提取降低酸沉PH对结果影响较小，从工业生产节约能源、费用，省时考虑，确定利用碱溶酸沉法提取甘草总黄酮的最佳提取工艺为A2B2C2D2，即75%的乙醇，提取2h，酸沉PH为2.5，液料比为20:12.2 工艺流程甘草药材 75%乙醇加热回流提取，过滤滤 液加Ca(OH)2水溶液，分液，下层液加HCL溶液调制PH为2.5，过滤沉 淀 45℃下常温干燥 总黄酮该工艺生产路线短、操作简单、生产成本低，提取率高，实现了甘草的资源的开发利用，同时探索出适合工业化生产的方法，为中药有效成分的提取开发奠定了基础3、小结与讨论经实验发现，①当用碱溶酸沉法提取甘草总黄酮时，乙醇浓度是影响甘草总黄酮得率的主要因素增大乙醇浓度能提高甘草总黄酮提取量，但当甘草总黄酮提取趋近于完全时，继续增大乙醇用量并不能使得率有明显提高并且加乙醇过多会使后期加酸碱量增加，增大了工作量和能耗，降低了工业生产效率②在实验过程中，降低酸沉PH能使沉淀更充分，但是酸度增加并未显著增加甘草总黄酮的量提取酸沉PH的降低，增加了资源浪费，降低了工业生产效率③提取时间对甘草总黄酮的量也有影响，增加提取时间能使提取更充分，但是延长时间并未显著增加甘草总黄酮的量。

提取时间的延长，增加了工厂能耗，降低了工业生产效率所以从工业上降低成本、节约能源和时间的角度考虑，确定利用碱溶酸沉法提取甘草总黄酮的最佳工艺为：75%的乙醇，提取2h，酸沉PH为2.5，液料比为20:1参考文献[1] 王晓荣.榆林地区甘草资源的开发与利用[J].资源开发与市场,2003,19(6):402,414.[2] 刑国秀,李楠,王童,等.甘草中黄酮类化学成分的研究进展[J].中国中药杂志,2003,28(7):593-597.[3] 傅乃武,刘朝阳,张如意等.甘草黄酮类和三萜类化合物抗氧化作用的研究[J].中药药理与临床,1994,(5):26.[4] 句海松,忻文娟,李小洁等.甘草类黄酮对脂质过氧化和活性氧自由基的作用[J].药学学报,1989,24(11):807-812.[5] PAULA A BEL INKY,MICHAEL AVIRAM,SAEED MAHMOOD,et al.Structural aspects of the inhibltory effect of Glabridin on LDL oxidation[J].Free Radical Biology &Medicine,1998,24(9):1419-1429.。