CyclinEKi67在喉鳞状细胞癌的表达及临床病理学意义.pdf

内蒙古医学院硕士学位论文CyclinE,Ki-67在喉鳞状细胞癌的表达及临床病理学意义姓名：郭建华申请学位级别：硕士专业：耳鼻咽喉科学指导教师：李建瑞;李玲香2003.6.1中文摘要目的探讨c y c l i nE ，k i 一6 7 在喉鳞状细胞癌的表达及临床病理学意义方法采用免疫组化技术检测1 0 例声带息肉，2 0 例不典型增生病变和5 0 例喉鳞癌组织中c y c l i n E ，l 【i 一6 7 的表达结果c y c l i n E ，1 【i 一6 7 阳性表达定位于细胞核，c y c l i nE 在喉癌细胞的阳性表达率为6 ％( 3 ／5 0 ) ，同声带息肉组1 0 ％( 1 ／1 0 ) ，不典型增生组1 5 ％( 3 ／2 0 ) 比较，无统计学差异( P > 0 ．0 5 ) ，但c v c l i nE 在喉癌间质血管内皮细胞阳性表达意义显著，同临床分期及淋巴结转移与否相关( P 0 ．0 5b ：P O ．0 5 ) ，说明c y c l i nE 的表达呈非特异性，c y c l i nE 阳性表达可普遍存在于正常细胞，化生细胞及肿瘤细胞，c y c l i nE 对于鉴别良、恶性细胞无特殊意义。

本实验中4 1 例无染色反应的喉癌样本，其临床分期多为Ⅲ、Ⅳ期，k i 一6 7L I 相对也较高，说明以增殖指数检测到的增殖态细胞并不受c y c l i n E 作用，喉癌中c y c l i n E 不参与喉癌细胞的增殖过程，喉癌的发生发展可能不依赖c y c l i nE 的生长刺激作用L a ∞融i 等【1 3 】曾观察到甲状腺癌细胞中缺乏c y c l i nE 阳性表达，S u t h e H lb 1 0 t t i n g 分析样本所有甲状腺肿瘤的D N A 基因组提取物发现c ”l i nE 基因既无重大遗传改变又无基因扩增，同时N o 汕e r i n gb l a 砸n g 分析显示良、恶性甲状腺瘤中c y c l i nEr n R N A 表达水平与正常组织无统计学差异，不能测出m R N A 过表达由此，他们提出c ”l i nE 与甲状腺的致癌过程无关M d 0 S等【1 4 ’在巴雷特食管( B a n _ e t tE s o p h a g u s ，B E ) 的研究中认为c y c l i nE 阳性表达对鉴别细胞的良、恶性无特异性他们观察到即便c y c l i nE 在恶性病灶有阳性积累，但癌前病灶及再生性化生上皮中亦有相似比率的阳性表达，故c y c l i nE 过表达不止意味着恶性转化，它还是上皮再生的一种结果。

我们的研究表明c y c l i nE 或许与喉癌的早期发生无关，这与王建波等∞] 在喉癌研究中的结果相悖尽管c y d i nE作为肿瘤相关因子的证据越来越多，但c y d i I lE 并不全是作为正性调节因子K —i 等Ⅲ】研究侵袭性膀胱癌时发现c y d i nE 低染和k i 一6 7 高指数，低分化分级，肌肉侵袭及淋巴结转移有关掣d i nE 蛋白水平与1 【i 一6 7L I 呈负相关，q r d i I lE 高水平表达说明肿瘤恶性程度低他们还看到由表层细胞癌 到侵袭性膀胱癌，州i nE 水平逐渐降低，P k z D l 等的研究也得出一致结论ⅢJ 另外，L i 等汹3 在结肠 癌中研究c y d i n E 表达时发现，原位癌中，酬i n E 减少与肿瘤大小，静脉侵袭，深层浸润，淋巴结转移， 腹膜转移以及临床晚期，不良预后相关从原发灶到肝转移灶，酬．mE 呈明显减低，可见c y c l i nE 主要起负调控作用然而，令人迷惑的是同一组资料中，结肠癌致癌过程中c y d hE 水平显著增高，而从原发灶到淋巴结转移灶，c y c h n E 蛋白水平保持不变所以q ，c h n E 在结肠癌进程的不同阶段，发挥着不同的作用，其机理不明。

