遗传学大实验.ppt

遗传学综合大实验主要内容,蚕豆多倍体诱导与细胞遗传学鉴定 蚕豆组型分析（材料预处理、根尖压片） DNA的孚尔根染色鉴定 染色体结构与数目变异的观察与分析 临时片与永久片的制作,第一天安排,上午： 组型分析材料预处理当蚕豆根尖长至1cm时，切下置于0.1%秋水仙碱溶液25℃处理3hr,水洗,卡诺液(3乙醇：1冰乙酸)固定,用于根尖压片 多倍体诱导处理取刚萌动的蚕豆根尖经0.1%秋水仙碱溶液25℃处理24hr多倍体材料的固定：上一个班的材料 普通根尖压片（洋红染色法） 下午： 染色体结构变异观察（60Coγ射线处理的蚕豆种子根尖） 根尖临时片和永久片制作,第二天安排,上午： 多倍体蚕豆冲洗培养：水洗后插入砂盘发芽 DNA测定：蚕豆根尖处理，脱色碱性品红染色3～5hr 多倍体蚕豆根尖压片（洋红染色法）及观察 永久片制作 下午： DNA测定蚕豆根尖压片 多倍体、结构变异永久片制作,第三天安排,继续完成多倍体、结构变异永久片制作,蚕豆多倍体诱导,将刚萌动的种子横放在培养皿中（有根的一侧朝下），然后滴入0.1%的秋水仙碱溶液，浸没根尖即可 25℃处理24hr后，充分洗净移入砂盘中培养 2～3天后，将膨大的根尖切下，用卡诺液(3乙醇：1冰乙酸)固定4～24hr。

将固定好的根尖置入70%洒精中，待下次实验时进行细胞学鉴定 秋水仙碱是剧毒药品实验完成后，一定要将手洗净；实验时，不得将饭盒食物带入室内脱氧核糖核酸（DNA）的测定,一、实验目的：学习掌握细胞核内DNA的鉴定方法-孚尔根(Feulgen)染色法 二、实验材料：蚕豆根尖 三、实验原理：DNA经温盐酸水解处理后，其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打断，形成醛基（-CHO），醛基与脱色碱性品红（席夫试剂）作用显紫红色，根据紫红色的出现而鉴定DNA的存在席夫(Schiff)试剂：碱性品红 + NaHSO3 + HCl,四、实验步骤 取固定后的蚕豆根尖放入小药瓶中，在60℃1N HCl中水解5～12min，再放入冷1N HCl 处理1min以不处理作对照） 将1N HCl倒掉水洗3次后吸干，放入脱色碱性品红，用黑纸包住药瓶，放在暗处染色3～5hr 倒掉染液，用SO2溶液冲洗3次，每次1min 倒掉SO2液，加H2O（切记不能把根尖暴露在空气中,防氧化） 取根尖顶端（紫红色部分）,放在载玻片上，再用另一载玻片呈十字形压片，分开后滴上45%醋酸液1滴加盖片，用吸水纸吸掉多余溶液 显微镜下观察，选染色较深，细胞呈薄层分散的临时片，交老师当场记分。

临时片的制作,取固定好的根尖水洗3次，把根尖放入洗净的小药瓶中，加5ml左右的1N HCl，置入60℃水浴锅中水解8～12 min，蒸馏水漂洗2～3次，取少量根尖分生组织置于载玻片的中央，用镊子和解剖针将组织轻轻捣碎、分散并去掉残渣用另一载玻片呈“十”字型压片（不要移动）后，用铅笔橡皮头（或解剖针）垂直轻敲，分开后加1滴醋酸洋红染色5～10min盖上盖玻片，用吸水纸吸干多余的染液镜检后，若有好的临时片再做永久制片如果染色不深，可以复染烤片是制片中一个极重要的过程，方法是将载玻片在酒精灯火焰上来回移动，一边用手摸载玻片的底下，如烫手即可在减数分裂涂抹制片中，烤片更为重要，但必须染色较深，这样才能使细胞核变深，细胞质变浅 理想制片标准：背景干净、染色到位、细胞分散、分裂相丰富,永久片制作方法,脱盖玻片：把临时片翻转，盖玻片朝下，放入盛有脱盖玻片液（1份45%乙酸+1份95%乙醇）的培养皿（编号①）中，将载玻片的一端搁在短粗玻璃棒上，呈倾斜状，让盖玻片自然滑落盖玻片脱落后2～3min，分别取出盖玻片和载玻片，用吸水纸吸干，注意不要触动载玻片上的材料脱水、透明：取三只培养皿，分别编号②、③、④，在其中各放入一根短粗玻璃棒，顺序加入下列脱水剂：②号培养皿加2份95%酒精+1份正丁醇；③号培养皿加1份95%酒精+2份正丁醇；④号培养皿加正丁醇。

操作时用鸭嘴镊子把①号培养皿中已脱落的盖玻片和载玻片取出，稍干后迅速放入②号培养皿中，依次脱水、透明，最后放入④号培养皿中在各编号培养皿中分别浸泡5min左右整个脱水过程中，必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以免造成玻片上材料漂失封片：从④号培养皿中取出载玻片和盖玻片置于滤纸上吸去多余的溶剂，在载玻片中央载有材料处滴上1小滴中性树胶，将盖玻片盖回原来位置进行封片覆盖盖玻片时，要注意用鸭嘴镊子夹住盖玻片，轻轻地倾斜覆盖，使之随着树胶的扩展自然下滑，切不可施加压力或移动盖玻片如发现封片中树胶有气泡，应让其自行逸出或用针尖烧热后烫一下，使气泡逸出如果树胶滴得过多溢出玻片四周，应待树胶晾干后，用脱脂棉蘸二甲苯轻轻擦净溢出的树胶封片后平放晾干，进行镜检，物象清晰符合要求的保存,并贴上标签,注明标本名称、作者姓名和制片日期望同学们耐心细致地做好每一个实验！,。