诊断试剂生产的培训资料8585_(可排版).doc

体外诊断试剂生产知识第一节 诊断试剂盒一、 概念：诊断试剂是在实验室内检测患者冇无疾病的科学工具，检测结果的正确与否 直接影响到医生对患者的医治简单地说：凡用于检测各种疾病或机体功能的试 剂统称为诊断试剂试剂盒是一组试剂和材料，人们可按提供的说明书规定的程序进行操作按 GMP规范，用于人或兽的疾病检测，应属药品范畴9>1979年IFCC （国际临床化学协会）给商品试剂盒的定义：两种或 两种以上的临床或普通实验室使用的材料（不包括复溶物质），可带冇其他操作 所需的组分组成的包装称试剂盒二、 分类：按用途分为：临床生化试剂盒、临床免疫试剂盒、分子生物学试剂盒、微生 物诊断试剂盒、临床检验试剂盒、其他特殊用途试剂盒（如快速诊断试剂盒）按剂型可分为：干粉试剂盒、液体试剂盒（分单液体试剂盒、液体双试剂、 多液体试剂盒）、混合型试剂盒（有干粉、有液体）三、 生化试剂盒的发展（一）l>.自配试剂向商品化试剂盒过度1. 标本量需求增加，报告时间要求短（检验周期短）2•酶试剂方法应用增加，酶试剂方法的优越性已被广泛认可，但口配难度较大3. 检验质量要求提高，尤其是各实验室之间要求较高的可比性。

4•生化分析仪的普及，提供了试剂盒的用武Z地5.试剂盒直接成木占整个检验科支出比例小，在实验室成木中吋间（人员工 资）占主要因素液体试剂盒逐渐取代干粉试剂盒1•使用方便2、 随意取需要量，浪费少3、 均一性好，批间变异小4、 新型稳定剂的使用，生产工艺、技术的改进，提供了技术保证单液体试剂盒向液体双试剂发展1、 双液体试剂抗干扰能力强2、 大型分析仪的普及（可使用双试剂）、不影响通道数量四）专用配套试剂盒的出现，使用更方便7060 系列适用于日立 7150、7060,岛津 7200、7300、80007170 系列适用于日立 7170、7600,奥林巴斯 600、640、400、1000> 2700日立7020专用贝克曼专用杜邦专用（五）方法学的进步，逐步取代了手工方法和老方法（化学法）例如：总胆汁酸循环酶速率法试剂盒（高灵皱度）肌酹氧化酶法取代化学速率法（A）：特殊用途试剂盒的应用，在一定条件下冇更多的优点双项同测试剂盒（总/直接胆红索、胆固醇/甘油三脂试剂盒）可减少通道数浓缩试剂特别适合于大批量检测项目（如肝功能体检）四、各类生化试剂盒的性能比较（一）干试剂1、 干粉试剂：按照配方将几种原料加上必要的激活剂、稳定剂、赋形剂一 起球磨，按量分装、密封冷藏，临用时按一定量的蒸憾水溶解后使用。

2、 冻干试剂：把试剂有关成分先用少量蒸镉水溶解后冷冻干燥3、 片剂：常与液体试剂一起组成混合型试剂盒，技术要求最低将稳定的 部分配成溶液（如缓冲液）经高压灭菌后保存，将不稳定成分制成片剂共同特点：含水量少，酶、辅酶、色原、底物等稳定性好，但均需复溶，批 内批间重复性差优点：稳定期长，运输方便，不需较高的稳定技术既可达到较长的稳定期缺点：溶解（复溶）后稳定性羌，结果重复性不好、试剂浪费大、受实验室 水质影响人（二） 单液体试剂优点：使用方便尤其适合于半口动生化分析仪及小型口动生化分析仪缺点：1、稳定性不如干试剂和液体双试剂2、 抗干扰能力差3、 方法学缺陷：无法进行预反应，无法做样品空白（三） 双液体试剂1、 按比例混合后等同于单液体试剂，但分开保存稳定性明显优于单液体试 剂2、 检测准确性大大提高：A、 可做样品空口：总蛋口的测定、比浊法B、 消除内源性干扰，提高检测准确性：如内源性丙酮酸对ALT/AST干扰, 内源性NH3对BUN干扰,维生素C对氧化酶法TCH/TG/GLU/UA/HDL/CRE干扰‘FG对TG干扰3、有些方法必须分两步进行：如直接法测定高低密度胆•固醇缺点：1、试剂1中往往需加入抗干扰的原料，势必会增加成本2、 对于小型生化分析仪因占用通道多了一倍，势必造成通道紧张，如 70203、 根据以上原因要发挥•其优越性，需高档分析仪强调一点：同一方法试剂盒，其最后有效成分基本一致，既干粉试剂复溶后 与双液体试剂按比例混合后与液体单试剂其有效成分是基木一致的。

