酚二黄酸比色法测土壤硝态氮含量.docx

土壤硝态氮的测定--酚二黄酸比色法一、方法原理土壤浸提液中 NO3--N 在蒸干无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝 基酚二磺酸：C6H3OH（HSO3）2+ HNO3f C6H2OH（HSO3）2NO2+ H2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化 后则为稳定的黄色溶液，黄色深浅与NO3--N含量在一定范围内成正相关，可在 400-425nm 处（或用蓝色滤光片）比色测定酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出 溶液中O.lmg/L NO3--N，测定范围为0.1-2mg/L二、主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿三、试剂CaSO4・2H2O （分析纯、粉状）、CaCO3 （分析纯、粉状）、Ca （OH） 2 （分析 纯、粉状）、MgCO3 （分析纯、粉状）、Ag2SO4 （分析纯、粉状）、1:1NH4OH、 活性炭（不含 NO3-）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH,分析纯）25.0g置于500ml三角瓶 中，以150ml纯浓硫酸溶解，再加入发烟硫酸75ml，并置于沸水浴中加热2h, 可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。

使用时须注意其强烈的腐蚀性如无发 烟硫酸，可用酚25.0g，加浓硫酸225ml，沸水浴中加热6h配成试剂冷后可能 析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶 中，严防吸湿10 yg/ml NO3--N标准溶液：准确称取KNO3 （二级）0.7221g溶于水，定容 1L,此为100 yg/ml NO3--N溶液，将此溶液准确稀释10倍，即为10yg/ml NO3--N 溶液四、操作步骤（1） 浸提称取新鲜土样50g放在500ml三角瓶中，加入CaSO4・2H2O 0.5g 和250ml水，盖塞后，用振荡机振荡10min放置5min后，将悬液的上部清液 用干滤纸过滤，澄清的滤液收集在干燥洁净的三角瓶中如果滤液因有机质而呈 现颜色，可加活性炭除之2） 测定吸取清液25-50ml（含NO3--N 20-15Oyg）于瓷蒸发皿中，加CaCO3 约0.05g，在水浴上蒸干，到达干燥时不应继续加热冷却，迅速加入酚二磺酸 试剂2ml,将皿旋转，使试剂接触到所有蒸干物静止10min使其充分作用后， 加水20ml，用玻璃棒搅拌直到蒸干物完全溶解冷却后缓缓加入1:1 NH4OH并 不断搅拌混匀，至溶液呈微碱性（溶液显黄色）再多加2ml,以保证NH4OH试 剂过量。

然后将溶液全部转入 100ml 容量瓶中，加水定容在分光光度计上用光 径 1cm 比色杯在波长 420nm 处比色，以空白溶液作参比，调节仪器零点NO3--N工作曲线绘制：分别取10 yg/ml NO3--N标准溶液0、1、2、5、10、 15、 20ml 于蒸发皿中，在水浴上蒸干，与待测液相同操作，进行显色和比色， 绘制成标准曲线，或用计算器求出回归方程五、计算土壤中 NO3--N 含量(mg/kg) =p(NO3--N)xVxts/m式中：P (NO3--N)——从标准曲线上查得(或回归所求)的显色液NO『-N质量浓 度(yg/ml)；V- 显色液的体积(ml)；ts 分取倍数；m 烘干样品质量，go注释：注 1:硝酸根为阴离子，不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很易在土壤内部移 动，在土壤剖面上下层中移动频繁，因此测定硝态氮时应注意采样深度即不仅 要采集表层土壤，而且要采集心土和底土,采样深度可达40cm、60cm以致120cm 试验证明，旱地土壤上分析全剖面的硝态氮含量能更好地反映土壤的供氮水平 和表层土壤比较，则全剖面的硝态氮含量与生物反应之间有更好的相关性，土壤 经风干或烘干易引起no3--n变化，故一般都用新鲜土样测定。

注 2：用酚二磺酸法测定硝态氮，首先要求浸提液清彻，不能混浊，但是一 般中性或碱性土壤滤液不易澄清，且带有机质颜色，为此在浸提液中应加入凝聚 齐叽凝聚剂的种类有很多，有 CaO、Ca(OH)2、CaCO3、MgCO3、KAl(SO4)2、CuSO4、 CaSO4等，其中CuSO4有防止生物转化的作用，但在过滤前必须以氢氧化钙或碳 酸镁除去多余的铜，因此以CaSO4法提取较为方便注 3：如果土壤浸提液由于有机质而有较深的颜色，则可用活性炭除去，但 不宜用h2o2，以防最后显色时反常注4：土壤中的亚硝酸根和氯离子是本法的主要干扰离子亚硝酸和酚二磺 酸产生同样的黄色化合物，但一般土壤中亚硝酸含量极少，可忽略不计必要时 可加少量尿素、硫尿和氨基磺酸(20g/LNH2SO3H)以除去之例如亚硝酸根如果 超出了 lyg/ml时，一般每10ml待测液中加入20mg尿素，并放置过夜以破坏 亚硝酸根检查亚硝酸根的方法:可取待测液5滴于白瓷板上，加入亚硝酸根试粉0.1g， 用玻璃棒搅拌后，放置10min，如有红色出现，即有1mg/L亚硝酸根存在如果 红色极浅或无色，则可省去破坏亚硝酸根手续NO3-+3Cl-+4H+fNOCl+Cl2+H2O亚硝酰氯Cl-对反应的干扰，主要是在加酸后生成亚硝酰氯化合物或其它氯的气体。

如果土壤中含氯化合物超过15mg/kg，则必须加Ag2SO4除去，方法是每100ml 浸出液中加入Ag2SO4 0.1g(0.1gAg2SO4可沉淀22.72mgCl-)摇动15min，然后加入 Ca(OH)2 0.2g及MgCO3 0.5g，以沉淀过量的银，摇动5min后过滤，继续按蒸干 显色步骤进行注 5 ：在蒸干过程中加入碳酸钙是为了防止硝态氮损失因为在酸性和中性 条件下蒸干易导致硝酸离子的分解，如果浸出液含铵盐较多，更易产生负误差注 6 ：此反应必须在无水条件下才能完成，因此反应前必须蒸干注7：碱化时应用NH4OH,而不用NaOH或KOH,是因为NH3能与Ag+络 合成水溶性的[Ag(NH3)2]+，不致生成Ag2O的黑色沉淀而影响比色注 8：在蒸干前,显色和转入容量瓶时应防止损失。