维生素c设计性实验.doc

维生素维生素 C 设计性实验设计设计性实验设计————不同加工方式对水果维生素不同加工方式对水果维生素 C 含量的影响含量的影响一、实验目的：一、实验目的：1.学习和掌握维生素 C 的提取方法和维生素 C 的含量测定的原理和方法，加 强对对照实验的认识，学习设计对照实验，掌握使用分光光度计法测量样品中 维生素 c 的含量；2.通过自行设计实验，掌握基础的科研方法和技巧；3.了解各种深加工对水果中维生素 c 含量的影响；4.温度对水果中维生素 c 含量的影响二、实验原理：二、实验原理：维生素 C，又称抗坏血酸，是一种重要的水溶性维 生素，结构式如右图，有氧化型和还原型，在酸性条 件下更稳定 本次实验将对维生素 C 的各方面的适宜条件进行 实验，包括维生素 C 保持稳定的最适温度、最适 pH， 以及暴露在空气中对维生素 C 的影响本实验初步设计采用分光光度法 人体中所需的维生素 C 大多由新鲜的水果和蔬菜供给 由于维生素 C 在空气中很容易被氧化而损失，因此测定果蔬中维生素 C 的含量对人们日常通 过膳食补充维生素 C 具有科学的指导意义三、实验材料：三、实验材料：标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取抗坏血酸（Vc）10mg（准确 至 0.1mg） ，用 2%偏磷酸溶液溶解并定容至 100mL。

此溶液应贮存于棕色瓶中， 最好现用现配 新鲜橙子若干； 2%（W/V）偏磷酸溶液； 0.5mol/L NaOH 溶液；四、实验器材：四、实验器材：水浴锅，冰箱，分光光度计、石英比色皿、10mL 比色管、组织捣碎机、 高速离心机、100mL 容量瓶、250mL 容量瓶、移液管、吸耳球、玻璃棒，烧杯、 试管若干五、实验步骤：五、实验步骤：1、实验对照设计及实验前期处理、实验对照设计及实验前期处理取 9 份等量 100g 的新鲜橙子果肉（去皮后装入保鲜袋）分别记为 1 号、2 号、3 号、4 号、5 号、6 号 7 号、8 号和 9 号分别作如下处理：①①不同温度温度处理橙子后的维生素不同温度温度处理橙子后的维生素 C 含量含量将 1 号放入冰箱冷冻室（低温冷冻处理） ，2 号放在冰箱冷藏室（低温冷藏 处理） ，3 号置于室温下（即不处理） ，4 号先室温存放，实验前 100℃高温处理 2 小时 （注意：四组样品均装入保鲜袋中封口，以防止与空气接触 ） 两天后，将此 4 组橙果肉分别绞碎成浆，过滤，得到橙汁原浆；然后测量 各组试样中的维生素 C 含量， （每组测三次分光度值从而计算 VC 含量） ，并记 录相关数据。

相关情况见表 01，并将测得的吸光度值及维生素 C 含量的相关情 况填入表表 01 （表 01 中的温度具体数值在实验时在进行具体设定） ②②橙子深加工后对维生素橙子深加工后对维生素 C 含量的影响含量的影响1、取 100g 鲜橙果肉，100g 橙罐头进行脱水处理，测得其干重 a（鲜橙） ， b（罐头） ，求得含水量 a%, b%；2、取 100g 鲜橙果肉绞碎成浆，过滤，得到橙汁原浆 c ml； 3、取 100g 鲜橙果肉（5 号） ，100a/b g 鲜橙罐头（6 号） ，a/0.65g 橙蜜饯 （去皮，7 号） ，a g 橙子干（去皮，8 号） ，c/0.30 ml 橙汁饮料（橙汁原浆含 量 30%，另外若有添加 V c，应在试验后减去其含量） （9 号） ，分别捣碎，并配 置成 250 ml 待测试液，标记为 5，6，7，8，9 号试样； 4、将每个试样各取 10 ml 置于 3 个试管中，加入试剂，处理后分别测得各组试管的光度值计算出 Vc 含量填入表表0101附：表附：表 0101编号1 号2 号3 号4 号5 号6 号7 号8 号9 号————————鲜橙蜜饯罐头橙子干橙汁饮料温度或其他各种处理方式-20℃低温冷冻4℃储藏室温储藏100℃加热——————————第一次第二次吸光度 △A（A-A0）第三次平均吸光度V c 含量2、维生素、维生素 C 含量的测定含量的测定①①校准曲线的绘制校准曲线的绘制称取抗坏血酸10mg (准确至0. 1mg) , 用2% 偏磷酸溶解，小心转移到 100mL 容量瓶中，并加偏磷酸稀释到刻度，混匀，此抗坏血酸溶液的浓度为 100μg/mL。

