实验细菌的芽孢染色和鞭毛染色教学讲义.ppt

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版副标题样式* *1 1实验三细菌的鞭毛染色和芽孢染色l主 讲:徐尔尼l生命科学学院生物技术系一、目的与要求一、目的与要求 学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法 观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征 巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用二、基本原理1 1、鞭毛染色法、鞭毛染色法 细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.010.010.02m0.02m，所以不能用光学显微镜直接观察到，必，所以不能用光学显微镜直接观察到，必须采用特殊的染色方法，才能被观察须采用特殊的染色方法，才能被观察 鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色二、基本原理2 2、芽孢染色法、芽孢染色法 由于由于芽孢壁厚、透性低、不易着色芽孢壁厚、透性低、不易着色，因此用，因此用着着色力强色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热加热条件条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。

的颜色，使芽孢和菌体更易于区分三、实验器材三、实验器材1 1、菌种：、菌种：普通变形普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌杆菌、枯草芽孢杆菌2 2、染色剂：、染色剂：硝酸银鞭毛染色液硝酸银鞭毛染色液:(A:(A液、液、B B液）、芽孢液）、芽孢染色液染色液: :（5%5%孔雀绿染液、孔雀绿染液、0.5%0.5%番红染液）番红染液）3 3、仪器或其他用具：、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、载玻片、生理盐水、酒精灯、木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等四、操作步骤四、操作步骤1 1、鞭毛染色（硝酸银染色法）、鞭毛染色（硝酸银染色法）取一滴无菌水，滴于玻片一端取一滴无菌水，滴于玻片一端取一环菌置于无菌水中，取一环菌置于无菌水中，让菌体利用鞭毛运动开让菌体利用鞭毛运动开 然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向玻片的另一端玻片的另一端 室温自然干燥室温自然干燥 滴加染液滴加染液A A 3-5min3-5min 水水洗洗 用染液用染液B B冲去残水冲去残水 滴加染液滴加染液B B1-1.5min1-1.5min水洗水洗干燥干燥 镜检镜检 结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。

操作要点：操作要点：菌种的培养时间为菌种的培养时间为8-10h8-10h玻片要求光滑、洁净玻片要求光滑、洁净勿用接种环涂布制片勿用接种环涂布制片制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净四、操作步骤四、操作步骤2 2、芽孢染色、芽孢染色涂片涂片 干燥固定干燥固定 滴加孔雀绿染液滴加孔雀绿染液 夹住玻片，微夹住玻片，微火加热至蒸汽冒出，维持火加热至蒸汽冒出，维持5min 5min 水洗水洗 番红复染番红复染6min6min水水洗洗 干燥干燥 镜检镜检结果：芽孢绿色，营养体红色结果：芽孢绿色，营养体红色操作要点：操作要点： 加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸 在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则染液不易进入芽孢内染液不易进入芽孢内 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉 尽可能地把尽可能地把孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染。

五、实验数据及处理结果五、实验数据及处理结果 1 1、根据油镜观察结果，、根据油镜观察结果，绘出枯草芽孢杆菌的形态绘出枯草芽孢杆菌的形态特征（注意芽孢的形状及着生位置）特征（注意芽孢的形状及着生位置）2 2、绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征六、六、思考与讨论思考与讨论1 1、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要注意哪些环节？注意哪些环节？2 2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？3 3、说明芽孢染色法的原理，用简单染色法能否观察到、说明芽孢染色法的原理，用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？细菌的芽孢？下次实验项目：下次实验项目：放线菌的形态观察、放线菌的形态观察、酵母菌的形态观酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别察及死活细胞的鉴别。