据作者分析，第一，c y c l ．mE 的作用具有细胞特异性，S g m b a t o 等1 2 7 J 研究发内蒙古医学院硕士研究生学位论文( 2 0 0 3 ) 0 6o现所涉及的五种细胞株中，R a t l 和N I H B l 3 及M 6 F —1 0 中，c ”l 证E 表达增高，而人细胞株1 8 4 8 5 和部分鼠细胞株H C l l 中，c y c l i nE 表达未见增高且抑制细胞的生长第二，勖u l j a I 等∞1 关于细胞周期素的一项研究表明，正常情况下，p R b 磷酸化需要c y c l i n B ／C D I ( 4 先于c y c l i n E ／C D I ( 2 ‘驯，然而一些恶性细胞会优先利用一种c y d i n 行使磷酸化p R b 的任务而使另一种c y c Ⅱn 显得多余在一些恶性肿瘤，恶性细胞对c y c l i n E 相对较为敏感，c y d i n E 被激活发挥其促癌作用在另一些肿瘤，恶性细胞更易于同另外类型的c ”1 i n 作用从而使锣d i nE 失活呈低水平甚至难以被检测到作者认为喉癌的癌细胞恰属于后者第三，胞外信号分子刺激降低了q ，c l i I lE 表达的敏感性。

肿瘤细胞的增生分化处于复杂的内外部环境中，增殖控制由胞外信号和细胞周期机制的共同协凋而起作用，这种协调在肿瘤中往往失去如T G F —B 可使靶细胞停止于G 1 晚期，它通过P 2 7 结合于C D K 2 ／c y d i n E 而使后者的活性受到抑制若肿瘤细胞受T G F —B 这一抗丝裂原的作用过强，则会导致c y c b n E 活性下降某些胞外信号的影响也许对喉癌肿瘤细胞中c y c I i nE 表达起到抑制作用总之，由于c ”l i nE 作用方式的多样性，它对不同的恶性肿瘤产生不同的影响，我们的结果表明c y c l i nE 很大程度上不参与喉癌细胞的癌变过程 然而，在肿瘤间质，我们发现酬i nE 的大面积阳性染色，尤其在血管内皮细胞据统计结果，每 高倍镜下平均阳性血管数为4 4 倩倍镜，并可见血管q c l i nE 阳性数与』临床分期及淋巴结转移与否相关( P < O ．0 1 ) c y c I i n E 在血管内皮细胞核表达，说明c y c l i n E 参与肿瘤的血管生成实体瘤的生长和成熟组织的生长、重建、再生一样伴随着血管生成，肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的形态学基础，它不仅向肿瘤提供充足的营养，同时也向机体输出细胞，促使肿瘤细胞的恶性生长并导致转移∽、3 “。

在血管生成刺激作用下，内皮细胞可以重新进入细胞增殖周期，降解内皮细胞下的基底膜，形成毛细血管芽胞，然后通过芽生方式向周围组织中形成毛细血管，这时处于增殖周期的内皮细胞退出增殖周期，分化成新的血管这一血管生成的过程中，其影响因素为组织中的细胞环境，以及内皮细胞增殖、迁移、分化、生存的词控本研究观察到c y d i nE 在血管内皮细胞呈阻性高表达，提示血管内皮细胞正 处于增殖状态，血管内皮增生旺盛F o I b m 等【3 2 ’早在1 3 年前就提出血管发生与肿瘤的恶性生物学行为密切相关由此可见，c y c l i n E 在肿瘤间质，尤其是血管内皮细胞的阳性表达说明c y c l i n E 在血管生成过程中起作用我们的实验进一步得出结论，Ⅲ、Ⅳ期喉癌c y d i nE 阳性血管数显著高于I 、Ⅱ期，淋巴结转移样本c y c l i nE 阳性血管数显著高于淋巴结未转移者，说明间质中c ”I i nE 阳性表达对于间接评估喉癌的恶性程度有参考价值另外，作者看到肿瘤细胞浸润区的阳性血管数较肿瘤外周组织的阳性反应数量明显增高，虽未经统计学处理，但这一现象能从另一侧面反映血管增生支持肿瘤进展，c y d i n E 参与肿瘤演进。

