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毕赤酵母诱导表达实验步骤.docx

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卖家[上传人]：s9****2

文档编号：462788088

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BMGY 的配制Yeast extract(每200 mL)2 gPeptoneK3PO4(pH 6.0) 丙三醇定容至180 mL，10*YNB生物素4 g20 mL2 mL121，灭20 min使用前再加入20 mL （10%）（过滤除菌）0.4 mL （0.02%）（过滤除菌）加入后，用紫外照射 10 min 左右再接菌BMMY 的配制Yeast extract(每 200 mL)2 gPeptoneK3PO4(pH 6.0)定容至180 mL，10*YNB生物素甲醇4 g20 mL121，灭20 min使用前再加入20 mL （10%）（过滤除菌）0.4 mL （0.02%）（过滤除菌）0.5%加入后，用紫外照射 10 min 左右再接菌10*YNB 的配制酵母基础氮源培养基 3.4 g硫酸铵双蒸水10 g80 mL定容至100 mL,过滤除菌（用0.22 口 m滤膜过滤）毕赤酵母诱导表达1. 配BMGY和BMMY灭菌2. 使用前向BMGY按比例加入生物素、10*YNB，紫外照10 min3. 接菌于 BMGY，250 rpm，28°C摇 24 h4. 向BMMY中按比例加入生物素、10*YNB、甲醇，紫外照10 min。

5. 将含有菌液的BMGY转移至50 mL离心管，4C 5000 rpm离心5 min，弃上清6. 用BMMY将沉淀菌体重悬，倒回瓶中，250 rpm，28C，摇3 d每24 h补一次甲醇。

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