不同炮制方法对天麻饮片中多糖含量影响的实验研究.doc

1不同炮制方法对天麻饮片中多糖含量影响的实验研究【摘要】 目的研究不同加工方法对天麻多糖(GPS)含量影响方法采用鲜切烘干法、鲜切冷冻干燥法、半润透切片、浸润切片等方法加工天麻饮片采用蒽酮-硫酸法测定天麻多糖含量结果蒽酮-硫酸法测定样品时，供试液在 2 h 内显色稳定，测定结果具有较好的重现性不同加工炮制方法所得饮片其多糖含量不一致，含量高低顺序依次为真空冷冻干燥饮片最高，其次为鲜切饮片、蒸制饮片、半润透饮片、润透饮片结论含量测定方法简单、可靠、可行鲜切法加工工艺优于传统加工炮制方法，研究结果为天麻饮片炮制工艺改进提供理论依据 【关键词】 天麻; 炮制; 天麻多糖天麻为兰科植物天麻 Gastrodia elata Bl 的干燥块茎，为常用名贵中药天麻含天麻素、香荚兰醇、香荚兰醛、琥珀酸、β-谷甾醇、维生素 A 样物质、苷类、生物碱、黏液质和天麻多糖等[1] 天麻药用历史悠久，具有平肝熄风止痉功效，用于头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊厥、癫痫抽搐、破伤风等症有关天麻的研究，近几年发表文献较多，自“数字化期刊”2检索有关天麻的文献达一千三百多篇(1997 年以来)其中主要包括天麻的生物学特性和栽培、加工、有效成分测定、药理作用和开发利用。

当前天麻的研究主要集中在天麻素的理化性质和药理活性方面，而对于天麻多糖方面的研究报道比较少但是近几年越来越多的药理实验表明，天麻作为名贵中药，其多糖能提高细胞的免疫功能; 明显增加心肌营养性血流量和脑血流量，提高耐低压缺氧的能力;有效的抗惊厥作用;明显的镇静作用; 一定的镇痛作用，而且维持时间较长[2～7]天麻饮片传统加工方法使得多糖损失较多本实验采用蒽酮-硫酸法分别测定了不同天麻炮制饮片中的天麻多糖含量，为天麻饮片炮制工艺改进提供理论依据，也为天麻药材增加临床效果奠定基础1 仪器及试药UV-7200 分光光度仪，葡萄糖标准品，原药材购于陕西略阳，经陕西中医学院王继涛老师鉴定为兰科植物天麻 Gastrodia elataB.l的干燥块茎按照不同方法自行炮制本实验所用试剂均为分析纯2 方法与结果[8]2.1 天麻饮片的制作所用天麻均选大小一致者，洗净、干燥32.1.1 鲜天麻饮片取新鲜天麻 300 g，洗净晾干表面水分切薄片，60℃烘干粉碎过筛2.1.2 真空冷冻干燥饮片取新鲜天麻 300 g，洗净晾干表面水分切薄片，置真空干燥箱中，干燥 24 h粉碎过筛2.1.3 半润透切片称取按药典方法炮制后的天麻个字药材100 g，快速洗淋之后置于密闭容器内，隔 1 h 用喷壶喷洒加水 10 ml，共加水 50 ml，并不时翻动，浸润 5 h 至药材半透后取出，切片，于 60℃下烘干。

粉碎过筛2.1.4 润透切片称取按药典方法炮制后的天麻个字药材 100 g，喷洒加水约 40 ml，并不时翻动，浸润 24 h 至药材完全润透后取出，切片，干燥粉碎过筛2.1.5 蒸制切片称取按药典方法炮制后的天麻个字药材 100 g，快速洗淋之后置于己圆气的蒸锅中隔水蒸 10 min (药材软硬适宜切片)，取出，稍晾，切片，干燥粉碎过筛2.2 天麻多糖的含量测定42.2.1 标准曲线的制作[9]葡萄糖标准曲线的绘制：称取烘至恒重的无水葡萄糖标准品 100 mg，溶于 100 ml 容量瓶中，配成 1 mg·ml-1 的标准溶液分别取 1 mg·ml-1 的标准葡萄糖溶液0，1 ，2 ， 3，4 ，5， 6 ml，用蒸馏水定容至 50 ml 后，各取 1 ml于具塞试管中，再分别加入 4 ml 0.2%蒽酮-硫酸试剂(冰水浴中)，各管加完后，一起浸入沸水浴中 10 min，取出用自来水冷却，在620 nm 处测吸光度，以吸光度 (A)为纵坐标，葡萄糖质量浓度C(mg/L)为横坐标，绘制标准曲线( 图 1)，得到回归方程： A=0.006 8X-0.008 9 ，R2=0.999 0图 1 葡萄糖质量浓度测定标曲线2.2.2 方法学考察精密度实验：精密吸取对照品溶液 5 份，各 1.0 ml，分别置10 ml 具塞干燥试管中，照线性关系考察项下方法，自“各取 1 ml于具塞试管中”起依法操作，测定吸收度，结果分别为0.521，0.527，0.521，0.523，0.50， RSD 为 1.46%，表明仪器精密度良好。

