化妆品中甲醛的检测方法国食药监许[2022年]96号附件.docx

附件 2：扮装品中甲醛的检测方法1 范围本方法规定了承受柱前衍生化液相色谱 -紫外检测法测定扮装品中甲醛〔CAS ：50-00-0〕的方法本方法适用于扮装品中甲醛含量的测定2 方法提要NO 2NO 2甲醛测定承受柱前衍生化法，甲醛与 2,4-二硝基苯肼反响生成黄色的 2，4- 二硝基苯腙〔见图 1〕，经高效液相色谱分别，紫外检测器在 355 nm 波长下检测，依据保存时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量本方法对甲醛的检出限为 0.01 µg，定量下限为 0.052 µg取 0.2 g 样品时，本方法对甲醛的检出浓度为 0.001%，最低定量浓度为 0.0052%O2NNHNH 2C6H6N4O4 198.14+ HCHOO2NNHN CH 2 C7H6N4O4210.15图 1 甲醛衍生化反响式3 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为试验室用一级水3.1 甲醛标准物质水溶液3.2 2,4-二硝基苯肼，纯度 ≥ 99.0%3.3 三氯甲烷，色谱纯，含量 ≥ 99.9%3.4 盐酸( 20 =1.19 g/mL)3.5 氢氧化钠3.6 磷酸氢二钠〔Na2HPO4•12H2O〕。

3.7 磷酸二氢钠〔NaH2PO4•2H2O〕3.8 乙腈，色谱纯3.9 甲醇，色谱纯3.10 去离子水3.11 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取 2，4-二硝基苯肼〔3.2〕 0.20 g，置于锥形瓶中，先加浓盐酸〔3.4〕40 mL 使溶解，必要时可超声助溶，再加去离子水〔3.10〕60 mL，摇匀，即得3.12 氢氧化钠溶液[c〔NaOH〕= 1 mol/L]：称取NaOH〔3.5〕10 g，加水适量溶解后，转移到 250 mL 量瓶中，用去离子水〔3.10〕稀释并定容至刻度，摇匀， 即得4 2 4 23.13 磷酸缓冲溶液[c〔PO 3-〕0.5 mol/L]：周密称定NaH PO •2H O〔3.7〕2.28 g和 Na2HPO4•12H2O〔3.6〕12.67 g，加水适量溶解后，转移到100 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得3.14 乙腈水溶液〔9+1〕：量取乙腈〔3.8〕180 mL，置锥形瓶中，加水 20 mL，摇匀，即得3.15 甲醛系列标准溶液：周密量取适量甲醛标准物质水溶液〔3.1〕置于 10 mL 量瓶中，加乙腈水溶液〔3.14〕稀释至刻度，摇匀，得质量浓度约为1.04 mg/mL 的甲醛贮存液，然后依据表 1 进展标准溶液的配制。

表 1 甲醛系列标准溶液配制 1〕工作溶液溶液初始浓度量取体积定容终体积标准工作溶液终浓度贮存溶液10.4 mg/mL1 mL10 mL1.04 mg/mL标准溶液 11.04 mg/mL2.5 mL10 mL260 μg/mL标准溶液 21.04 mg/mL2 mL10 mL208 μg/mL标准溶液 31.04 mg/mL1 mL10 mL104 μg/mL标准溶液 4104 μg/mL5 mL10 mL52.0 μg/mL标准溶液 5104 μg/mL1 mL10 mL10.4 μg/mL标准溶液 610.4 μg/mL5 mL10 mL5.2 μg/mL注 1〕：甲醛贮存溶液的初始浓度应以甲醛准物质水溶液的标示量计算4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器4.2 分析天平：感量 0.001 g4.3 超声波清洗仪4.4 离心机4.5 周密吸量管或周密移液器4.6 涡旋振荡器5 分析步骤5.1 样品预处理称取扮装品样品 0.20 g〔准确至 0.001 g〕，置具塞刻度管中，加乙腈水溶液〔3.14〕至 2 mL，涡旋 2 min，使混匀，以 5000 rpm 转速离心 5 min，周密量取上清液 1 mL 置 5 mL 离心管中，加水 2 mL，涡旋 30 s，必要时以 5000 rpm 转速离心 5 min，周密量取上清液1 mL 置 10 mL 离心管中，加2，4-二硝基苯肼盐酸溶液〔3.11〕0.4 mL，涡旋 1 min，静置 2 min，加磷酸缓冲液〔3.13〕0.4 mL， 再加氢氧化钠溶液〔3.12〕约 1.9 mL 调至中性，涡旋 10 s，然后参与 4 mL 三氯甲烷〔3.3〕，涡旋 3 min，以 5000 rpm 转速离心 10 min，取三氯甲烷层溶液 1 mL置离心管中，以 5000 rpm 转速离心 10 min，取三氯甲烷层溶液，作为色谱分析待测液，备用。

