动物蛋白消化率.doc

动物性饲料体外蛋白质消化率测定——胃蛋白酶法 1 范围该方法仅适用于动物性蛋白质饲料，如鱼粉、肉骨粉、酵母粉、血粉等体外消化率测 定该方法不适用于植物蛋白质饲料原料（如豆粕、菜籽粕、棉籽粕及其他杂粕）或 配合饲料，因为它们中存在的复杂碳水化合物如纤维性物质及淀粉等会干扰胃蛋白酶 对蛋白质的消化 2方法原理 脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断的搅拌下消化 16 小时，离 心分离不 溶性残渣，洗涤，干燥，测定残渣的粗蛋白量同时测定空白和未酶解试样 的粗蛋白含量 3试剂 3.12g/L 胃蛋白酶溶液 3.1.12g/L 胃蛋白酶溶液的配制 ① 移取 6.1ml 浓盐酸，加水稀释至 1000ml;②将上述稀盐酸加热升温至 42~45℃，取 下，然后加入 2g 活性为 1：10000 生化级胃蛋白酶，轻轻地搅动，使其溶解注 意：我们使用的为生化级胃蛋白酶 1：10000（北京鼎国生物技术有限责任公司） 3.1.2注意事项 ①所用的胃蛋白酶必须为生化级，如果有条件的，最好对其活性进行实测如果其 活性为 1：3000 或其他规格，应按照活性比例，相应增加或减少酶的用量，使胃蛋 白酶溶液中酶的活性为 20IU/ml。

因为胃蛋白酶溶液中酶活性的高低直接影响消化 率的高低如果与标准偏离，测定结果将无可比性，失去参考价值②溶液一定要 现用现配，避免配制时过热，注意勿在加热板或电炉上直接加热胃蛋白酶溶液，否 则会使沉于烧杯底部的酶直接局部过热而失活 3.2 乙醚 3.3 定氮试剂：按 GB/T6432 中试剂及配制方法规定 4 仪器、设备 4.1.1恒温式平转摇床：温控范围 20~50℃，转速可调（15~300r/min） 4.1.2实验用样品粉碎机 4.1.3索氏提取器、设备：按 GB/T6344 中仪器、设备规定 4.1.4定氮仪器、设备：GB/T6432 中仪器、设备规定 4.1.5实验室常用仪器设备 5 试样制备 取具有代表性试样，用四分法缩分至 200g,然后粉碎至全部过 40 目筛，混匀装于密 封容器，保存备用 6 测定步骤 6.1 脱脂称取 1~2g 试样用乙醚（3.2）脱脂（含脂肪小于 1%可不脱脂，含脂肪大于 1%~10%建 议脱脂，含脂肪大于 10%则必须脱脂） 脱脂方法可参照 GB/T6433 中粗脂肪提取方法 进行脱脂后的样品需烘干 6.2 胃蛋白酶消化称取脱脂烘干(6.1)后的样品约 0.4000g（精确至 0.0002g,含氮量约 5~80mg）于 150ml 三角瓶中，加入 25ml 新配制的并已预热至 42~45℃的胃蛋白酶溶液(3.1),要确保样品完 全被胃蛋白酶溶液浸湿，用取样袋封紧瓶口，将瓶夹于摇床（4.1）上，于 44~45℃恒 定搅动 16 小时进行保温消化。

6.2 残渣处理 从恒温摇床取下三角瓶，倾入 50ml 离心管，一并冲洗瓶壁仍倒入该离心管，使离心 管体积 40ml,配平后离心 7 分钟（转速 3000r/min）;倾去上清液，用水洗涤三角瓶倒入 离心管，连续洗涤离心二次最后，用少量水冲洗残渣并将残渣无损的倒入消化管， 将消化管置于 120℃烘箱烘干 6.4 粗蛋白测定将上述烘干的残渣按 GB/T6432 中方法测定粗蛋白含量（W2） 同时，称取脱脂烘干 后的样品 0.2200g（精确至 0.0002g,含氮量约 5~80mg）,直接按 GB/T6432 中方法测定 脱脂未酶解的样品中粗蛋白含量（W1） 7分析结果的计算及表示 7.1 结果按式（1）计算X（%）=(W1-W2)×100/W1式中：X——试样的胃蛋白酶消化率，%;W1——脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量，%；W2——脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量，% 所得结果表示至小数点后一位 7.2 允许差 每个试样脱脂后取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果 测定结果的相对偏差按 GB/T6432 中粗蛋白测定的相对偏差允许范围0.0.0.0.0.0.0.Î23。