稳定性实验：精密吸取含量测定项下同一备用供试品溶液1.0 ml，分别置 10 ml 具塞干燥试管中，照线性关系考察项下方法，5自“各取 1 ml 于具塞试管中”起依法操作，测定吸光度在室温下每隔 0.5 h 测定 1 次，连续 2 h，考察其稳定性测定结果见表 1，从表中可以看出供试液在 2 h 内吸光度几乎没有变化，显色稳定，测定结果依次为 0.362，0.365 ，0.373，0.363，0.378，RSD 为1.90%，表明供试品溶液在 2h 内稳定性良好加样回收实验：精密称取蒸制切片样品 1 g，平行 5 份;另精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖 94.25 mg，置 100 ml 量瓶中，加蒸馏水至刻度;精密量取上述无水葡萄糖溶液 10 ml，分别加入上述5 份样品中，按拟订的供试品溶液制备方法同法操作，测定其吸收度，分别为 0.421，0.417，0.413，0.428，0.422 计算回收率，结果平均回收率为 100.1%，RSD 为 3.4%2.2.3 各饮片多糖含量测定[10，11]取 60℃ 减压干燥 4 h 的各样品细粉约 0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚(60～90℃)150 ml。

水浴中回流 1 h，趁热抽滤，残渣用热石油醚(60～90℃)涤 3 次，每次 10 ml，将残渣及滤纸置烧瓶中，加 10%乙醇 200 ml 沸水浴中加热回流 1 h，趁热抽滤，残渣及滤纸置烧瓶用热 10%乙醇洗涤 4 次，每次 10 ml ，合并滤液与洗液，放冷，转移至 250 ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取 1 ml，置 10 ml 具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自加水至 2.0 ml 起，依法侧定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg)，计算，即得62.2.4 结果不同炮制品中的天麻多糖含量明显低于生品饮片经方差分析，有显著性差异(P<0.05)含量测定结果见表 2表1 天麻炮制品吸光度测定结果表 2 天麻炮制品种多糖含量测定结果4 讨论蒽酮-浓硫酸法测定多糖含量实验中先用石油醚(60 ～90℃)提取以除去树脂等干扰性成分再用低浓度醇提取多糖类成分，反应中，量取应精确，温度及反应时间也应精确控制对于植物多糖常规采用水煎煮法提取，但是实验中发现用水提取天麻多糖时，极易出现严重的树脂化问题改用低浓度醇为提取溶剂于较低温度下提取可以更有效地提取出天麻多糖，且可以改善水煎煮提取天麻多糖时，树脂化的问题。

实验结果可以看出，鲜切法优于传统炮制方法，以真空冷冻干燥制成的饮片中多糖含量最高，润透切片的最低天麻多糖亦是天麻活性部位之一，因此作者认为天麻饮片加工炮制过程中，应将天麻素含量与天麻多糖的含量都要考虑，虽然鲜切天麻饮片天麻多糖含量均高于传统加工炮制饮片，但对于工业应用来讲新鲜药材的运输、储存均存在一定问题，应将产地加工与饮片炮制相结合，改7进中药饮片炮制加工工艺，进一步保证药材疗效参考文献】[1] 国药典委员会. 中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社，2005：39.[2] 胡德坤，沈业寿.天麻多糖 GEP-2 对 BCG+LPS 致小鼠免疫性肝损伤的保护作用[J].中国免疫学杂志，2007， 10:912.[3] 缪化春，沈业寿.天麻多糖的降血压作用[J].高血压杂志，2006，7(14): 531.[4] 鲍 宁.天麻多糖对大鼠缺血再灌注视网膜保护作用的实验研究[D].合肥：安徽医科大学，2006：5.[5] 孔小卫，柳听义，关 键.天麻多糖对亚急性衰老模型小鼠自由基代谢的影响[J].安徽大学学报(自然科学版 )， 2005，29(2):95.[6] 汪鋆植，容 辉，段和平.天麻多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国民族民间医药杂志，2007，2 ：112.[7] 朱丽玲，王建陵，吴 彻，等.天麻多糖在小鼠体内诱生干8扰素的研究[J].南京中医学院学报， 1987， 4：37.[8] 周 霞，万 军，李祖伦，等.天麻炮制的历史沿革[D].中华中医药学会第五届中药炮制学术会议论文集，2005：9.[9] 朱晓霞，罗学刚.天麻多糖水提及脱蛋白工艺优化[J]. 中药材， 2007，30(6):724.[10] 朱晓霞，罗学刚，天麻多糖提取工艺优化[J].时珍国医国药，2007，18(4):906.[11] 刘玉潭，梁 华，蔡永萍，等.天麻多糖提取纯化方法及性质的初步研究[J].激光生物学报， 2007， 16(4):495.。