培养基 无机磷基本培养基.doc

溶磷能力的定性及定量测定 培养基 无机磷基本培养基( NBRIP［6］: Glucose 10 g，Ca3 ( PO4 ) 2 5．0 g，MgCl2 5． 0 g，MgSO4 7H2 O 0． 25 g，KCl 0． 2 g，( NH4 ) 2 SO4 1 g，Deionized H2 O 1 000 mL，Agar 15 g，pH7． 0将菌株点接接种到相应培养基上，看看有没溶磷圈需要器材 配制 100ml 培养基 接种环、灭菌培养皿、酒精灯、记号笔等(2)采用比色法[ 20 ]测定 L144 菌株分泌生长素能力: 将菌株接种于盛有 50 mL LB 液体培养基的三角瓶中，置于转速 125 r /min、 温度 28 ℃ 的摇床培养 16 h 后, 取 L144 菌株培养液 1 mL 于试管中, 加 1 mL 比色液 (0.5 mol /L FeCl 3、 98% H2S O4 30mL、 蒸馏水 50 mL) , 对照为 L144 菌株培养液, 置于室温下 15 min 后观察颜色的变化 (粉红色为阳性,表示 菌株能够分泌吲哚乙酸 ( I AA) , 粉红色颜色越深表示分泌 I AA 能力越强; 无 色为阴性,表示菌株不能分泌 I AA)。

需要器材 LB 培养液、比色液（0.5 mol /L FeCl 3、 98% H2S O4 30mL、 蒸馏水 50 mL） 、 1ml 枪头、试管采用比色法测定根瘤菌分泌生长素( IAA) 能力, 测定培养基采用改良的刚果红 液体培养基, 组成: 0. 5 g K2 HPO4 .3H2O; 0. 2 g Mg SO4.7H2O; 0. 1 g NaCl, 1 g 酵母膏, 10 g 甘露醇, 10 mL 0. 25% 刚果红, 1 g NH4NO3 , 100 mg/ L 色氨 酸, 1 000 mL 蒸馏水, pH 值 7. 0 比色液配方: 0. 5 mol/ L FeCl3 , H2 SO4 30 mL, 蒸馏水 50 mL 后,取根瘤菌悬浮液 100 uL 置于白色塑料比色板上,加 100 uL 的比色液, 15 min 后观察颜色变化粉红色为阳性,表示菌株能够分泌 IAA ,粉红色颜色越深表示 分泌 IAA 能力越强; 无色为阴性, 表示菌株不能分泌 IAA1.3 可分泌 IAA 的内生细菌的筛选 采用含有 L-色氨酸(200 mg/L)的 R2A 液体培养基。

将分离纯化后的春兰根内生细菌接种于筛选培养基, 28℃, 180 rpm 摇床培养 4 d取 50 μL 菌悬液滴于白色陶瓷板上, 同时加 50 μL Salkowski 比色液(50 mL 35% HClO4 + 1 mL 0.5 M FeCl3)(Libbert & Risch, 1969) 将加入 50 μL 50 mg/L IAA 的比色液作为阳性对照白色陶瓷板于室温避光放置 30 min 后观察, 颜色变红者表示能够分泌 IAA分别将不同的生防细菌在 LB 液体培养基中振荡培养后（28 ℃ 200 r / min 20 h） ，吸取2 µL 细菌培养物，分别滴加在 β-1,3 葡聚糖鉴定培养基、铁载体鉴定培养基、果胶培养基、淀粉培养基、石蕊牛奶培养基平板上，平放在 28 ℃培养箱中，培养 2-5 d，形成明显菌落后，在果胶培养基、淀粉培养基平板上滴加碘液，平板呈蓝黑色，菌落周围如有不变色的透明圈，表示细菌产生果胶酶或淀粉酶，仍为蓝黑色表示不产果胶酶或淀粉酶铁载体鉴定培养基上的菌落周围如由蓝色变为桔黄色透明圈，则表示细菌产生铁载体，不变色表示不产生铁载体β-1,3 葡聚糖鉴定培养基、石蕊牛奶培养基平板直接观察透明圈产生情况，若有透明圈产生则表明菌株产生相应的酶。

产酶能力大小可用公式表示为：。