吸取0. 00、0. 10、0. 20、0. 40、0. 60、0.80、1. 00、1. 20mL 抗坏 血酸标准使用溶液, 置于10mL 比色管中；用2% 偏磷酸定容，摇匀此标准系 列抗坏血酸的浓度分别为0. 00，1. 00，2. 00，4. 00，6. 00，8. 00，10. 0，12. 0 μg/mL以蒸馏水为参比,在波长243nm 处, 用1cm 石英皿测定标准系列抗坏血 酸溶液的吸光度抗坏血酸吸光度为A , 试剂空白吸光度为A0 , 计算吸光度差⊿A = A – A0 的值以吸光度差值⊿A 对抗坏血酸浓度C 绘制校准曲线②②样品的测定样品的测定样液的提取样液的提取: : 将上述9组（4+5）样品处理完毕后, 放入组织捣碎机中, 加 入100mL浸提剂, 迅速捣成匀浆得到浆状样品, 用浸提剂将样品移入250mL容 量瓶中, 并稀释至刻度, 摇匀若提取液澄清透明, 则可直接取样测定,若有浑 浊现象, 可通过离心来消除 （果汁可以不用捣碎） 样液的测定样液的测定: : 准确移取澄清透明的0. 1—0. 5mL 提取液,置于10mL的比色 管中, 用2% 偏磷酸稀释至刻度后摇匀。

以蒸馏水为参比, 在波长243nm处,用 1cm 石英比色皿测定其吸光度待测碱处理样液的测定: 分别吸取0. 1—0. 5mL 澄清透明提取液,加入6滴0.5mol/L 氢氧化钠溶液, 置于10mL 比色管中混 匀, 在室温放置40m in 后, 加入2% 偏磷酸稀释至刻度后摇匀以蒸馏水为参 比, 在波长243nm 处测定其吸光度3.结果计算结果计算由待测样品与待测碱处理样品的吸光值之差查校准曲线, 即可计算出样品 中维生素 C 的含量；也可直接以待测碱处理液为参比, 测得待测液的吸光值, 通过查校准曲线, 计算出样品的维生素 C 含量维生素 C 的含量公式：维生素 C 的含量：mg g／／100g=C*10*2500*250／／(1000*V)(1000*V)10：稀释后待测液的体积；250：所配试样的总体积; 1000：单位换算比；C —— 从校准曲线上查得抗坏血酸的含量, ug／ml ;V ——测试时吸取提取液体积,ml1)所有试剂配制最好用重蒸馏水 （去除水中的溶解氧）(2)样品取样后，应浸泡在已知量 2％草酸溶液中使抗坏血酸受损失以免发生氧化，使抗坏血酸受损失3)对动性的样品可用 10％三氯醋酸代替 2％草酸溶液提取；对含有大量 Fe的样品，如储藏过久的罐头食品可用 8％醋酸溶液代替草酸溶液提取。

4)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化4. 结果与讨论结果与讨论4. 1 反应条件选择反应条件选择4. 1. 1 测定波长的选择测定波长的选择维生素 C 是烯醇化合物, 具有—C=C—基, 在可见区无吸收, 在紫外区有吸收, 按实验方法, 分别对不同浓度的维生素 C 与试剂空白溶液在 200—400nm 波长范围内进行扫描, 结果见图 1由紫外吸收光谱图表明, 最大吸收峰在243nm因此, 选 243nm 作为测量波长4.1.2 溶剂的选择溶剂的选择由于维生素 C 极不稳定, 在样品前处理过程中, 防止抗坏血酸的氧化是非常重要的可采用添加偏磷酸、草酸的方法加以解决因为它们均能抑制抗坏血酸的氧化酶, 而起稳定作用但由于 2% 草酸在波长 243nm 处有非常强的吸收, 所以不能作为维生素 C 的提取液, 而 2% 偏磷酸虽然在波长 243nm 处有微弱的吸收, 见图 1, 可通过扣除其空白吸光值, 便可计算出样品维生素 C 的吸光值$A 因此, 本实验选择 2%偏磷酸作为分光光度法的溶剂4. 1. 3 静置时间的选择静置时间的选择根据维生素 C 在碱性介质中不稳定, 易分解的特性, 经过实验表明, 水果、蔬菜提取液加碱后的静置时间与浸提液取样量有关。

查资料可得，静置 40min 吸光度达最小值且稳定 （本步骤为 4.2 做基础）4 . 2 干扰物质的消除干扰物质的消除由于水果、蔬菜中成分复杂, 有些成分在紫外区 243nm 处也会产生吸收, 利用维生素 C 在碱性溶液中具有不稳定性,光值, 此法具有较强可在样品中先加入碱液, 调节溶液的 pH 值至碱性, 破坏样品中维生素 C, 用此液作为空白, 来校正干扰物质所产生的吸的专一性4.3 方法的相关性和检测范围方法的相关性和检测范围在优化的实验条件下, 校准曲线按本法测定, 数据见表 2, 最大吸光度值最好不要超过 0. 8A , 否则浓度过高容易造成曲线弯曲以吸光度差值$A 对维生素 C 含量作图, 得回归方程⊿A = KC+ B, （其中 K 为系数，B 为常数）相关系数 r 将数值填入下表：图 2标准溶液浓度（ug／ml）0.001.002.004.006.008.0010.0012.0020.00吸光度差值⊿A六、说明：六、说明：(1)所有试剂配制最好用重蒸馏水 （去除水中的溶解氧）(2)样品取样后，应浸泡在已知量 2％草酸溶液中使抗坏血酸受损失以免发生氧化，使抗坏血酸受损失。

3)对动性的样品可用 10％三氯醋酸代替 2％草酸溶液提取；对含有大量 Fe的样品，如储藏过久的罐头食品可用 8％醋酸溶液代替草酸溶液提取4)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化刘建、张明兴 设计 组员：徐昊宇、王小芒、苏立宇 2011.11.16。