烟草组织培养综合实验.doc

综合实验： 烟草组织培养烟草组织培养实验论文Experimental study on tissue culture of tobacco 报告题目烟草组织培养作者姓名肖贝 班级学号1203班 2012114010304指导教师王友如完成时间2015.9.20生物学实验教学烟草组织培养的研究肖贝（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院 生物1203班 湖北 黄石 435002）摘 要：烟草组织培养作为植物组织培养的常用植物，该实验通过对消毒的烟草种子先进性初代培养，接着取其外植体进行继代培养的研究，来改进现有的组织培养技术，为组织培养的应用打下好的基础关键词：烟草，组织培养，继代培养目 录引言 11 材料与方法 11.1 材料 11.1.1 实验材料 11.1.2 仪器设备 11.1.3 试剂及溶液 21.2 方法 31.2.1 烟草无菌苗的培养 31.2.2 反分化培养 31.2.3 继代培养 41.2.4 生根培养 41.2.5 组培苗的移栽驯化 42 结果与分析 42.1 烟草无菌苗的培养 42.2 反分化培养 42.3 继代培养 52.4 生根培养 53 讨论 5参考文献 5致谢 6湖北师范学院2011届生命科学学院本科毕业论文烟草组织培养的研究肖贝（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院 湖北 黄石 435002）引言组织培养是最基础的生物技术，它不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。

它的全面应用已使农业的生产走向集约化和工业化[1]烟草是植物组织培养的常用植物，有关烟草组织和细胞培养已有不少报道近年来在抗性研究、基因转化和次生物质生产等方面也取得一些进展植物组织培养也就是所谓的植物克隆，简单的说就是提取植物的根茎叶芽或一个细胞，通过生物技术手段，在很短的时间内诱导分化出与母体完全相同的植物植物的组织培养是一种无性繁殖，具有用材经济，生产周期短，繁殖系统大，培育无病毒苗，可获得新的突变体，降低成本提高工作效率的特点，还能保持亲本的优良性状，它是植物基因工程的重要组成部分，是植物基因工程研究的一项重要技术手段[2]1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验材料烟草种子1.1.2 仪器设备一、 常用仪器1. 蒸馏水器2. 手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅3. 分析天平 （AB204-N型，梅特勒-托利多仪器上海有限公司）4. 超净工作台5. 电热干燥箱烘箱 （WMK-02型，武汉电控仪器厂）6. 恒温光照培养箱7. 电冰箱8. 显微镜和解剖镜9. 旋转培养机10. 离心机11. 酸度测定仪：⑴ 精密PH4－7试纸；⑵ 笔型袖珍酸度计二、 必要的器皿（一） 玻璃器皿1. 培养器皿①试管 ②三角烧瓶（锥形瓶） ③培养皿 2. 盛装器皿 ①试剂瓶 ②烧杯3. 计量器皿 ①量筒 ②容量瓶 ③吸管4. 其它器皿　滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。

二）金属器械1.镊子 2.解剖刀 3.剪刀类 4.接种针1.1.3 试剂及溶液 一、试剂（一） 用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制二） 洗涤剂 1.　2HCl酒精:95%酒精100ml加入2mlHCl 2.　硫酸－重铬酸钾洗液　称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等还原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重铬酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用）这些器皿必须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液三） 1摩尔浓度(mg/L )NaOH 和1摩尔浓度（mg/L）HCl二、培养基1. MS培养基母液配制（单位：毫克　mg） 2. 分化培养基（BA培养基） 3. 生根培养基 (简称NAA培养基)MS0+6-BA(1mg/ml)+NAA(0.1mg/ml)+3%蔗糖+0.6%琼脂(PH5.8~6.0)1.2 方法1.2.1 烟草无菌苗的培养烟草种子用70%酒精浸泡60s，然后用1-5%次氯酸钠表面消毒15-20min（晃荡)，无菌水洗3遍后接种在大量元素减半的MS基本培养基上。

1.2.2 反分化培养烟草培养2~3个月后，从无菌苗上取叶片，然后用锋利的手术刀片将叶片切成0.5 cm见方的小块，置于反分化培养基（BA培养基）中1.2.3 继代培养每隔14天左右将烟草叶片置于继代培养基(BA培养基)中继续培养观察愈伤组织生长情况1.2.4 生根培养待愈伤组织生长烟草长出茎、叶后，将茎叶部分切下，置于生根培养基中(NAA培养基)，直至其长出根部1.2.5 组培苗的移栽驯化将生根的烟草组培苗从培养室取出，放在自然条件下1－2天，然后打开瓶口，再放置1－2天后移栽至室外2 结果与分析2.1 烟草无菌苗的培养经过二个月的培养，烟草种子长成一颗烟草，烟草没有被污染且长势很好说明用烟草种子培育烟草无菌苗成功2.2 反分化培养将叶片切段接种到培养基中培养，5天后外植体开始膨胀，再继续培养5天，切块膨胀成圆拱型，继续培养，切片周围开始有浅绿色半透明的愈伤组织形成图1 愈伤组织2.3 继代培养愈伤组织经继代培养后，慢慢分化出茎、叶 图2 愈伤组织的生长2.4 生根培养 由于培养基配制错误，烟草叶片的生根培养失败，实验失败3 讨论本次实验由于操作不当，生根培养基配制错误，导致实验失败。

但是，组员已理解实验原理，并在实验过程中，了解了实验室的纪律，掌握了基本的实验操作方法，有不小的收获 参考文献[1] 康实. 烟草组织培养的研究进展及运用前景. 楚雄师范学院学报，1999，（03）.[2] 张淑红. 植物组织培养及其发展方向. 辽宁省盐碱地可利用研究所，2003（06）.[3] 吴洪生. 植物组织培养中的染菌及预防. 扬州市农科所，2001,8（2）；239~240.致谢衷心地感谢王友如老师对本论文的尽心指导！附表：6。