常用培养基的配制成分及方法.doc

一、常用培养基1、LB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g如果需要用 1NNaOH（～1ml）调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L注：琼脂平板需添加琼脂 粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L2、SOB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1mol/L 氯化钾 2.5ml用水补足体积到 1L分成 100ml 的小份，高压灭菌培养基冷却到室温后，再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁3、SOC 培养基 成分、方法同 SOB 培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每 100ml 的小份中 加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够 水中，再用水补足到 100ml，用 0.22um 的滤膜过滤除菌） 4、TB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml各组分溶解后高压灭菌冷却到 60℃，再加 100ml 灭菌的 170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在 足量的水中，使终体积为 100ml。

高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌） 5、2×YT 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml如果需要用 1NNaOH（～1ml）调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L注：琼脂平板需添加琼脂 粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L6、YPD 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养 基添加 1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基为了配制平板，需要在高 压灭菌前加入 20g 琼脂粉二、常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin） （100mg/ml） 溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存常以 25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基羧苄青霉素（carbenicillin） （50mg/ml） 溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存 常以 25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin） （100mg/ml） 溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存常以 37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生长培养基卡那霉素（kanamycin） （10mg/ml） 溶解 0.1g 卡那霉素于足量的水中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存常以 10ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基氯霉素（chloramphenicol） （25mg/ml） 溶解 0.25g 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存常以 12.5ug/ml～25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基链霉素（streptomycin） （50mg/ml） 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存 常以 10ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基萘啶酮酸（nalidixicacid） （5mg/ml） 溶解 0.05g 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml分装成小份于-20℃贮存常以 15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline） （10mg/ml） 溶解 0.1g 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至 10ml分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存常以 10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基小技巧：如配制 10mg/ml 卡那霉素，先在盐水瓶或血清瓶加入 10ml 双蒸水，高压，冷却 后加入 0.1g 卡那霉素，混匀，滤膜过滤到试管中，再以 1ml/管分装到 EP 管中待用。