分光光度法测定水果(精)课件.ppt

分光光度法测定水果、蔬菜及分光光度法测定水果、蔬菜及药物中的抗坏血酸药物中的抗坏血酸综合性实验综合性实验一、背景知识一、背景知识 抗坏血酸，也叫维生素C，易溶于水自然界存在两种形式的维生素C：抗坏血酸（还原型VC）和脱氢抗坏血酸（氧化型DHVC），抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸化学名称为：L-3-氧代苏己糖醛酸内酯，分子式为C6H8O6，相对分子质量：176.13两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合成的L-抗坏血酸 维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药，预防维生素C缺乏症，提高动物免疫力和抗应急能力，小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以提高动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗能力，它帮助人体对铁的吸收，可防止有害(低密度)胆固醇的氧化维生素也是非常有效的自由基清除剂但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2、Fe3等,都能加速其氧化，易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏维生素C广泛存在于新鲜植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏二、实验目的二、实验目的1、掌握铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法；2、理解铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件；3、掌握利用配位掩蔽法消除光还原作用的方法；4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法；5、了解抗坏血酸测定的意义，6、了解样品处理与制备、含量测定的全过程。

三、实验原理三、实验原理+ 2 Fe3+ =+ 2 Fe 2+ + 2H+Fe2+ +3 Phen（邻菲罗啉） = Fe (Phen)3 2+ (红色，max =510nm )Fe3+ (剩余) + 3 Phen（邻菲罗啉）= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + h = Fe (Phen)3 2+Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen四、仪器与试剂四、仪器与试剂仪器： 电子天平；分光光度计（1厘米比色皿）； 移液管（5、10 mL）；比色管或容量瓶(25或50 mL)试剂： 100 g/L Fe3+ 标准溶液； 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液； 40g/mL抗坏血酸； 0.2 mol/L HAc-NaAc缓冲溶液（pH 4.75）； 1%（W/V） 氟化钠溶液； 1% HAc溶液五、实验步骤五、实验步骤1、吸收曲线的绘制 加入准确吸取的40g/L抗坏血酸标准溶液5.00 mL置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 g/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0mL0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0 mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V）氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。

同时制作相应的试剂空白以相应试剂空白作参比，测定不同波长条件下的吸光度A，绘制吸收曲线，选择最大测定波长max2. 标准曲线的绘制 加入准确吸取的40g/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 g/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0 mL 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加入5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V） 氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀以相应试剂空白作参比，在最大测定波长max处测定吸光度As, 用Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备 新鲜水果去皮、去核后准确称重组织捣碎机中捣碎转移至烧杯中50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混匀脱脂棉粗滤精滤液转移至250 mL容量瓶中1% HAc溶液定容摇匀，静置蔬菜去根，洗干净，沥干待测或4、药片溶液的制备 VC片20片准确称重求平均片重后研细取适量(相当于VC l00 mg)精确称重后置1000 mL容量瓶加水到刻度摇匀，并过滤弃去初滤液，准确吸取续滤液2 mL置50 mL容量瓶中待测六、数据记录和结果处理1、吸收曲线的绘制/nm420430440450460470480490A/nm500510520530540550560A分光光度计型号： 比色皿厚度： 年 月 日 标准溶液水果Vc药片吸取溶液/mL1.002.003.004.005.006.007.008.00V1V2Vc的含量/g.mL-1 吸光度A2、标准曲线的绘制与待测样品测定附:光度计的使用说明数据处理要求1 要求利用计算机采用用Excel电子表格绘制吸收曲线,要求图形美观,大方,坐标选取合理;2 要求利用计算机采用用Excel电子表格绘制标准曲线,要求图形美观,大方,坐标选取合理;同时找出标准曲线的回归方程3 根据样品溶液测得吸光度,利用回归方程计算水果和蔬菜及药片样品中的抗坏血酸含量.。