JM109DH5aBL21等这些感受态有何区别.docx
2页JM109, DH5a, BL21这些感受态有何区别1: DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与 载体编码的卩一半乳糖苷酶氨基端实现a—互补可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株基因型:F-,申80dlacZAM15, A(lacZYAargF)U169, deoR, recAl, endAl, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44,九thi-1, gyrA96, relA12: BL21(DE3)菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因T7 噬菌体RNA聚合酶位于九噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上该菌适合表达非 毒性蛋白基因型:F-, ompT, hsdS (rBB-mB—), gal, dcm (DE3)3: BL21(DE3) pLysS 菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降 低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋 白基因型:F-, ompT hsdS (rBB-mB—), gal, dcm (DE3, pLysS , Camr4: JM109 菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载 体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZAM15进行a—互补,从而显示卩一半乳糖 苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1, endA1, gyrA96, thi— 1, hsdR17, supE44, relA1, A (lac—proAB) /F' 5: TOP10 菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- , mcrAA(mrr-hsd RMS-mcrBC),申80 , lacZAM15, ZlacX74, recA1 , araA139A(ara-leu)7697, galU , galK , rps , (Strr) endA1 , nupG6: HB101 菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44 , hsdS20 (rB-mB—) , recA13 , ara—14 , proA2 , lacY1 , galK2 , rpsL20 , xyl-5 , mtl-1 , leuB6 , thi-1M110 或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌 吟N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基常用 的菌株都会产生dam,dcm ,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内 切酶说明中均有说明大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI, BclI等而且甲基化只发生 在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC ,该XbaI位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:(1) 选用上述酶的同功酶,女口Sau3AI, DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影 响;(2) 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者 Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA 就能被上述酶切割E.coli JM110要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110 如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别用途特征X11-Blue 菌株基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recAl relAl lac glnV44 F‘ hsdR17(rK- mK+) 特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性用途:分子克隆和质粒提取BL21(DE3)菌株基因型:F- ompT gal dcm Ion hsdSB(rB- mB-)九(DE3 )特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主T7噬菌 体RNA聚合酶基因的表达受控于入噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的 染色体上。
该菌适合于非毒性蛋白的表达用途:蛋白质表达BL21(DE3)ply 菌株基因型:F- ompT gal dcm Ion hsdSB(rB- mB-)九(DE3) pLysS(cmR)特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶 能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达 用途:蛋白质表达DH5a菌株基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recAl relAl gyrA96 deoR nupG ①80dlacZAM15 A(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, X-特点:一种常用于质粒克隆的菌株其①80dlacZAM15基因的表达产物与pUC载体编码的 卩-半乳糖苷酶氨基端实现a互补,可用于蓝白斑筛选recA1和endA1的突变有利于克隆 DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达JM109菌株基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ A(lac-proAB) e14- hsdR17(rK-mK+)。
特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选 用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。





