第14章维生素的分析课件.ppt

第十四章第十四章第十四章第十四章维生素类药物的维生素类药物的分析分析概概 述述维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的必需的 微量营养物资微量营养物资人体不能合成维生素人体不能合成维生素VitA、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等叶酸、烟酸、泛酸等分类分类按溶解度分按溶解度分 本章仅对维生素本章仅对维生素(A、B1、C、E)进行学习讨论进行学习讨论-H 维生素维生素A A醇醇-COCH3 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素A为一个具有共轭多烯醇侧链的为一个具有共轭多烯醇侧链的 环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物v 天然维生素天然维生素A主要是反式主要是反式v 易易发生脱氢生成去氢维生素发生脱氢生成去氢维生素A2v 易脱水生成去水维生素易脱水生成去水维生素A3v 易聚合反应生成无活性维生素易聚合反应生成无活性维生素A Av 或有金属离子存在时更易氧化或有金属离子存在时更易氧化共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（二）（二）环氧化物环氧化物VitA醛醛VitA酸酸（三）（三）、与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应（四）（四）、溶解性溶解性不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等CHCl3三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件条件 无水无醇无水无醇CHCl3 鉴别试验鉴别试验二、二、蓝色蓝色紫红紫红300-400nm扫描扫描max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）300-400nm扫描扫描384、367、389nm三个吸收峰三个吸收峰去水去水VitA（VitA3）VitABP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三）三、含量测定三、含量测定 目前各国药典均采用目前各国药典均采用紫外分光光度法紫外分光光度法替替代三氯化锑比色法代三氯化锑比色法（一）、紫外分光光度法（一）、紫外分光光度法 利用利用维生素维生素A A醇和其醋酸酯醇和其醋酸酯分子中具分子中具多烯共轭体系结构，在多烯共轭体系结构，在325325328nm328nm处处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。

有选择性吸收峰，故可进行含量测定立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（VitAVitA3 3）均对测定均对测定有干扰，有干扰，故采用故采用三三点校正法点校正法1 1：测定原理，三个波长的吸收度，公式：测定原理，三个波长的吸收度，公式计算校正吸收度，再计算含量故得计算校正吸收度，再计算含量该法的依据：名该法的依据：杂质的吸收在杂质的吸收在310340nm310340nm波长范围波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；度减小；物质对光的吸收具有加和性物质对光的吸收具有加和性2 2 波长的选择：最大吸收波长，及两侧各波长的选择：最大吸收波长，及两侧各选一波长选一波长 第一法（等波长差法）第一法（等波长差法）1 1=328nm=328nm，2=316nm，3=340nm，=12nm VitAVitA的的 maxmax（328nm328nm）Ch.PCh.P用于测定维生素用于测定维生素A A醋酸酯醋酸酯 第二法（等吸收比法）第二法（等吸收比法）分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点 A A 2 2=A A 3 3=6/7A=6/7A 1 1=325nm 325nm，2=310nm，3=334nm Ch.P用于测定维生素用于测定维生素A醇醇 3.杂质的吸收杂质的吸收 对对V.A有影响的杂质主要有以下几种：有影响的杂质主要有以下几种：(1)V.A2 和和V.A3(2)维生素维生素A的氧化产物的氧化产物(3)维生素维生素A在光照下产生的无活性的聚合物在光照下产生的无活性的聚合物(4)维生素维生素A的异构体等。

的异构体等以上这些杂质在以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸的波长范围内有吸收，干扰维生素收，干扰维生素A的测定4.测定方法测定方法（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素维生素A醋酸酯醋酸酯环己烷环己烷溶解）溶解）1）方法）方法 在在300、316、328、340、360nm测吸收测吸收度度2）计算计算 a.吸光系数吸光系数E1%1cm b.求效价求效价（IU/g）：效价指每：效价指每g供试品所含维生素供试品所含维生素的的A的国际单位数的国际单位数IU/g=c.求维生素求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量醋酸酯占标示量的百分含量 3）换算因子：）换算因子：4）A值的选择：值的选择：a.计算吸收度比值：与中国药典的吸收度比值相比计算吸收度比值：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02b.判断法判断法 最大吸收波长在最大吸收波长在326-329nm之间，且之间，且5个波长下的个波长下的绝对值差值均不超过绝对值差值均不超过0.02时，可直接用时，可直接用328nm波长波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。