本研究还检测了l 【i 一6 7 在喉癌中的表达情况及其与c y c l i nE 表达的关系k i 一6 7 是G e r d e s 等1 9 8 3 年发现的新核抗原，它是一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，与细胞半保留复制相偶连，在有丝分裂的G l 、岛、M 、S 期都表达，其中G 2 、M 期表达最强，G o 期不表达【3 ”k i 一6 7 是一种仅在细胞周期增殖阶段释放的蛋白，其表达可反映肿瘤细胞的增殖活性，与恶性肿瘤的发生、发展和预后密切相关‘⋯近年来，k i 一6 7 已成为常用的能较好反映细胞增殖指数及判断预后的指标我们的研究发现k i 一6 7 在喉癌中的阳性表达率为7 8 ％，但同一样本中k i 一6 7 阳性表达区未见c ”I m E 表达，说明喉癌细胞增殖机制并不涉及c y c hE ，c y c h nE 或因受到其它因子抑制不表达或因其它c y d i n 优先表达而呈低水平表达总之，k i 一6 7 阳性表达不与c y c l mE 在癌细胞的表达相一致同时，我们的结 果显示k i 一6 7 在声带息肉组，不典型增生组及喉癌组的阻性表达率分别为1 0 ％( 1 ／1 0 ) ，2 5 ％( 5 脚)。

由蒙古医学院硕士研究生学位论文( 2 0 0 3 ) 0 6和7 8 ( 3 9 ／s 0 ) ，统计学分析有显著差异( P < O ．0 1 ) ，且k 卜6 7L I 与组织学分级，临床分期及淋巴结转移与否有关，这与其它研究者在乳腺癌、胃癌、大肠癌等恶性肿瘤中溯得的结果相符∞一⋯，说明】【i ～6 7 能够反映喉癌的恶性程度，可作为鉴别良恶性病变的因子另外，k i 一6 7 L I 同喉癌间质中q d i l lE阳性血管数显著正相关( P < 0 ．0 0 1 ) ，1 【i 一6 7 抗原表达越强，密组织分亿越差，喉癌的恶性程度越高，c y d h E 在血管内皮细胞的表达也越强，说明c y c l ．m E 对于血管增生相对敏感，能起刭促进内皮细胞分裂增殖的作用间质中c y d i nE 阳性血管数又同临床分期，淋巴结转移密切相关，或许，c y c h nE 血管阳性表达可成为喉癌进程的一种评估手段4 ．结论总之，我们首次报道了呵d i l lE 在喉癌问质的表达情况及其意义，提出q ，d ．mE 表达或与喉鳞状 细胞癌的早期发生无关而且，我们认为州i nE 很大程度上不参与喉癌进展中癌细胞的增殖反应。

但c y c I h E 对血管增生起作用，可间接影响癌变进程关于这一课题今后应深入研究喉癌组织细胞c y d i nE 基因水平的表达，并对比q ，d ．mD I 和q ，d i I lE 的表达情况，以此来进一步印证和完善对q ，c l i I lE 功能的认识，从而确认它是否具有临床应用价值5 ．附图图I 高分化喉鳞癌H E 染色8 ×4 0图2c y c ¨nE 在喉鳞癌同质血管内皮的表达D A B 染色8 ×1 6图3c y c I i nE 在正常鳞状上皮基底层的表达图4c y c l i nE 在正常鳞状上皮基底层的表达D A B 染色8 ×1 6D A B 染色8 ×4 0图5K i ．6 7 在喉鳞癌的表达D A B 染色8 ×1 6图6K i 一6 7 在喉鳞癌的表达D A B 染色8 ×4 00o6 ．参考文献内蒙古医学院硕士研究生学位论文( 2 0 0 3 ) 0 61 ．s h mC J ．C a l l c e rc e l lq d ∞．s c i ∞c e ，1 9 9 6 ；2 7 4 ：1 6 7 2 一1 6 7 72 ．S h e r rc J ．n ep ㈣U e r k t I J r e ：c a n c e rc e u 叮c l er e 嘣钯d ．C a I l o e r R e s ，2 0 0 0 ；6 0 ( 1 4 ) ：3 6 8 9 —3 6 9 53 ．C ．C o r d o n —C a r d o ．M u t。