溴化乙锭替代物.doc

1---------SYBR Green I 可以替代 很多实验室现在已经在用了SYBR Green I 是高灵敏的 DNA 荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗至少可检出 20pg DNA，高于 EB 染色法 25-100 倍SYBR Green I 与 dsDNA 结合荧光信号会增强 800-1000 倍，用 SYBR Green I 染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低可适用于多种电泳分析SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等SYBR Green I 与双链 DNA 的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等）没有抑制作用另外，SYBR Green I 与 EB 相比，诱变能力大大降低 SYBR Green I 核酸染料特点 高灵敏：至少可检出 20pg DNA，高于 EB 染色法 25-100 倍信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低操作简单：无须脱色或冲洗适用范围广：可适用于多种电泳分析使用方便：不影响其它修饰酶作用。

经济：价格比银染便宜电泳用 SYBR Green I 使用方法 SYBR Green I 预染方法1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳 2. 工作液的配制：用电泳缓冲液将 10000×的 SYBR GreenⅠ稀释 100 倍，即为 SYBR GreenⅠ工作液SYBR GreenⅠ工作液可以置 2-8℃冷藏一个月以上 3. 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料 4. 样品染色：向分析样品中加入 SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置 10 分钟，使 SYBR GreenⅠ与样品中 DNA 充分结合SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的 1/10 5. DNA Marker 染色：将 5μL DNA Marker 和 1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置 5 分钟，使 SYBR GreenⅠ与 DNA 充分结合 6. 上样、电泳：按常规操作 SYBR Green I 后染方法1. 按照常规方法进行电泳 2. 用 PH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照 10000：1 的比例稀释 SYBR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。

3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光室温振荡染色 10-30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色 30 分钟玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上） 4. 用蓝盾 TM 观测蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾 TM 内观测 SYBR Green I 使用注意事项 1. 在“SYBR GreenⅠ预染色方法“中，电泳时间不要超过 2 小时，否则 SYBR GreenⅠ会从 DNA 上分离出来，会产生弥散状条带 2. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉 3. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的 SDS 4. 在紫外照射透视下，与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色 5. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。

建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器 2 -- -----GoldView™代替溴化乙锭（代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料）的新型核酸染料GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，其灵敏度与 EB 相当，使用方法与之完全相同，在 100ml 琼脂糖胶溶液中加入5µl GoldView™即可在紫外透射光下双链 DNA 呈现绿色荧光，也可用于染 RNA由于未发现 GoldView™有致癌作用，且灵敏度与 EB 相当，将有可能逐渐取代 EB 而得以广泛应用目目 录录 号号规规 格格价价 格格HGV-11ml85 元GoldView™ ™核酸染料核酸染料————使用说明使用说明概概 述述GoldView™是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测 DNA时，GoldView™与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与 EB 相当，使用方法与之完全相同在紫外透射光下双链 DNA 呈现绿色荧光，而且也可用于染 RNA通过 Ames 试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。

因此用 Goldview™代替EB 不失为一种明智的选择使用方法使用方法1. 将 100ml 琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为 0.8%~2%）在微波炉中融化2. 加入 5µl GoldView，轻轻摇匀，避免产生气泡3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳4. 电泳完毕在紫外灯下观察若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片注意事项注意事项1. 胶厚度不宜超过 0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度2. 加入 GoldView 的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显3. 通过凝胶电泳回收 DNA 片段时，建议使用 GoldView 染色，在自然光下切割 DNA 条带，避免紫外线与 EB 对目的 DNA 产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率4. 虽然未发现 GoldView 有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套电泳结果显示电泳结果显示 GV 灵敏度与灵敏度与 EB 相当相当中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所检验报告中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所检验报告。