无菌技术、倒平板操作、平板划线操作、稀释操作、涂布平板操作.docx

无菌技术、倒平板操作、平板划线操作、稀释操作、涂布平板操作无菌技术:主要包括1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒;2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行;4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触倒平板操作:1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰;3、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10,20ml)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀4、等待平板冷却凝固(大约需5,10min)后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上平板划线操作:1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红;2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞;3、将试管口通过火焰;4、将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液;5、将试管口通过火焰，并塞上棉塞;6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。

重复以上操作，在三区域内划线注意不要将最后一区域的划线与第一区相连8、将平板倒置，放入培养箱中培养稀释操作:1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10?,10的6次方（打不出六次方来）的顺序编号2、用移液管吸取1ml培养的菌液，注入10?倍稀释的试管中用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀3、从10?倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入10?倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作依次类推，直达完成最后一支试管的稀释注:移液管需要经过灭菌操作时，试管口和移液管应在离火焰的1,2cm处涂布平板操作:1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中;2、取少量菌液（不超过0.1ml），滴加到培养基表面;3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8,10s;4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面涂布时可转动培养皿，使涂布均匀注意:1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃2、操作中一定要注意防火〜不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。