单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系.doc

单纯疱疹病毒 2 型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系【摘要】 目的 探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒 2 型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法方法 实验分为 NGU 患者组和健康对照组免疫快速测定法(C C 快速法)检测沙眼衣原体(CT)，培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA 法)检测血清 HSV2 抗体，荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)检测尿道分泌物HSV2结果 NGU 患者组的 CT、UU 感染率分别为 23.27%和 30.91%NGU 患者组和健康对照组的 HSV2 IgG、IgM 、HSV2DNA 阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92% ，两组相比差异均有统计学意义 (P<0.05)NGU 患者组无 CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的 HSV2 阳性率为 33.33%，与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)结论 HSV2 是 NGU 的重要病原体之一FQ PCR 法作为 HSV 感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值 【关键词】 非淋菌性尿道炎；单纯疱疹病毒 2 型；血清学酶联免疫吸附实验；荧光定量聚合酶链反应非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)为最常见的性传播疾病之一，在欧美国家的发病率已经超过淋病。

近年来，NGU 发病率在我国逐年上升，占报告病例总数的第 3位，仅次于淋病和尖锐湿疣其病原体复杂多样，沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)和解脲支原体(ureaplasm urealtyticum, UU)是其中最主要的病原体[1 3]，但临床上相当部分的患者无明显病因有研究报道单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 与 NGU 发病有一定关系[4]为明确 HSV 感染与 NGU 发病的病因学关系，我们进行了 NGU 人群中 HSV2感染的流行状况的研究，现报告如下1 材料与方法1.1 临床资料 275 例 NGU 患者(NGU 患者组) 来源于我院皮肤科、性病专科及妇科门诊，其中男 165 例，女 110 例，均按卫生部制定的 NGU 的诊断标准选择病例[3]临床症状为尿痛、尿频、分泌物多、尿道口红、尿道痒、尿道不适、排尿不尽感等，每例至少有以上 3 种症状患者年龄 20-63 岁，平均 34.9 岁已婚 192 例，未婚 83 例，有婚外性行为者 78 例平均 NGU 病程 6.5 月对既往有生殖器疱疹病史及本次就诊时有可疑疱疹皮损者予以剔除。

对照组 61 例，为健康体检人员，男 24 例，女 37 例，年龄 27-44 岁，平均36.1 岁，CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌检测均为阴性1.2 标本采集和处理1.2.1 血清标本 NGU 患者组及对照组均抽取静脉血 2mL，离心后留取，-80 ℃保存1.2.2 分泌物标本 按常规方法用无菌一次性棉拭子自男性尿道 2-3cm 处和女性宫颈管内 1-2cm 处取材，拭子停留 10s 旋转取出NGU 患者组留取 3 份，分别接种 UU 培养基及用于 CT 和 HSV2 检测；正常对照组取 1 份，用于 HSV2 检测余置-4℃保存　　1.3 方法1.3.1 HSV2 血清抗体检测 血清样本以 ELISA 血清试剂盒( 海南华美生化公司产品)检测 HSV2 血清抗体，具体方法参照试剂盒使用说明1.3.2 分泌物 CT、UU 等检测 采用英国“立明”衣原体抗原免疫快速测定法(C C快速法)检测 CT；以支原体培养鉴定试剂盒(广东珠海市朗峰生物技术有限公司产品) 检测UU；阴道毛滴虫及念珠菌镜检由性病门诊实验室完成1.3.3 FQ PCR 检测 HSV2DNA PE Gene Amp 5700 型 PCR 仪为美国 Perkin Elemer 公司产品。

所用的 HSV2 荧光定量 PCR 诊断试剂盒购自中山医科大学达安基因诊断中心( 卫生部生物试剂定点生产单位)，试剂盒包括 DNA 提取液、HSV PCR 反应管、阳性定量参考品(107 基因拷贝/mL) 标本处理后，加入 PCR 反应管，放入仪器样品槽设置循环条件：93℃ 2min 预变性，93℃ 45s-55 ℃ 60s 先做 10 个循环后，再以 93℃ 30s-55℃ 45s 做 30 个循环，保存文件，运行反应结束后保存检测数据，分析结果2 结果2.1 NGU 的病因学构成 NGU 患者组中 CT 感染率为 23.27%(64/275),UU 感染率为30.91%(85/275)，阴道毛滴虫感染率为 0.73%(2/275)，念珠菌感染率为 1.09%(3/275)，HSV2 感染率为 19.63%(54/275)；两种以上病原体感染率为 20.46%(56/275)；原因不明者为 24.73%(68/275)2.2 两组 HSV2 IgG、IgM 、HSV2DNA 阳性率的比较 NGU 患者组中 HSV2IgG 阳性105 例，占 38.18%，正常对照组 HSV2IgG 阳性 11 例，占 18.03%，两者比较差异有统计学意义(χ2=8.966, P<0.005)；NGU 患者组中 HSV2IgM 阳性 30 例，占 10.91%，正常对照组HSV2IgM 阳性 1 例，占 1.64%，两者比较差异有统计学意义 (χ2=4.075, P<0.05)；NGU 患者组中 HSV2DNA 阳性 54 例，占 19.63%，正常对照组 HSV2DNA 阳性 3 例，占 4.92%，两者比较差异有统计学意义(χ2=6.669, P<0.01)；NGU 患者组中 102 例无 CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染，占 37.09%。