也就是说双 液休试剂按比例混合后可在任何分析仪上使用，只是抗干扰性能发挥不出来，稳 定性可能不如液体单试剂和干试剂，而冃成本更高即使不是真正的液体双试剂 （指在试剂1中不加入抗干扰成分，既通常所说的双试剂液体型），由于可做样 品空白，也优于单一-液体试剂和干试剂而且，从制造工艺角度讲，稳定期一致 的前提下，难度：液体单试剂>双试剂液体型>严真正的液体双试剂>干试 剂五、生化试剂盒性能的评价指标1、 准确性：方法原理的先进性、配方的优化、原料的來源及用量：原料酶 应纯度高、杂酶少，用量按推荐配方用量越多越好” ？标准的可追溯性2、 重复性：A、批内重复性主耍取决丁•分析仪器的重复性（加样系统、比 色系统等）、试剂工作液的稳定性、试剂Z间的交叉干扰等B、批间重复性：主要取决于生产厂家原料的一致性3、稳定性：A、试剂盒保存的稳定性：4・8度一年、25度一月B、工作液的稳定性： 4・8度>2天、25度>24小时4、实用性:仪器的适用性，方便性，价格A、 仪器的适用性：样品用量/试剂用量，反应吋间，线性范围，可测范围， 灵敏度，试剂种类，波长B、 方便性：可否直接上机，直接使用C、 价格：每毫升的价格，每测试的价格前提是方法相同，准确性一致六、生化试剂盒性能的评价方法试剂空白吸光度控制在一定范围:1、 用来检查某些试剂的质量，如总蛋白（双缩服）0.085-0.1152、 NADH负反应时可以判断NADH的用量和稳定性，“试剂空白吸光度越高 越好”…得看NADH的质量3、 正反应吸光度不宜过高，否则可能底物水解过多或色原变质试剂空口吸光度变化速率越小越好:1、底物水解过快2、朵酶过多时间 进程曲线：1、 终点法观察到达终点的吋间（葡萄糖测定试剂）■•抗体的效价2、 速率法观察延滞期和线性期的氏短一辅助酶的用量3、观察标准与测定管的反应是否一致，以判断基质效应的大小准确度：1、 有标准品的可以用冋收实验验证2、 无标准品的可以用偏差测定来判断（如酶活性）但丽提是用公认的定值 血清3、 剂量■反应曲线：用高浓度的未知值的血清对比稀释后观察剂量■反应关 系4、 对比实验：稳定性观察：两次（或两批试剂）定标Z间K值的差别，空白吸光度的差别，标准管吸光 度的弟别。

