电镜在病理学中的应用.ppt

电子显微镜技术及在病理诊断上 的作用电子显微镜技术及在病理诊断上的作用¡一、电子显微镜技术 ¡二、诊断病理学 ¡三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用¡四、讨论（一）概念¡电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术 概念电子显微镜技术 电镜精密仪器 样品制备技术 1、电子显微镜 ：是用电子束成像的显微镜，电子 显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较 高分辨率本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具 ¡发明背景：它是在发现电子束具有波动性质及利 用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发 明出的¡电子显微镜主要分为两种类型：一种是观察样品 内部超微结构的透射电子显微镜，另一种是揭示 样品表面形貌的扫描电子显微镜¡扫描电镜与透射电镜比较：（见下表）扫描电镜和透射电镜比较项目扫描电镜透射电镜分辨本领70～100 Å2 Å发大倍数20～40万倍100万倍加速电压1～50 KV几十千伏～几百千伏图像特点景深长长、三维维立体结结构景深小、两维维平面结结构样品制备固定-脱水-临临界点干燥-喷喷涂金属固定-脱水-包埋-超薄切片-重金属染色样品尺寸1cm350～100nm切片样品损伤光斑直径只有几十埃的电电子束在 样样品上扫扫描，对样对样 品损伤损伤 极小大约约1μm直径电电子束打到样样品上，造成一 定程度损伤损伤 样品成像信 号二次电电子、背散射电电子透射电电子发大倍数调 节用衰减器改变扫变扫 描线线圈电电流，进进 行放大率调节调节调调整中间镜电间镜电 流改变变放大率决定分辨率 因素入射电电子束直径决定图图像分辨率。

加速电压电压 、透镜缩镜缩 小率、电电源稳稳定度 及像差决定电电子束斑直径加速电压电压 、电电源稳稳定度、像差、样样品厚度 等影响分辨率本图片来自中科科仪本图片来自中科科仪2、样品制备¡透射电镜样品制备的常用方法：包括超薄切片、冷冻复型、 负染色等 ¡扫描电镜样品制备：比透射电镜样品制备简单除保存样品 表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和 切片制备方法与透射电镜样品制备方法一样 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用¡一、电子显微镜技术¡二、诊断病理学¡三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用¡四、讨论二．诊断病理学概述¡病理学是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能、代 谢变化的一门基础医学及其与临床医学之间的桥梁学科 ¡主要包括基础病理学、实验病理学及诊断病理学(以往称 外科病理学或临床病理学) 各级医院病理科所从事的工 作主要是诊断病理学 ¡病理检查内容通常包括活体组织检查、手术切除标本检查 、术中冰冻检查、细胞学检查、尸体解剖检查等 ¡病理检查的手段很多,如:HE 常规检查、特殊染色(组织化 学) 、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应( PCR) 、 电子显微镜检查、病理图像分析、流式细胞仪检查、细胞 培养、病理学( telepathology) 等。

电子显微镜技术及在病理诊断上的作用¡一、电子显微镜技术¡二、诊断病理学¡三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用¡四、讨论三．电子显微镜技术在病理诊断上的作用¡（一）电镜检查起决定性作用¡（二）电镜检查起参考和修正作用¡（三）电镜检查起验正作用三．电子显微镜技术在病理诊断上 的作用¡（一）电镜检查起决定性作用：电镜发现特异性超微结构 信息做出最后病理诊断例：男,39 岁,发现右侧颈部无痛肿物1 年余,花生米大,取 肿物做活检光镜:增大的淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡 与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞, 直径约20 μm核圆,卵圆或扭曲状间有增生的淋巴细胞 及嗜酸性粒细胞电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质 宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构(Birbeck 颗粒) ,证明光 镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞(图1) 诊断为淋巴结 朗格汉斯细胞组织细胞增生症电镜诊断具有独特的确诊 价值图1 朗格汉斯细胞组织细胞增生症:见双模构成的似网球拍状的Birbeck 颗粒 EM ×10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁 敏, 张洁 茹等.235例疑难病理标本的电镜诊 断价值 .临床与实验 病理学杂志;2002 ;15（5）（二）电镜检查起参考和修正作用：电镜获得的信 息对光镜结果予以补充或修正,最终做出最后病理诊 断。

例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊经淋巴结活检,病理诊 断为淋巴组织增生不久颌下淋巴结又肿大,再次淋巴结( 颌下) 活检病理诊断为恶性淋巴瘤(免疫母细胞型) 电镜: 瘤细胞大、多边形或不规则形,核质比大,核膜弯曲,不规则 或奇特的内陷,核常染色质丰富,网栏状大核仁少许胞质 突,胞质内核糖体丰富,其他细胞器稀少质膜间见发育不 良的桥粒样连接(图2) 最后病理诊断为颌下淋巴结转移 癌随后临床发现鼻咽癌原发灶此例电镜有确诊价值图2 转移癌:瘤细胞大、长圆形,胞核大、梭形,核膜不平滑,显著增大的核质比质膜 间有桥粒样连接,胞质含少许欠发达的细胞器,网栏状大核仁,两团染色质间颗粒EM ×10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 .临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5）（三）电镜检查起验正作用：超微结构信息进一步 证实、丰富了光镜的组织学诊断 例：男,30 岁,肝穿活检光镜诊断:慢迁肝虽未见典型碎 屑样坏死,但不除外活动性变化电镜见肝细胞大,疏松,细 胞周围间隙加大,有微绒毛化,滑面内质网增生,内含管状体, 肝窦内充塞胶原纤维有的区域见部分肝细胞胞质有胞溶 ,周围有淋巴细胞浸润。

最后电镜诊断:慢性迁延性乙型病 毒性肝炎有轻微活动(图3) 电镜有确诊价值图3 慢性迁延性乙型病毒性肝炎:滑面内质网增生,腔内含量多的乙肝表面抗原 管状体EM ×8 000注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 .临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5）四、讨论¡国内外对电镜诊断的价值,在肿瘤应用方面报 道较多,Gyorkey 等65 %¡文献中电镜诊断价值的比率高低不同¡主要原因是病例的选择不太相同,使用标准、 统计的方法也不同¡还有检查者的光镜诊断水平或侧重点不同等 因素也有关 应用电镜做最后病理诊断工作,有以下几点注意：¡(1) 由于电镜费用较高,制作程序繁杂,应有选择地送电镜检 查有的临床医师,认为电镜是优于光镜的先进技术而盲 目送检,如胃镜取胃黏膜活检无选择的送电镜检查,造成资 源、人力和财力的浪费¡(2) 电镜标本要求尽可能活体取材,立即投入预冷的固定液 中固定,以利完好地保存细胞的超微结构 ¡(3) 涉及病原学诊断,特别是怀疑病毒、支原体、衣原体等 微生物感染的标本应充分使用电镜 ¡(4) 作为辅助手段应用电镜时应做到: ¡①在光镜观察基础上有的放矢地做电镜观察 ¡②半薄切片选区定位要求准确 ¡③超微结构观察仍应依次行组织学和细胞学观察, 根据需要采取不同的放大倍率观察 ¡④树立电镜观察是为获得组织细胞的超微结构病 理信息的观念,而不是代替光镜诊断。

¡因此,如同战争中使用常规武器与战略武器的 关系,在病理诊断过程中能用光镜者不用电镜, 只在必要时辅以电镜、免疫组化检查当然, 应用电镜深入研究细胞细微结构在疾病发生 和发展中的变化,许多工作有待开展。