5.2 色谱参考条件色谱柱：C18 色谱柱〔250 × 4.6 mm，5 μm〕；流淌相：甲醇+水〔60+40〕；流速：1.0 mL/min； 柱温：25 ℃；检测波长：355 nm； 进样体积：10 µ L； 运行时间：25 min5.3 甲醛标准曲线待测溶液的制备周密量取5.2 μg/mL、10.4 μg/mL、52 μg/mL、104 μg/mL、208 μg/mL、260 μg/mL 系列标准工作溶液各 1 mL 置 5 mL 离心管中，加水 2 mL，涡旋 30 s，必要时以5000 rpm 转速离心 5 min，然后周密量取上清液 1 mL 置 10 mL 离心管中，加 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液〔3.11〕0.4 mL，涡旋 1 min，静置 2 min，加磷酸缓冲液〔3.13〕0.4 mL，再加氢氧化钠溶液〔3.12〕约 1.9 mL 调至中性，涡旋 10 s，然后周密参与 4 mL 三氯甲烷〔3.3〕，涡旋 3 min，以 5000 rpm 转速离心 10 min，取三氯甲烷层溶液 1 mL 置离心管中，以 5000 rpm 转速离心 10 min，取三氯甲烷层，作为色谱分析待测液，备用。

5.4 测定在“5.2”项色谱条件下，取“5.3”项下处理得到的标准曲线待测溶液分别进样， 进展液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，甲醛衍生物 2，4-二硝基苯腙的峰面积为纵坐标，进展线性回归，建立标准曲线，得到回归方程取 “5.1” 项下处理得到的待测溶液进样 10 μL，依据测定的甲醛衍生物 2，4-二硝基苯腙的峰面积，代入标准曲线计算游离甲醛的质量浓度按“7 计算”，计算样品中游离甲醛的含量6 平行试验按以上步骤操作，对同一样品独立进展测定获得的两次独立测试结果确实定差值不得超过算术平均值的 10%7 计算w〔游离甲醛〕= rVm ´1000´100式中：w〔游离甲醛〕——扮装品中游离甲醛的含量，%；m ——样品取样量，g；r ——代入标准曲线计算得到的样品待测液中甲醛的质量浓度，mg /mL；V ——样品定容体积，本方法为 2 mL8 回收率和周密度多家试验室验证的平均回收率为 99.9% - 104%，相对标准偏差小于 7%〔n=6〕9 色谱图7.3095000090000085000080000075000070000065000060000055000050000045000040000035000030000025000020230015000010000050000016.7401.66 2.722 44.75 6.6769.4710.6912.57810121415.091617.94 20.72 22.36 23.6518202224Time (min)RT: 0.00 - 24.99NL: 9.70E5Channel A UV 100319008U Au甲醛标准溶液衍生化反响后的高效液相色谱图色谱峰：甲醛衍生物〔2，4-二硝基苯腙〕〔TR=16.7 min〕。