实验五福医大计数PPT课件.ppt

实验五 血小板计数（临检指导P48） 目的 掌握普通光学显微镜直接血小板计数法 1.概述 血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质分割而生成其 生成受血小板生成素（TPO）的调节 正常静息状态下，血小板为双面微凸的圆盘形，直径2 4m、平均体积7.2fl的非细胞结构成分 v染色后镜下可见血小板的胞质呈淡蓝色，内含 较多的紫红色嗜天青颗粒 v血涂片上，为红细胞数的1/301/20，通常每个 油镜视野可见735个，分散或35成群分布 2.光学显微镜直接计数法 （1）原理 血液(20l)经稀释液(0.38ml)按一定比例稀释和破坏红 细胞后，充入血细胞计数池内，在显微镜下计数一定范 围内的血小板数，经换算求出每升血液中的血小板数量 由于血小板易黏附、聚集以致破坏，优质的血 小板稀释液应具备的条件是： （1）有效地阻止凝血 （2）很快地固定血小板，防止血小板聚集和变形 （3）溶血稀释液要求红细胞破坏完全 （4）组成简单、容易保存、不长细菌 根据所采用的稀释液不同而又分为 破坏红细胞稀释法（溶血法）： 草酸铵溶血法： 对红细胞破坏力强，血小板形态清楚 为首选常规计数方法 复方尿素溶血法：尿素可溶解红细胞、甲醛可固定血小 板和防腐，稀释后血小板胀大易辨认， 尿素容易分解，试剂容易失效。

尿素 不能完全破坏红细胞 高铁氰化钾溶血法：试剂稳定易于长期保存但不能完全 破坏红细胞 不破坏红细胞稀释法：复方碘稀释液红细胞未破 坏及试剂易细菌生长，干扰计数，已被淘汰 实验五 血小板计数 （2）操作步骤 1）吸取稀释液：准确吸取10g/L草酸铵溶血剂0.38ml于小 试管内 2）采血：准确采血20l加入上述试管，立即充分混匀 3）静置：待完全溶血后再混匀1min 4）充池：混匀血小板悬液，并取1滴充入血细胞计数池， 静置10min 5）计数：用高倍镜计数中央大方格内的中央及四角共5个 中方格内的 血小板数量 实验五 血小板计数 （3）计算 血小板数/L=N51020106=N109/L 参考值： （100300）109/L 实验五 血小板计数 （4）注意事项 1）稀释液必须符合优质的血小板稀释液，因此稀释 液必须新鲜、洁净，无杂物和细菌污染；定期检 查稀释液的质量，实验前应先做稀释液空白计 数，符合仪器使用说明方可使用 2）器材及操作必须标准化和规范化 所用器材必须校准、洁净、干燥 采血、充液、计数均应规范，避免血小板激活或破坏 血小板悬液充入计数池后必须静置15min再计数，并在采 血后1h内完成计数。

时间过短或过长则可导致血小板未完 全下沉或失去光泽，使计数结果偏低 充液前必须轻轻摇动血小板悬液2min或200次以上，但用力 不宜过大，以免造成血小板破坏或产生气泡，引起计数误差 镜下观察时的光线要适中，并注意与细胞碎片、灰尘、微生 物等鉴别 3）及时核准血小板计数结果 由经验丰富的检验人员进行 常用的方法有： 用同1份血标本制备良好的血涂片，观察血小板数量、形 态和分布情况，进行核对 用血小板计数的参考方法核对计数结果 每份标本最好做2次计数，若2次计数误差小于10%，取 其均值报告；若计数误差大于10%，应做第3次计数，取 2次相近结果的均值报告 4）排除非技术因素的影响 某些病理情况可干扰计数，出现血小板假性减少或 增多 血小板聚集或凝集、异常蛋白血症、巨大血小板、卫 星现象、高脂血症导致血小板假性减少 HbH包涵体病人的红细胞碎片、慢性淋巴细胞性白血 病病人的淋巴细胞核和细胞质碎片、小红细胞等可被 误认为血小板，导致血小板假性增多 5）标本采集 最好清晨采血，采集过程中应避免反复握拳、拍打采 血部位、扎止血带的时间过长（1min），以免血小板激 活而影响计数结果 采血后立即进行血小板检测。

（5）方法学评价 1）普通光学显微镜直接计数法： 以草酸铵溶稀释液法为常规方法和参考方法 2）相差显微镜直接计数法： 此法计数的准确性高，血小板易于识别，并可于照相 后核对计数结果，是计数血小板的参考方法但由于 所用仪器昂贵，临床上较少选用 3）血细胞分析仪计数法 ： 简便、快速、重复性好，可同时测定血小板、MPV及 PDW等多个指标的特点，已广泛用于临床但由于电阻抗 法不能完全区分血小板与其他类似大小的物质，致使计数结 果的误差较大，其计数结果有时仍需要显微镜直接计数法进 行复核 4）流式细胞仪：特异、准确、但需特殊仪器和试剂。