无菌薄膜过滤法模版.docx

产品无菌检查方法适用性试验1、样品信息样品名称生产厂家规格型号批号2、培养基及试剂名称生产厂家批号硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆月东液体培养基胰酪大豆月东琼脂培养基0.9%无菌氯化钠溶液沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基冲洗液及稀释液3、菌种基本信息:菌种名称菌种来源菌种编号菌种代数金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003大肠埃希菌CMCC(B)44102生泡梭菌CMCC(B)64941枯草芽泡杆菌CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)980034、菌液制备：2.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽泡杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆月东培养基中或胰酪大豆月东脂培养基上,30〜35°C培养18〜24小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液2.2接种生泡梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35°C培养18—24小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液2.3接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25°C培养24〜48小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。

2.4接种黑曲霉菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25°C培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将饱子洗脱然后，采用适宜的方法吸出饱子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌泡子悬液5、菌落计数:菌种名称稀释级别菌落计数cfu/ml金黄色葡萄球菌大肠埃希菌生泡梭菌枯草芽泡杆菌白色念珠菌黑曲霉6、无菌检查薄膜过滤法方法适用性试验：6.1供试液准备：描述供试液制备过程(每个试验菌取样品10个)6.2试验组：取1个封闭式薄膜过滤器，每个过滤器取上述6.1中制备的供试液总量进行薄膜过滤后,用 进行冲洗，冲洗 次，每次 ml,在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、过滤，加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基至滤筒内；大肠埃希菌、生泡梭菌、枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、黑曲霉按照上述步骤操作，其中大肠埃希菌、生泡梭菌加入硫乙醇酸盐流体培养基，枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、黑曲霉加入100ml胰酪大豆月东液体培养基6.3对照组：另取6个封闭式薄膜过滤器，其中3个滤筒内分别加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，并在每个滤筒内分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生泡梭菌；另3个滤筒分别加入小于100cful枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，并在每个滤筒分别加入胰酪大豆月东液体培养基。

注：6.1和6.2中供试液的制备过程、每个滤筒内过滤供试液的量、冲洗液种类、冲洗次数、每次冲洗量由企业根据产品的特性和药典的要求确定6.4培养：上述培养基置规定的温度培养，培养时间不超过5天，逐日观察记录各管试验菌生长情况6.5验证结果:培养基硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆月东液体培养基培养时间（d）1234512345金黄色葡萄球菌试验组/////对照组/////大肠埃希菌试验组/////对照组/////生也梭菌试验组/////对照组/////枯草芽泡杆菌试验组/////对照组/////白色念珠菌试验组/////对照组/////黑曲霉试验组/////对照组/////“/”表示不适用；”表示试验菌生长微弱、缓慢或不生长；“+”表示试验菌生长良好与对照管相比，含供试品各容器中的试验菌均生长良好，表明*********产品的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查6.6供试品无菌检查方法的确定：取供试品20个，以无菌操作拆开每个包装，供试液制备方法（同6.1）,取两个封闭式薄膜过滤器进行过滤，每个滤筒过滤 ml的供试液后用进行冲洗，冲洗 次，每次冲洗 ml,滤筒内分别加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基和100M胰酪大豆豚液体培养基。

另取供试品10个，以无菌操作拆开每个包装，供试液制备方法（同6.1）,用一个封闭式薄膜过滤器进行过滤，每个过滤器过滤 ml的供试液后按上述方法进行培养，并接种小于100cfu的作为 阳性对照按《中华人民共和国药典》2015年版四部1101无菌检查法中规定的薄膜过滤法进行试验注明：供试品无菌检查方法有关培养基装量及供试品用量应根据该检品方法验证的用量6.6条既是技术要求中无菌试验修改的内容检验人:复核人:。