细胞总抗氧化能力比色法(DPPH)定量检测试剂盒.docx

细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参 与，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育 酚 Trolox 的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法该技术经过精心研制、成功 实验证明的适用于各种新鲜食物样品总抗氧化能力检测产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳 定技术背景超氧自由基阴离子(superoxide radical； 02-)、过氧化氢(hydrogen peroxide； H2O2)、羟自由基或氢氧基 (hydroxyl radical； OH-)、过氧化基(peroxyl radical； R00-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl； H00)、 烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide； NO-)、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion； ONOO-) 次氯酸(hypochlorous acid； HOC1)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species； ROS)的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸 如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。

在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化 物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白( ceruloplasmin； CER)、 铁蛋白(ferritin)和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素(bilirubin )等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害通过稳定的有机氮 自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(l,l-Dipheny1-2-picry1hydrazy1radica1； DPPH)，受到抗氧化剂的去自 由基作用，呈现深紫色转化为黄色的变化，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分 光光度仪(515nm波长)的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照产品内容500 毫升20 毫升1瓶10 毫升200 微升1份清理液( Reagent A) 缓冲液( Reagent B)染色液 A( Reagent C1 ) 染色液 B(Reagent C2)标准液( Reagent D)产品说明书保存方式保存 清理液(Reagent A)在4°C冰箱里，其余的保存在一20°C冰箱里，有效保证6月用户自备50毫升烧杯：用于样品操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5 毫升离心管：用于标准样品配制的容器4°C台式离心机：用于样品操作200 微升1厘米光径比色皿或 96孔板：用于比色的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、 样品准备1、 固态食品处理1． 秤取1 克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封2. 加入8毫升 清理液(Reagent A)3． 搅拌30 分钟，充分混匀4. 继续加入清理液(Reagent A)到终容量为10毫升5. 过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒6. 封口膜封口备用2、液态食品处理1. 移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管2. 放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g3. 移取上清液到新的15 毫升锥形离心管4. (选择步骤)可以加入适量的 清理液(Reagent A)5. (选择步骤)过滤纸过滤(如果离心处理，样品仍然不清澈)6. 置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存二、 标准液准备1. 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管2. 分别加入50微升 缓冲液(Reagent B)到2至5号管3. 移取100微升 标准液(Reagent D)到1号管，混匀4. 小心移取50微升1号管的 标准液(Reagent D)到2号管，混匀5. 小心移取50微升2号管稀释的 标准液(Reagent D)到3号管，混匀6. 小心移取50微升3号管稀释的 标准液(Reagent D)到4号管，混匀7. 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号缓冲液(Reagent B)标准液(Reagent D)测定体系标准Trolox浓度10100微升80微摩尔/升250微升50微升40微摩尔/升350微升50微升20微摩尔/升450微升50微升10微摩尔/升550微升00三、 样品测读 实验开始前，将一20°C冰箱里的试剂置于室温下融化，移取5毫升染色液B （Reagent C2）到1瓶染色 液A （Reagent C1）里，混匀，置于暗室里，标记为染色工作液，避免光照。

然后进行下列操作1． 准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准样品孔、待测样品孔2. 分别移取205微升 缓冲液（Reagent B）到96孔板里的每个孔里3． 分别加入25微升 染色工作液4. 加入20微升 缓冲液（Reagent B）到空白对照孔5. 加入20微升上述配制的标准液（Reagent D）到相应标准样品孔里6. 加入20微升样品（100微克食品总量）到待测样品孔里7. 轻轻摇动96孔板，使其混匀8. 室温下孵育15分钟9. 即刻放进酶标仪里测读：515nm波长10. 分析结果：1） 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD515nm）；横座标（X轴）为标准Trolox 浓度（微摩尔/升）2） 空白对照孔为最大吸光单位（OD515nm ）读数3） 标准样品孔和待测样品孔为实际吸光单位（OD515nm ）读数4） 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）5） 计算样品实际总抗氧化能力【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）X 0.25 （体系容量；毫升）X样品稀释倍数1 -0.02 （样品容量；毫升）=（微摩尔/升TROLOX等值）6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）【（空白对照孔吸光单位读数一实际吸光单位读数）斗空白对照孔吸光单位读数】X 100%7） IC50： 50%抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微 升）X （所需样品单位）=（已知样品单位「实际抑制百分率）X 50%注意事项1. 本产品为 50 次操作，包括标准品2. 本产品测试范围为10至100微摩尔Trolox等值3. 操作时，须戴手套4. 样品制备的所有操作均须在4C状态下进行5. 用户可以调整标准曲线区间6. 测试前，样品须新鲜收集7. 样品须清澈8. 空白对照孔的吸光读数应为1.0左右为佳9. 样品读数越低，抗氧化能力越高10．可以使用比色皿检测11．如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品容量或浓度12．如果测试样品很多，建议使用排枪移液13．本公司提供系列抗氧化分析试剂产品质量标准1． 本产品经鉴定性能稳定2． 本产品经鉴定检测敏感。