只要重复性好就好，因为可以改动K值” ••重复性好说明仪器？还 是试剂？笫二节诊断试剂生产的各个环节一、原材料1. 范围和概念2. 来源与采购原则3. 原材料的质量控制原材料：凡试剂生产过程中使用物质的统称包括各种生物化学、化学及其 他性质的原料及辅料，直接接触试剂或其组分的包装材料、菌种、生物材料，乃 至工艺用水批：一个生产周期制造出来的一定数量的试剂同批试剂中的特性应是均一 的，对量冇限定批号：用以鉴别试剂的生产批半成品：必须接受同步加工的试剂中的主要成分成品：批经质量控制合格后的最终产品二、 试剂生产的主体人员、厂房、设备、卫生三、 试剂盒生产流程制造工艺规程、生产管理文件、质量管理文件四、 质检原材料、半成品、成品五、 销售1、销售记录2、退货记录3、售后服务诊断试剂生产的质量管理六、质量与质量管理质量：特异性：结果准确可靠、灵敏度、稳定性、重复性、简单易行、价格 便宜质量管理的儿个阶段第一层次质量控制（QC）满足质量要求和符合规章的作业技术，主要指室内质量控制（IQC）质量控制（QC）的要求1、 设施、安全管理制度2、 配方、生产工艺、器材、仪器、原料、质控品、校准品、供应品3、 操作手册（SOP文件）4、 仪器和检验系统的维护5、 室内质控6、 纠正措施7、质控记录操作手册（SOP文件）1、 原材料、辅助材料（包括外购试剂分装和标准液）的采购、检验、出入 库、保存2、 每个品种中的组分（包括标准品）有明确的配方和生产工艺要求3、 每种试剂盒有统一的组分组成，标签、说明书、批号等管理文件4、 半成品抽样检验方法和质控指标5、 成品的抽样检验方法和质控指标6、 室内质量控制规则和失控限7、 质控不合格时的报告制度和处理方法8、 半成品、成品的保存9、 不能及时生产的补救措施手册必须曲现任主任签字批准和注明D期，必须保存副本直到停止使用两年第二层次 质量保证（QA）表明一个组织能满足质量要求的有计划和系统活动。

主要指室间质量控制(EQC)从质量为中心通过让顾客满意达到长期成功的管理途径室间质评为了说明实验室结果的准确性，实验室必须将自己的检验结果和其他实验室 结果进行比对(PT) oPT (ProficiencyTesting)能力比对检验历史：30年代美国国家疾病控制中心CDC—TP40年代美国临床病理学会CAP-Hb1967年美国国会通过临床实验室改进法案(Clinical Laboratory Improvement Act) CLIA, 671988年美国国会通过临床实验室改进法案修正案CLIA, 88, T 1992年实施我国国家技术监督局下成立了 "国家实验室认口J委员会” CNCAL,以CLIA, 88为准则，体系类似IS09000o 口前已认可的有卫生部临检中心和上海市临检中 心室内质评是长期而有效的质量控制手段室间质评仅仅反映某实验室的最佳水平第三层次质量体系(QS)为达到质量口的全面和协调的工作第四层次质量管理(QM)还包括质量成木管理是指对组织的资源进行冇效整合以达到组织既定目标与责任的动态创 造性活动质量管理是指确定质量方针、口标和职责，并在质量体系中通过质量策划、 质量控制、质量保证和质量改进，使其实施的全部管理职能的所有活动。

第五层次全面质量管理(TQM)一个组织以质量为中心，以全员参与为基础，口的在于使顾客满意和组织所 有成员及社会受益而达到长期成功的管理途径第三节临床生化方法的选择一、方法和标准品的分级(―)方法的分级临床牛化成分的测定方法很多，根据其准确度与精密度的不同可以分为三 级1 •决定性方法(definitive method)是指准确度最高，系统误差最小，经过 详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果 为“确定值”，与“真值”最接近由于技术要求太高，费用昂贵，不直接用于鉴定常规方法的准确性，只用于发展及评价参考方法和标准品2•参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析 方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计， 冇适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围这类方法应在条件优越的 实验室中应经常使用但它主耍应用于鉴定常规方法，评价其谋差大小，干扰因 索，并决定其是否可以被接受它也用于鉴定二级标准品，为质控血清定值，也 可用于评价商詁试剂盒等3•常规方法（routine method）常规方法的性能指标符合临床或It它目的需 要，有适当的分析范围，而且经济实用。

所谓偏差已知的方法是指准确度已经确 定的方法，其准确度不明者称为偏差未知的方法常规方法在作出评价以后，经 有关学术组织认可，可以作为推荐方法标准品的分级国际标准化委员会将标准品（参考物）的。