临床免疫检验实验课件：金免疫测定技术.ppt

金免疫技术金免疫技术 金免疫技术金免疫技术uu金免疫技术：利用金免疫技术：利用金免疫技术：利用金免疫技术：利用胶体金胶体金胶体金胶体金颗粒标记抗体或抗原，颗粒标记抗体或抗原，颗粒标记抗体或抗原，颗粒标记抗体或抗原，以检测未知抗原或抗体的方法以检测未知抗原或抗体的方法以检测未知抗原或抗体的方法以检测未知抗原或抗体的方法uu胶体金：金盐（胶体金：金盐（胶体金：金盐（胶体金：金盐（HAuClHAuCl4 4）被）被）被）被还原还原还原还原成金原子后形成金原子后形成金原子后形成金原子后形成的金颗粒悬液，因呈稳定的胶体状态，故称为成的金颗粒悬液，因呈稳定的胶体状态，故称为成的金颗粒悬液，因呈稳定的胶体状态，故称为成的金颗粒悬液，因呈稳定的胶体状态，故称为胶体金胶体金颗粒聚集后呈现胶体金胶体金颗粒聚集后呈现胶体金胶体金颗粒聚集后呈现胶体金胶体金颗粒聚集后呈现红色uu胶体金颗粒与蛋白质通过静电引力而结合形成胶体金颗粒与蛋白质通过静电引力而结合形成胶体金颗粒与蛋白质通过静电引力而结合形成胶体金颗粒与蛋白质通过静电引力而结合形成免免免免疫金疫金疫金疫金技术类型技术类型u金免疫金免疫组化组化技术：免疫电镜、免疫光镜技术：免疫电镜、免疫光镜u金免疫金免疫测定测定技术技术 －斑点金免疫渗滤试验－斑点金免疫渗滤试验 －金免疫层析试验－金免疫层析试验l斑点金免疫渗滤试验斑点金免疫渗滤试验和和金免疫层析试验金免疫层析试验均均属于固相膜免疫测定技术，以属于固相膜免疫测定技术，以微孔膜微孔膜为固为固相载体，最大特点是相载体，最大特点是简便快速简便快速。

l以下均以以下均以双抗体夹心法双抗体夹心法测定尿中测定尿中HCGHCG（人绒（人绒毛膜促性腺激素）为例毛膜促性腺激素）为例斑点金免疫渗滤试验斑点金免疫渗滤试验胶体金颗粒聚集后呈胶体金颗粒聚集后呈胶体金颗粒聚集后呈胶体金颗粒聚集后呈现现现现红色斑点红色斑点红色斑点红色斑点主要材料主要材料l试剂盒：渗滤装置、免疫金、洗涤液试剂盒：渗滤装置、免疫金、洗涤液 l器材：一次性滴管器材：一次性滴管l标本：尿液标本：尿液操作步骤操作步骤l（（1 1）将反应板平放于实验台上，于小孔内滴加尿）将反应板平放于实验台上，于小孔内滴加尿液液5 5滴，待完全渗入滴，待完全渗入l（（2 2）于小孔内滴加免疫金试剂）于小孔内滴加免疫金试剂3 3滴，待完全渗入滴，待完全渗入l（（3 3）于小孔内滴加洗涤液）于小孔内滴加洗涤液2 2～～3 3滴，待完全渗入滴，待完全渗入l（（4 4）目测观察结果）目测观察结果结果判断结果判断l在膜中央有清晰的红色斑点者判为在膜中央有清晰的红色斑点者判为阳性反应阳性反应，说，说明标本明标本HCGHCG阳性；反之则为阳性；反之则为阴性反应阴性反应，说明标本，说明标本HCGHCG阴性。

斑点呈色的深浅相应地提示阴性斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度阳性强度l结果书写结果书写 例如：例如：1 1号标本醋酸纤维膜中央出现红色斑点，该号标本醋酸纤维膜中央出现红色斑点，该标本为标本为HCGHCG阳性阳性注意事项注意事项l注意试剂的保存及使用温度注意试剂的保存及使用温度l正确操作，注意加入尿液样品量和免疫金正确操作，注意加入尿液样品量和免疫金试剂量l尽量采集晨尿进行检测尽量采集晨尿进行检测金免疫层析试验金免疫层析试验阴性阴性阳性阳性主要材料主要材料l层析条层析条l标本：尿液标本：尿液操作步骤操作步骤l（（1 1）将试剂条的加样端浸入尿液中）将试剂条的加样端浸入尿液中2-5s2-5s或在或在标本加样加一定量待测尿液处，平放于桌面标本加样加一定量待测尿液处，平放于桌面上l（（2 2））5-15min5-15min内，目测观察结果内，目测观察结果 阳性阳性阴性阴性无效无效结果判断结果判断TC注意事项注意事项l（（1 1）打开层析条包装后应在）打开层析条包装后应在1h1h内应用l（（2 2）将层析条插入样品中，样品的液面不）将层析条插入样品中，样品的液面不能超过试剂条的标记线。

能超过试剂条的标记线l（（3 3））尽量采集晨尿进行检测尽量采集晨尿进行检测应用与评价应用与评价l这两种方法具有操作简便、快捷以及操作人员不需技术培这两种方法具有操作简便、快捷以及操作人员不需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定、便于保存等特点，因训，无需特殊仪器设备，试剂稳定、便于保存等特点，因此特别符合此特别符合POCTPOCT项目的要求项目的要求l只作为定性或半定量试验，主要用于正常体液中不存在的只作为定性或半定量试验，主要用于正常体液中不存在的物质（如传染病抗原和抗体等）和正常含量极低而在特殊物质（如传染病抗原和抗体等）和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如情况下异常升高的物质（如HCGHCG等）的检测等）的检测l金免疫测定技术灵敏度不及酶标法和酶发光免疫测定法，金免疫测定技术灵敏度不及酶标法和酶发光免疫测定法，在临床应用中应引起高度重视在临床应用中应引起高度重视。