处的测得的吸收度值求得吸收系数最大吸收波长在最大吸收波长在326-329nm之间，计算之间，计算5个波长下个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按，应按以下的方法进行判断：以下的方法进行判断：v若（若（A328校正校正-A328）*100%/A328 所得的数值在所得的数值在3.0%，则仍不用校正公式计算吸收度可直接，则仍不用校正公式计算吸收度可直接用用A328代入代入E=A/C.Lv若（若（A328校正校正-A328）*100%/A328 所得的数值所得的数值 在在-15.0%到到-3.0%，则应用则应用A328校正校正代入代入E=A/C.Lv若（若（A328校正校正-A328）*100%/A328 所得的数值在小于所得的数值在小于-15%或大于或大于+3%，则不能用本法测定，应使用第，则不能用本法测定，应使用第二法如果最大吸收波长不在如果最大吸收波长不在326-329nm之间，也之间，也不能用本法测定采用第二法不能用本法测定采用第二法第一法的校正公式为：第一法的校正公式为：A328校正校正=3.52（2 A328 A316-A340）（2）第二法（皂化法，第二法（皂化法，适用于适用于维生素维生素A醇醇）1）方法）方法 精密称取一定量的供试品，加精密称取一定量的供试品，加KOH乙醇溶乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、液后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇异丙醇溶解残渣并稀释成每溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素中含维生素A为为9-15个国际单位数的溶液，在个国际单位数的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸收度，并确定最波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为大吸收波长（应为325nm）。

2）计算计算 同第一法见书同第一法见书p250-2513）A值的值的选择选择如果最大吸收波长在如果最大吸收波长在323-327nm之间，之间，且且A300/A325比值比值0.73，按下法判断：，按下法判断：va.若（若（A325校正校正-A325）*100%/A325 所得的数值的绝所得的数值的绝 对值在对值在3%，可直接用，可直接用A325 代入代入E=A/C.Lvb.若（若（A325校正校正-A325）*100%/A325 所得的数值的绝所得的数值的绝 对值超过对值超过3%，则用应用，则用应用A325校正校正代入代入E=A/C.L如果最大吸收波长不在如果最大吸收波长不在323-327nm之间，之间，或或A300/A325比值比值0.73，表示供试品中杂质含量太高，表示供试品中杂质含量太高，应采用色谱法将未皂化部分纯化再进行测定应采用色谱法将未皂化部分纯化再进行测定第二法的校正公式：第二法的校正公式：A325校正校正=6.815 A325 2.555A310-4.260A3346.讨论讨论 1）.吸收度校正方法：吸收度校正方法：维生素维生素A醋酸酯：直线方程法（代数法）醋酸酯：直线方程法（代数法）维生素维生素A醇：相似三角形法（几何法或醇：相似三角形法（几何法或6/7定位法）定位法）2）.在应用三点校正法时，除其中一点是在最大在应用三点校正法时，除其中一点是在最大 吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。

如果仪器波长精度不准确时，会两侧进行测定如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差因此，在测定之前务必要校正波产生较大误差因此，在测定之前务必要校正波长，并可用全反式维生素长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对波长是否准确测定的样品不得少于两份波长是否准确测定的样品不得少于两份7.应用示例应用示例 维生素维生素A胶丸、维生素胶丸、维生素AD胶丸和维生胶丸和维生素素AD滴剂等均可采用本法测定滴剂等均可采用本法测定第一法第一法 第二法第二法测定对象测定对象 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯 维生素维生素A A醇醇方法方法 直接取样，测定直接取样，测定 皂化提取，测定皂化提取，测定溶剂溶剂 环己烷环己烷 异丙醇异丙醇 maxmax 328 nm 325 nm 328 nm 325 nm测定波长测定波长 5 5个个 4 4个个换算因数换算因数 1900 18301900 1830第一法与第二法的区别第一法与第二法的区别三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）（二）优点优点 简便简便 快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定（5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（二）二）蓝色蓝色+3SbClVitA（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法RP-HPLC同时测定人血清中同时测定人血清中VitA和和VitE的含量的含量1、仪器与分析条件：、仪器与分析条件：HPLC-UV、C18(3003.9 mm）、甲醇水（）、甲醇水（96：4）、流速：）、流速：1.2 ml/min、检测波长：检测波长：08min(330 nm),8 min后后(292 nm）内标：维生素内标：维生素A醋酸酯醋酸酯 维生素维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。

主要用于治疗维生素消化的正常功能主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病第二节第二节 维生素维生素B1氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)HClCl-嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵 为两个碱性集团为两个碱性集团（一）（一）溶解性溶解性1、易溶于水，乙醇微溶，、易溶于水，乙醇微溶，乙醚不溶乙醚不溶2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共轭双键共轭双键max=246nm结构与性质结构与性质一、一、（三）（三）硫色素反应硫色素反应与生物碱沉淀剂与生物碱沉淀剂（碘化汞钾等）（碘化汞钾等）（四）生物碱沉淀反应（四）生物碱沉淀反应嘧啶环嘧啶环 噻唑环噻唑环 （五）氯化物特性五）氯化物特性 本品为盐酸盐，呈氯化物的反应本品为盐酸盐，呈氯化。