这 102 例患者中 HSV2DNA 阳性 34 例，占 33.33%，正常对照组 HSV2DNA 阳性 3 例，占 4.92%，两者比较有显著性差异(χ2=17.565, P<0.001)3 讨论NGU 是由多种病原体(除淋球菌外) 感染而引起的尿道炎的总称,其中 CT 是最常见的病原体NGU 中 30%-50%的病例由 CT 引起，10%-20%的病例由 UU 引起，约 1%-17%的病例由阴道毛滴虫引起，还有小于 10%的病例与 HSV、白色念珠菌、细菌性阴道病有关[5] 由于检测技术、病例选择、病例数量及地理分布的差异，各研究报告存在较大差异本研究结果显示，以 CT、UU 感染阳性率较高，其次为 HSV2，与 Chen 等[6] 的研究结果相近其中有 24.73%患者查不出上述病原体，因缺乏实验条件，未做鉴定有报道认为大肠杆菌、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌等可能成为 NGU 的致病菌本研究中是否也存在这种情况，有待于进一步证实文献报道[7]，ELISA 法是目前 主要用于检测 HSV 抗原或抗体的非培养方法，在没有生殖器疱疹临床损害而无法检测 HSV 抗原时，测定血清抗体具有它的优越性。

IgM 抗体一般出现较早，为一过性，提示患者正在感染期；IgG 抗体是在感染 1 周后出现，而且可持续很长时间，IgG 阳性代表 HSV 感染或曾经感染过 HSVBeauman[8]认为，在 HSV2 抗体阳性的患者中，20%有典型的皮损， 20%的患者可能无症状或皮损位于宫颈等隐蔽部位而不能发现，另外 60%的患者有皮损但由于不典型，表现为阴唇、阴茎及肛周的裂隙和局限性红斑等而不被注意本研究发现 NGU 患者组血清 HSV2 IgG、IgM 阳性率分别为 38.18%和10.91%，与谭志建等 [9]的报道相近，提示存在 HSV2 感染；而正常对照组HSV2IgG、IgM 阳性率分别为 18.03%和 1.64%，两组相比差异有统计学意义，表明应用ELISA 法检测 HSV2 抗体有一定意义近年来，HSV 引起 NGU 的情况越来越受到重视，但这方面的研究报道还很少血清抗体检测只能表明 HSV 曾经感染，不能证实活动性排毒，亦不能做出肯定的病因学关系判断[10]细胞学检查是最经典的直接诊断方法，从病变部位取材，通过组织病理和电镜观察病毒颗粒，但受取材部位和病变时机的影响，敏感性和特异性不高。

病毒培养法被认为是检测 HSV 的金标准，但操作时间过长，设备和技术条件要求高，临床上不易实施随着分子生物技术的发展，可用型特异性 DNA 探针进行核酸分子杂交用于检测 HSV DNA,与病毒培养法相比,PCR 检测 HSV 不受皮疹形态的影响，以其简便、快速、高敏感性和高特异性的优点引起人们重视其高度的敏感性就在于它不仅能检测 HSV，而且能检测 HSV DNA，对 HSV 感染有确诊意义，有利于 HSV 感染的早期诊断和及时治疗本研究采用的 FQ PCR 法因减少了人为干扰，避免交叉污染，其特异性和敏感性均较常规 PCR 法高[11] 结果显示， NGU 患者组阳性率为 19.63%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，102 例无 CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的 NGU 患者 HSV2DNA 阳性 34 例，占 33.33%，与对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.001)表明此种感染的病原体以 CT、UU、HSV2 为主，NGU 与 HSV2 感染的关系不容忽视HSV2 检测阳性中有 18例曾因尿道炎(宫颈炎)长期使用抗生素未愈，有 25 例曾多次测 UU、CT 均为阴性但自觉症状明显，因此，对 NGU 患者尤其是有症状而 UU、CT 均为阴性者或持久不愈者有必要进行 HSV2 感染的检测，以明确诊断。

患者组两种以上病原体混合感染率为 20.46%,提示患者中高比例的混合感染可能是导致临床持久不愈的原因之一，对 UU、CT 及其他病原体阳性的患者也应排除合并 HSV2 感染的可能重视对 NGU 患者进行 HSV2 感染的检测，对于控制 NGU 发病率的增长具有重大意义 【参考文献】[1]Totten PA, Schwartz MA, Sj str m KE, et al. Association of Mycoplasma genitalium with nongonococcal urethritis in heterosexual men [J]. J Infect Dis, 2001, 183(2):269 276.[2]Waites KB, Katz B, Schelonka RL,et al. Mycoplasmas and ureaplasmas as neonatal pathogens [J]. Clin Microbiol Rev, 2005, 18(4):757 789.[3]Horner P, Thomas B, Gilroy CB, et al. Role of mycoplasma genitalium and ureaplasma urealyticum in acute and chronic nongonococcal urethritis [J]. Clin Infect Dis, 2001, 32(7):995 1003.[4]Ralph Madeb. Need for diagnostic screening of herpes simplex virus in patients with nongonococcal urethritis [J]. Clin Infect Dis, 2000, 30:982.[5]Schwebke JR, Hook EW. High rates of trichomonas vaginalis among men attending a sexually transmitted dise。