龙眼肉多糖lpii的体外免疫调节活性评价.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.4 龙眼肉多糖 LPII 的体外免疫调节活性评价 易阳1，张名位2 （1.武汉轻工大学食品科学与工程学院，湖北武汉 430023） （2.广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广东广州 510610） 摘要：LPII 是龙眼肉多糖的主要级分之一，本文研究了其体外免疫调节活性及酶降解作用对活性的影响采用尼龙毛柱分离脾淋巴 T/B 细胞，在 25~400 μg/mL 剂量范围内体外评价 LPII 对脾淋巴细胞的刺激作用发现，LPII 能刺激脾淋巴细胞及 B 细胞增殖，并促进 B 细胞抗体生成，但对 T 细胞激活作用不明显（P>0.05） 此外，LPII 还能有效刺激巨噬细胞增殖，并增强其吞噬功能和 NO生成量LPII 的高分子量组分在木瓜蛋白酶、链酶蛋白酶和胰蛋白酶的作用下均发生明显降解，且 200 μg/mL 剂量下对刀豆蛋白 A诱导的脾淋巴细胞增殖的刺激作用显著降低（P0.05） LPII 可能选择性刺激 B 细胞增殖，而对 T 细胞无影响由 图 2 可见， LPII 能剂量依赖性刺激 B 细胞分泌绵羊红 细胞溶血素。

400 μg/mL 剂量下的溶血素水平最高， 达 67.22%；其次是 100 μg/mL 和 200 μg/mL 剂量，其 溶血素水平分别为 40.04%和 43.98%，无显著差异 （P>0.05） ； 以上剂量下的抗体生成量均显著高于其他 低剂量（P0.05） 而 LPII 仅在 100~400 μg/mL 剂量内显著刺激巨噬细胞 NO 生 成（P0.05） ， 但均显著低于 400 μg/mL 剂量的吸光值 0.176 （P0.05） 200 μg/mL和400 μg/mL剂量的LPII对巨噬细胞增殖的刺 激作用则显著强于 5 μg/mL 剂量的 LPS（P<0.05） 图3 龙眼肉多糖 LPII 对巨噬细胞增殖、 吞噬功能和 NO 生成的影响 Fig.3 Effects of polysaccharide LPII from Arillus longanae on the proliferation, phagocytosis and NO production of macrophage 66 注：同类指标吸光值之间 0.05 水平的显著性差异采用不同小写字母表示 2.3 酶解对 LPII 分子量分布的影响 由图4可见， LPII的分子量分布较宽， 且以第5~13 管收集的高分子量组分（490 nm）为主，而色素（420 nm）和蛋白质（280 nm）的洗脱峰值基本与低分子量 组分吻合，说明可能以结合状态存在。

LPII 经木瓜蛋 白酶、链酶蛋白酶和胰蛋白酶酶解处理分别得到多糖 LPII1、LPII2 和 LPII3，其分子量分布发生明显变化， 尤其是高分子量组分发生明显降解LPII1 的多糖峰 值与 LPII 基本相同， 但低分子量组分含量较高 LPII2 和 LPII3 的多糖峰相对杂乱， 在洗脱管数 5~25 范围内 分散或叠加分布 然而三种酶对 LPII 低分子量组分及 其结合蛋白和色素的影响并不显著 2.4 LPII 及其酶解组分的免疫调节活性比较 龙眼肉多糖LPII及其酶解组分在200 μg/mL剂量 下对脾淋巴细胞和巨噬细胞的影响由图 5 和 6 可见 酶解后，LPII 对 ConA 诱导的脾淋巴细胞增殖的刺激 作用显著降低（P<0.05） ，但对 LPS 诱导的脾淋巴细 胞增殖和巨噬细胞吞噬的刺激作用却显著增强 （P<0.05） 其中，LPII3 刺激下的 LPS-细胞增殖水平 （吸光值0.258） 显著高于其他组分 （P<0.05） ， 而 LPII1 具有最强的巨噬细胞刺激活性（吸光值 0.336） （P<0.05） 图 4 酶解对龙眼肉多糖 LPII 分子量分布的影响 Fig.4 Effect of enzymolysis on the molecular weight distribution of polysaccharide LPII from Arillus longanae 注：a：LPⅡ、b：LP1Ⅱ 、c：LP2Ⅱ 、d：LP3Ⅱ 。

龙眼肉多糖LPII能有效刺激混合脾淋巴细胞和B 细胞增殖，并促进 B 细胞抗体生成，但对 T 细胞无刺 激作用，表现出一定的靶向选择性，与裂蹄木层孔菌 多糖[8]、 灵芝多糖[9~10]和樱桃多糖[11]的功效相似 LPII 现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.4 对于T/B细胞的选择性与特异的细胞表面受体作用有 关，而对 B 细胞的刺激作用可能涉及 TLR2/4 和 IgM/CD79 受体介导的 MAPKs 信号通路的活化或 Blimp-1 诱导的浆细胞分化过程中相关基因的调控表 达[12] 图5 龙眼肉多糖 LPII 及其酶解组分对脾淋巴细胞增殖的影响 Fig.5 Effects of Arillus longanae polysaccharide LPII and its enzyme-degraded products on splenic lymphocyte proliferation 图6 龙眼肉多糖 LPII 及其酶解组分对巨噬细胞吞噬功能的影响 Fig.6 Effects of Arillus longanae polysaccharide LPII and its enzyme-degraded products on macrophage phagocytosis ConA 和 LPS 诱导的脾淋巴细胞增殖常分别用于 评价 T 细胞和 B 细胞活性。

LPII 经酶解后对 T 细胞的 刺激作用显著降低， 而对 B 细胞和巨噬细胞的刺激作 用显著增强B 细胞和巨噬细胞存在相似的多糖刺激 信号转导机制（TLR2/4→MAPKs） ，酶解处理后多糖 与 TLR2/4 的亲和能力可能得到增强酶处理对 LPII 含结合蛋白的低分子量组分的影响并不显著，反而明 显导致含极少量蛋白质的高分子量组分的降解高分 子量组分降解后可能更有利于与受体 TLR2/4 的结合 引发免疫应答枸杞多糖结合蛋白含量高的级分表现 出较强的 T 细胞刺激作用[13]， 而结合蛋白的消解不影 响刺五加多糖的 B 细胞刺激活性[14]， 说明结合蛋白可 能主要与 T 细胞活化有关 这可能也与 LPII 酶解后对 ConA 诱导的脾淋巴细胞刺激作用减弱存在关联 3 结论 龙眼肉多糖 LPII 能有效增强 B 淋巴细胞和巨噬 细胞免疫功能，但对 T 细胞激活作用不明显，其选择 性刺激作用可能与免疫细胞受体特异性有关LPII 是 龙眼肉多糖的主要活性级分之一，适度降解有利于增 强其免疫调节活性 后期研究将根据 LPII 的选择性刺 激作用， 深入揭示 LPII 免疫刺激的细胞作用受体及胞 内信号转导机制，并进一步结合多糖的结构特征探究 其免疫调节构效机制。

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