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微生物实验微生物实验3 3空气的细菌学检查空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 ＝ 50,000N÷AT ≈86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟) CFU：colony forming unit 细菌的纯培养v挑选单菌落:™脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明™粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径2～3mm致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径1～2mm™选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种v斜面接种法P10 （1组4支）™甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面™乙→普通平板→白色菌落→1支斜面™丙→伊红美蓝→紫黑菌落→1支斜面™丁→伊红美蓝→粉红菌落→1支斜面★标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。

★培养时间不得超过18小时斜面接种法P10甲→黄色,乙→白色,丙→紫黑,丁→粉红标记：组号，颜色安全警告v接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒v气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的v实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌奥林巴斯奥林巴斯 CX21 CX21型型 生物显微镜生物显微镜（（实验柜内，实验柜内，每人一台）每人一台）注意：只能横放，不得竖放奥林巴斯 CX21型 生物显微镜使用须知v显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作v在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏显微镜各部件名称开关与调整光强v开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相相反反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡v电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭v按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动则变暗。

放置标本v按箭头方向转动粗调旋钮②降下载物台v按箭头方向拉开载物台标本夹③ ，自前向后将标本片放入平台，标本夹③ 轻轻放回原位v转动上侧垂直移动杆④和下侧水平移动杆⑤，移动标本至光路中间载物台位置刻度v载物台上的刻度方便确定标本位置，标本移动后可以快速回到原位™水平刻度的标识位置以机械载物台的①位置来读取™垂直刻度的标识线以②的位置来读取聚焦v从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近接近标本一边看目镜，一边慢慢逆逆箭头方向转动粗调旋钮①， 使载物台下降下降v看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦★10倍物镜的工作距离工作距离（WD，从物镜到标本的 距离）为10.5mm ★油镜的WD为0.13mm调整瞳距v调整瞳距是调整双目间的距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止观察时的疲劳v方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右的视野一致v标识●的位置表示瞳距请记住自己的瞳距值，以便下次观察时调整调整屈光度数v调整观察者左右视力™以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调粗微调旋转盘，对好焦距™以左眼看左侧的目镜，旋转屈光度屈光度调整环①，对好焦距调整聚光镜位置和孔径光阑v用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。

v在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面转换物镜v旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方100倍浸油物镜使用方法v油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油v旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距v如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡显微镜油镜的使用P13v10×物镜→标本位置→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源v油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 →擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜v显微镜罩上防尘罩→ 横放在实验柜内★实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请使用离你最近的电源插座 细菌的显微镜检查法v显微镜：光学显微镜v目镜：10倍v物镜：油镜头（90或100倍）v放大倍数：10×90或100＝900或1000v镜油：香柏油或石蜡油v香柏油折射率（n＝1.515），玻片折射率（n＝1.52），石蜡油（n＝1.46），空气（n＝1.00）。

★油镜使用完毕必须擦拭油镜头油透镜光线载玻片思考题v在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?v空气的卫生标准规定如何?v你的实验结果说明了什么问题?v怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌?v菌落特征主要描述哪几方面问题？任何挑选单菌落？ 医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）™空气、手指皮肤细菌学检查结果分析™菌落特征观察P11™细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）™油镜使用方法（讲解）™脓汁标本检验 （录像）™肠道致病菌的分离鉴定（录像）常用器材摆放顺序：电源插座常用器材摆放顺序：电源插座→试管架试管架→酒精灯酒精灯→污物盘试管架上器材：按接种针、试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火接种环、油性笔和打火机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐 实验室器材实验室器材 整齐有序整齐有序。